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Articles by Rushdia Z. Yusuf in JoVE
JoVE General
Homing des cellules hématopoïétiques de la moelle osseuse
Center for Regenerative Medicine, MGH - Massachusetts General Hospital
Cet article décrit un protocole utilisé pour étudier le homing des cellules hématopoïétiques à leurs niches dans la moelle osseuse.
Other articles by Rushdia Z. Yusuf on PubMed
Surexpression Des Gènes MAGE/GAGE Dans Les Lignées De Cellules Cancéreuses Humaines Du Paclitaxel/doxorubicine-résistant
Des études antérieures visant à identifier les gènes de résistance de paclitaxel dans un sous-clone résistant au paclitaxel de la lignée de cellules de cancer de l'ovaire humain SKOV-3 identifié un antigène de testicule cancer roman, gène de résistance associés à Taxol 3 (TRAG-3). Parce que l'enquête suggère que TRAG-3, localisé sur le chromosome Xq28, ne participe pas directement dans le phénotype résistant au paclitaxel, il a émis l'hypothèse que TRAG-3 pourrait être lié à un gène voisin qui est directement impliqué dans le phénotype résistant aux médicament, ou alternativement, la surexpression de TRAG-3 peut-être être attribuable à la co-régulation avec d'autres antigènes du testicule cancer. Faire la distinction entre ces deux hypothèses, l'expression des gènes ce flanc que TRAG-3 a été évaluée, nommément la centrine 2 gènes et plusieurs membres de la groupe de gènes MAGE. Analyse du Nord illustre la surexpression de MAGE2 mais pas centrine 2. Extension de l'analyse d'autres antigènes de testicule cancer représentant voisines et les voisins non révèle la surexpression des MAGE3, MAGE6, MAGE11 et MAGE12, aussi bien que GAGE-2, 4 GAGE, GAGE-5, GAGE-6 et GAGE-7 (ordonné en clusters sur Xp11) dans SKOV-3(TR), comparativement à SKOV-3. En outre, Affymetrix-analyse de l'expression génique dans les sous-clones SKOV-3 avec résistance variable paclitaxel illustre la surexpression de gène MAGE survient tôt dans le développement du phénotype résistant au paclitaxel, tandis que la surexpression de gène GAGE se produit un peu plus tard. Évaluation du sein supplémentaire et de lignées cellulaires de cancer de l'ovaire révèle MAGE/GAGE surexpression dans les deux lignées cellulaires paclitaxel et doxorubicine résistant, considérant qu'il est résistants à la gemcitabine sous-clones de plusieurs lignées cellulaires de cancer de l'ovaire, notamment SKOV-3(GR), ne révèle aucun changement dans l'expression de MAGE/GAGE. Pour déterminer si la surexpression de gène MAGE contribue directement au phénotype résistant aux médicament, MAGE2 ou MAGE6, ADNc a été introduit dans la lignée de cellules de cancer de l'ovaire humain paclitaxel sensibles OVCAR8. analyse de cytotoxicité 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide de transfectants MAGE2 et MAGE6 montre une augmentation de 4 fois dans la résistance au paclitaxel et augmentation deux fois dans la résistance à la doxorubicine, mais pas à d'autres médicaments, tels que le topotécan et cisplatine, grâce à un mécanisme de résistance-1 nonmultidrug. MAGE2 ou MAGE6 surexpression induit également un avantage de croissance dans les cellules transfectées OVCAR8. Ces études montrent que l'acquisition in vitro de la résistance de paclitaxel et doxorubicine peut être associée à l'augmentation de l'expression d'une variété de voisines et les voisins des gènes du cancer des testicules antigènes. Cela ne semble pas être une conséquence de l'instabilité génétique aléatoire ou amplification génomique du chromosome X. Ces antigènes, en raison de l'expression limitée dans les tissus normaux, peuvent être des cibles pour l'immunothérapie et de nouvelles stratégies thérapeutiques dans le traitement des tumeurs épithéliales résistants à la chimiothérapie.
