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Articles by Ruth E. Stark in JoVE
JoVE General
El aislamiento y estudio biofísico de las cutículas de fruta
1Department of Chemistry, City College of New York, City University of New York Graduate Center and Institute for Macromolecular Assemblies, 2Department of Chemical Engineering, City College of New York
Órganos aéreos de las plantas están protegidos por la cutícula, una supramolecular biopolyester la cera de montaje. Se presentan los protocolos para controlar la eliminación selectiva de epi-y las ceras de la cutícula intracuticular fruta de tomate en las escalas moleculares y micro por la RMN en estado sólido y la microscopía de fuerza atómica, respectivamente, y para evaluar la capacidad de entrecruzamiento de ingeniería biopolyesters cuticulares.
Other articles by Ruth E. Stark on PubMed
Titulación De Bolsa Y Estudios De Hígado Graso ácido-La Unión a Proteínas Con 13 C-etiquetados Larga Cadena De ácidos Grasos
Uniformemente (13) C-etiquetados larga cadena de ácidos grasos fueron usados para investigar la unión del ligando a la rata hígado graso ácido-proteína de unión (LFABP), un miembro atípico del ácido graso-proteína de unión (FABP) familia que se une más de una molécula de cadena larga de ácidos grasos, acomoda una variedad de ligandos diversos, y exhibe difusión mediada por el transporte de lípidos de las membranas. Dos conjuntos de (1) H-(13) resonancias C se encontraron en una serie de titulación de los espectros de RMN de oleato-LFABP complejos, lo que indica que dos moléculas del ácido graso se encuentra en la cavidad proteína. Sin embargo, no hay resonancias distintas se observaron para el exceso de ácido graso en solución, lo que sugiere que al menos un ligando se somete a un intercambio rápido con oleato en la solución a granel. Un tipo de cambio de 54 + / - 6 s (-1) entre los dos conjuntos de resonancias se midió directamente utilizando (13) C z, z-intercambio espectroscopia. A la luz de estas mediciones de RMN, los posibles mecanismos moleculares para el proceso de intercambio de ligando son evaluados y sus implicaciones para el anómalo mecanismo de transporte de ácidos grasos de LFABP se discuten.
Estudios Químicos Sobre El Mecanismo Antioxidante De Las Catequinas Del Té: Análisis De Los Productos De Reacción De Radicales De Catequina Y Epicatequina Con 2,2-difenil-1-picrilhidrazil
Catequinas de té, una clase importante de polifenoles, se ha demostrado que tienen amplio espectro de actividad antitumoral cree que es debido principalmente a su efecto antioxidante. En este estudio, el comportamiento de captación de radicales libres de las catequinas en 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) fue estudiada. Dos productos de reacción de (+)-catequina, y dos productos de reacción de (-)-epicatequina se purificaron e identificaron. Sus estructuras se determinaron sobre la base de detallada de alto campo 1-D y 2-D análisis espectral de RMN. Elucidación de la estructura de estos productos puede ayudar a comprender los mecanismos específicos de reacciones antioxidantes. Un posible mecanismo de la formación de productos de reacción se sugiere.
Caracterización De La Pirimidina 2-metil-4-amino-5-(2-metil-3-furylthiomethyl) a Partir De La Degradación Térmica De Tiamina
Hidrocloruro de tiamina fue degradado térmicamente en tampón fosfato (pH 6,5) a 110 grados C durante 2 h. Un producto de descomposición principal se aisló por cromatografía en columna y estructuralmente identificado por técnicas de espectrometría ((1) H RMN, (13) C RMN, 2D NMR y MS) como 2-metil-4-amino-5-(2-metil- 3-furylthiomethyl) pirimidina (MAMP). La vía de la posible formación de MAMP se estudió el uso de dos sistemas modelo. Se propone que MAMP está formada por ataque nucleofílico de 2-metil-3-furanthiol sobre la tiamina.
Desbloqueo De La Estructura Molecular De La Melanina Fúngica Con 13C Etiquetado Biosintética Y NMR De Estado Sólido
Las melaninas son pigmentos enigmáticas se encuentran en todos los reinos biológicos que están asociados con una variedad de funciones, incluyendo la virulencia microbiana. A pesar de ser omnipresente en la naturaleza, los pigmentos de melanina han resistido durante mucho tiempo a nivel atómico examen estructural, debido a su insolubilidad y la organización amorfa. Cryptococcus neoformans es un hongo patógeno humano que melanizes sólo cuando se les proporciona sustrato exógeno, lo que ofrece un sistema único para explorar cuestiones relacionadas con la estructura de la melanina en el nivel molecular. Hemos explotado el requisito de sustrato exógeno en la síntesis de melanina, así como la capacidad de los de alta resolución de estado sólido por resonancia magnética nuclear (RMN) para establecer la composición predominantemente alifáticos de melanina L-dopa y la introducción (13) C etiquetas que permiten la identificación de carbonos proximales en el biopolímero en desarrollo. Por hinchazón muestras sólidas de melanina en disolventes orgánicos y el uso de dos dimensiones RMN heteronuclear en conjunción con la magia de ángulo hilatura, hemos identificado patrones de unión químicos típicos de alcano, alqueno, el alcohol, cetona, éster, y indol grupos funcionales. Estos hallazgos demuestran la viabilidad de un nuevo enfoque para determinar la estructura de melanina mediante marcaje metabólico y espectroscopia de RMN.