Description Moléculaire De L'évolution De La Résistance De Paclitaxel Dans La Lignée De Cellules De Carcinome Ovarien Humain SKOV-3
Cancer de l'ovaire est actuellement la malignité gynécologique plus meurtrier aux Etats-Unis. Bien qu'il existent des traitements efficaces, l'acquisition de la multirésistance au sein de la persistance de cellules tumorales restitue des thérapies curatives insaisissable pour la plupart des femmes atteintes de cancer de l'ovaire. Pour tenter de mieux cerner l'évolution de la résistance de paclitaxel, trois sous-lignées SKOV-3 ont été sélectionnées au cours de cycles successifs de l'exposition à l'augmentation des concentrations de paclitaxel. Les sous-lignées ont été sélectionnées pour représenter le début (0,003 micro M), intermédiaire (micro 0,03 M) et résistance de paclitaxel (micro 0,3 M) fin. ARN de ces lignées cellulaires, SKOV-3(0.003TR), SKOV-3(0.03TR) et SKOV-3(0.3TR), ainsi que de la lignée cellulaire parent SKOV-3, a été analysée par tableau d'ADNc pour évaluer les profils d'expression de transcription. Tableaux ont été réalisés à l'aide de tableaux d'Affymetrix HG-U95Av2, qui contiennent des sondes pour environ 9600 gènes humains connus. Les intensités de signal ont été calculées par Microarray Suite 5.0 (Affymetrix, Santa Clara, Californie). Profils d'expression ont été analysés par Affymetrix données Mining Tool 3.0 avec filtrage des modèles d'expression de pli changement dans l'expression (maximum divisé par la valeur d'expression minimale/gène) et pour les variations d'expression (maximum moins expression minimum valeur/gène). Cette analyse a rejeté environ 11 000 des quelque 12 000 modèles d'expression. Les patrons d'expression environ 1000 restants ont été normalisées et réparties en 20 partitions d'une carte auto-organisatrice (SOM). Le SOM qui en résulte constitue une discrimination entre les gènes qui sont exprimés de façon différentielle dans tôt versus intermédiaire par rapport à la résistance fin de paclitaxel. Par exemple, expression de transcription de multirésistance 1 n'est pas élevée en SKOV-3(0.003TR) comparativement aux parents SKOV-3 mais montre une expression élevée dans SKOV-3(0.03TR) et SKOV-3(0.3TR). En revanche, l'analyse SOM montre (SKOV-3(0.003TR)) transcriptionnelles changements précoces dans une grande variété de gènes, y compris les familles de gènes impliqués dans la croissance de cellule/entretien, structure cellulaire, transduction du signal et la réponse inflammatoire. L'utilisation d'analyse de tableau avec SOMs dans sous-lignées avec résistance progressive paclitaxel peut définir avec succès une évolution de la résistance. Une telle analyse peut être utile de définir des familles de gènes candidats impliqués dans le phénotype de résistance aux médicaments au début.
Des Anomalies Cytogénétiques Dans Les Produits De Conception : Une Relation Revisitée
Évaluation cytogénétique du produit de conception (POC) est essentielle pour déterminer la cause de la perte de la grossesse et de faciliter le diagnostic prénatal des grossesses ultérieures. L'objectif de cette étude est double. (1) Pour le profil des anomalies cytogénétiques, leur relation avec l'âge maternel et le diabète gestationnel et analyser les rapports de sexe dans notre série de cas de 2052 échantillons consécutifs du POC visés au Baystate Medical Center, laboratoire de génétique entre janvier 1992 et janvier 1999. (2) De présenter un examen exhaustif de ces données, publiées au cours des 15 dernières années, afin d'étudier les différences temporelles dans les paramètres ci-dessus et de rendre cette information facilement accessible pour la cytogénétique et conseillers en génétique.
Description Des Gènes Associés à La Résistance De Paclitaxel Dans L'ovaire Et Du Sein De Lignées De Cellules Cancéreuses
Pour identifier les gènes impliqués dans le phénotype de résistance de paclitaxel.