Los Estudios Químicos Del Mecanismo Antioxidante De Las Catequinas Del Té: Productos De Reacción De Radicales Epicatequina Con Radicales Peroxilo
Té catequinas, una clase importante de polifenoles, se ha demostrado que tienen actividad antioxidante y se cree que actúan como antioxidantes en los sistemas biológicos. Sin embargo, los mecanismos de las reacciones de los antioxidantes siguen sin estar claros. El objetivo de este estudio fue caracterizar los productos de reacción de epicatequina con los radicales peroxilo generados por termólisis del iniciador azo azo-bisisobutyrylnitrile (AIBN). Elucidación estructural de estos productos puede ayudar a comprender los mecanismos específicos de reacciones antioxidantes. Ocho productos de reacción se aislaron e identificaron utilizando alto campo 1D y 2D análisis espectral de RMN. La observación de estos compuestos se confirmó que el anillo B es el sitio inicial para la formación de productos de reacción en el sistema oxidante radicales peroxilo.
Síntesis Enzimática De Derivados Del Té Teoflavina Y Sus Actividades Anti-inflamatorias Y Citotóxicas
Los derivados basados en un esqueleto benzotropolone (9-26) han sido preparados por el acoplamiento enzimático (rábano peroxidase/H2O2) de pares seleccionados de los compuestos (1-8), uno con un resto vic-trihidroxifenilo, y el otro con una orto- estructura de dihidroxifenil. Algunos de estos compuestos se han encontrado para inhibir inducida por TPA edema de oreja ratones, óxido nítrico (NO), síntesis y liberación de ácido araquidónico por LPS-células RAW 264.7 estimuladas. Sus actividades citotóxicas contra KYSE 150 y 510 humanos carcinoma esofágico de células escamosas y HT 29 células humanas de cáncer de colon también fueron evaluados.
Nuevos Derivados De Dibenzotropolone Caracterizado De Té Negro Con LC / MS / MS
Teaflavinas y terubiginas son pigmentos importantes en el té negro, y se acepta generalmente que son producidos por la oxidación de flavan-3-oles (catequinas) durante la fermentación del té. En el curso de los estudios sobre el mecanismo de oxidación de los polifenoles del té, especialmente la formación de terubiginas, un método que combina la síntesis enzimática y el análisis de LC / ESI-MS / MS fue desarrollado para realizar la búsqueda de nuevos polímeros de mayor peso molecular de té negro. Tres dibenzotropolones nuevos theadibenzotropolone A, B y C, junto con un nuevo tribenzotropolone, theatribenzotropolone A, fueron formados por la reacción de teaflavinas y catequinas de té con peroxidasa de rábano picante en presencia de H (2) O (2). Las estructuras de estos nuevos derivados benzotropolone fueron determinadas sobre la base de análisis EM y RMN 2D espectroscópicos. La existencia de estos compuestos en el té negro se caracterizó por LC / ESI-MS / MS. Theadibenzotropolone A y B fueron los primeros benzotropolone tipo trímeros de catequinas que se encuentran en el extracto de té negro. La observación de que los grupos éster de galoil teaflavinas puede ser oxidado para formar di-o tri-benzotropolone esqueletos fuertemente a entender que este tipo de oxidación es una vía importante para ampliar el tamaño molecular de terubiginas.
Síntesis Y Estructura De Identificación De Los Conjugados De Tiol (-)-galato De Epigalocatequina Y Sus Niveles Urinarios En Ratones
(-)-Galato de epigalocatequina (EGCG), el compuesto más abundante y más activa biológicamente en el té, se ha propuesto tener muchos efectos beneficiosos para la salud. El destino metabólico de EGCG, sin embargo, no se entiende bien. En el presente estudio, se encontró que EGCG puede ser oxidado por la peroxidasa y peróxido de hidrógeno y después se hace reaccionar con cisteína o glutation para formar conjugados. Las estructuras de los conjugados de cisteína y glutatión de EGCG se identificaron utilizando 2D NMR y MS. Dos conjugados tiol de EGCG (2'-cisteinil EGCG y 2 ''-cisteinil EGCG) fueron identificados por análisis ESI-LC-MS/MS de las muestras de orina de ratones que 200 ó 400 mg / kg de EGCG, ip Estos conjugados no eran encontrado en las muestras de orina de los ratones después de recibir EGCG a 50 mg / kg, ip o IG 2000 mg / kg, o en la orina humana tras el consumo de 3 g de sólidos de té descafeinado verde (que contiene 333 mg de EGCG). A dosis altas, EGCG se cree que se oxida para formar quinona EGCG, que puede reaccionar con glutatión para formar los conjugados tiol. Estos resultados sugieren que cantidades detectables de conjugados tiol de EGCG se forman sólo después de las dosis más altas de EGCG se administró a los ratones.