Surexpression De GBP1 Est Associée à Un Phénotype De Résistance De Paclitaxel
Dans la recherche de nouveaux gènes impliqués dans le phénotype de résistance de paclitaxel, des études antérieures de l'expression génique dans les lignées cellulaires résistantes au paclitaxel et leurs lignées parentales de paires sensibles aux drogues à l'aide de haute densité Affymetrix GeneChip tableaux identifiés guanylate-binding protein 1 (GBP1) gène comme une transcription surexprimée. Le gène GBP1 code pour une GTPase grande qui est induite par l'interféron gamma (IFN-gamma) dans une variété de cellules eucaryotes. Dans le présent rapport, nous caractériser GBP1 et démontrent que GBP1 expression constamment surexprimés dans 7 des 8 paclitaxel ou lignées de cellules cancéreuses humaines résistant à la doxorubicine par rapport à son expression dans les lignées parentales sensibles aux drogues. Analyse de l'expression GBP1 en utilisant le tableau de profilage du Cancer a montré que GBP1 est partout exprimé avec aucune différence significative dans les niveaux d'expression entre le tissu normal et la tumeur. Analyse parallèle du Cancer Cell Line profilage tableau a révélé que GBP1 expression dans la majorité des lignées cellulaires dérivées de tumeurs humaines d'origine différents tissus fut Poussée à des niveaux variables, après exposition à des agents de stress multiples dont le paclitaxel et doxorubicine. Important, expression stable d'un transgène de GBP1 dans la lignée de cellules de cancer de l'ovaire sensible au paclitaxel OVCAR8 ne suffisait pas conférer résistance modérée de paclitaxel. Nos données suggèrent qu'augmentation de l'expression du gène GBP1 peut jouer un rôle important dans le développement de multirésistance (MDR).
Le Capteur De LKB1 Métabolique Maintient Hématopoïétique Survie De Cellules Souches
Les cellules souches hématopoïétiques (CSH) peut convertir entre les Etats de croissance qui ont marqué les différences dans les besoins bioénergétiques. Bien que souvent au repos chez les adultes, ces cellules deviennent proliférative sur demande physiologique. Équilibrer énergétique HSC en réponse à la disponibilité des nutriments et de l'état de croissance est mal comprise, mais essentiel pour le dynamisme du système hématopoïétique. Ici, nous montrons que le suppresseur de tumeur LKB1 est essentielle pour le maintien de l'homéostasie énergétique dans les cellules hématopoïétiques. LKB1 inactivation chez la souris adulte provoque une perte de quiescence HSC suivie par l'épuisement rapide de tous les sous-populations hématopoïétiques. LKB1-déficientes cellules de moelle osseuse présentent des défauts mitochondriaux, des altérations des lipides et du métabolisme des nucléotides, et l'épuisement des ATP cellulaire. Les effets hématopoïétiques sont en grande partie indépendante de la réglementation LKB1 de la protéine kinase activée par l'AMP (AMPK) et la cible mammalienne de la rapamycine (mTOR) de signalisation. Au lieu de cela, ces données définissent un rôle central pour LKB1 dans la restriction de l'entrée en HSC cycle cellulaire et dans le maintien de l'homéostasie énergétique largement dans les cellules hématopoïétiques à travers un poste de contrôle métabolique roman.
Inhibition De La Signalisation Protéines Morphogénétiques Osseuses Atténue L'anémie Associée à L'inflammation
L'anémie de l'inflammation se développe dans les milieux de la maladie inflammatoire, infectieuse, néoplasique ou chronique. Dans cette forme très répandue de l'anémie, les cytokines inflammatoires, y compris l'IL-6, stimuler l'expression hépatique de l'hepcidine, qui régule négativement la biodisponibilité du fer en inactivant la ferroportine. L'hepcidine est réglementée par la transcription de l'IL-6 et la protéine morphogénétique osseuse (BMP) de signalisation. Nous émettons l'hypothèse que l'inhibition de signalisation BMP peut réduire expression de l'hepcidine et d'améliorer hypoferremia et de l'anémie associée à l'inflammation. Dans les cellules d'hépatome humain, l'IL-6 induite par expression de l'hepcidine, un effet qui a été inhibée par le traitement avec un inhibiteur de type de récepteur de BMP I, LDN-193189, ou un ligand BMP antagonistes noggine et ALK3-Fc. Chez le poisson zèbre, l'induction de l'expression de l'hepcidine par l'expression transgénique de l'IL-6 a également été réduite par LDN-193189. Chez la souris, le traitement par l'IL-6 ou de la térébenthine a augmenté expression de l'hepcidine et la réduction du fer sérique, les effets qui ont été inhibées par LDN-193189 ou ALK3-Fc. Le traitement de la térébenthine chronique conduit à une anémie microcytaire, qui a été prévenue par l'administration concomitante de LDN-193189 ou atténué quand LDN-193189 a été administré après l'anémie a été créé. Nos études appuient le concept qui agissent BMP et de l'IL-6 ainsi que pour réglementer l'homéostasie du fer et suggèrent que l'inhibition de la signalisation BMP peut être une stratégie efficace pour le traitement de l'anémie de l'inflammation.