Modelado Suberización Con La Polimerización Catalizada Por Peroxidasa De ácidos Hidroxicinámicos: Las Reacciones De Acoplamiento Cruzado Y La Dimerización
Una peroxidasa aniónica de patata (EC 1.11.1.7, APP) se cree que participan en el suberización después de la lesión se aisló a partir de segmentos de Solanum tuberosum con el fin de dilucidar los primeros pasos de la polimerización dehydrogenative entre pares de diferentes ácidos hidroxicinámicos (FA, Café, CA y SA) presentes en los tejidos vegetales de cicatrización de heridas. El uso de un comercial peroxidasa de rábano (HRP)-H2O2 sistema catalítico dio los principales productos idénticos en estas reacciones de acoplamiento, proporcionando cantidades suficientes para la purificación y elucidación estructural. Utilizando una mezcla equimolar de pares de precursores de ácidos hidroxicinámicos suberina, sólo ácido cafeico está acoplado a ácido ferúlico y ácido sinápico en separadas de acoplamiento cruzado reacciones. Para los otros sistemas, el HRP y APP reaccionar como sigue: (1) preferentemente con ácido ferúlico en una mezcla de reacción que contenía los ácidos p-cumárico y ferúlico, (2) con ácido sinápico en una mezcla de ácidos p-cumárico y sinápico; ( 3) con ácido sinápico en una mezcla de ácidos ferúlico y sinápico; (4) con ácido cafeico en una mezcla de reacción de los ácidos p-cumárico y cafeico. Los productos resultantes, aislado e identificado por RMN y análisis EM, tenía predominantemente beta-beta-gamma-lactona y beta-5 marcos benzofurano moleculares. Cinco de acoplamiento cruzado productos se describen por primera vez, mientras que los dehydrodimers beta-O-4 identificados a partir de la reacción ácido cafeico y ácido sinápico acoplamiento cruzado se conocen materiales que son muy abundantes en las plantas. Estas tendencias de reactividad dar lugar a hipótesis comprobables acerca de la arquitectura molecular de los materiales insolubles suberina protectores de las plantas, como complemento de un análisis previo de los componentes monoméricos por GC-MS y la identificación de polímero grupo funcional de la RMN en estado sólido, respectivamente.
Magia De ángulo Spinning Estudios De RMN De La Pared De La Célula Vinculada Aromático-alifáticos Biopolyesters Asociados Con El Fortalecimiento De La Adhesión Intercelular De Papa (Solanum Tuberosum L.) Tuber Parénquima
Fortalecimiento de adhesión intercelular, un fenómeno que compromete la textura y la calidad comestible de patatas (Solanum tuberosum L.), ha sido inducida reproducible por la exposición a pH bajo soluciones de ácido acético bajo condiciones de cultivo de tejidos. Los tejidos del parénquima resultantes han sido examinados por estado sólido por resonancia magnética nuclear (RMN) con el fin de caracterizar el biopolímero (s) pensado para ser asociado con este síndrome. Polarización cruzada mágica ángulo hilatura (CPMAS) (13) C RMN se ha utilizado para establecer la presencia de un polifenol-suberina-aromático-alifáticos como poliéster dentro de una matriz de polisacáridos de células abundante pared en los tubérculos de patata que exhiben endurecimiento debido a reforzarse adhesión intercelular . Desfase dipolar y CP experimentos químicos cambio de anisotropía sugieren que el dominio aromático está compuesta principalmente por grupos guayacil y sinapílico. Dos dimensiones de ancho de línea experimentos de separación de demostrar que el biopolímero asociado con parénquima endurecimiento contiene rígidas paredes celulares de polisacáridos y móviles alifáticos de cadena larga de ácidos grasos; (1) H experimentos de difusión de espín muestran que estas cadenas alifáticas son flexibles proximal a ambos los compuestos fenólicos y una subpoblación de los polisacáridos de la pared celular. Finalmente, de alta resolución RMN MAS de muestras de parénquima se hinchó en DMSO en conjunción con dos dimensiones a través del enlace a través del espacio y espectroscopía de RMN proporciona evidencia de enlaces covalentes entre el polisacárido, fenólica, y dominios alifáticos de la adhesión intercelular de fortalecimiento biopolímero en patata parénquima tejido.
Utilizando ácido Trifluoroacético Para Aumentar Estudios De La Papa Estructura Molecular Suberina
Tiempos de reacción sistemáticamente variadas y concentraciones de ácido trifluoroacético (TFA) se han utilizado para eliminar los polisacáridos asociados con suberina aislados de patata herida peridermis, aumentando así las determinaciones espectroscópicas de la estructura molecular de este poliéster planta protectora. Los tratamientos con TFA diluido dejó un material residual insoluble para que tanto en estado sólido 13C y espectros de 1H RMN muestra mejoras significativas en la resolución sin comprometer la integridad de la planta de poliéster de protección, mientras que concentraciones más altas de TFA al hecho posible lograr la hidrólisis controlada de la suberina alifáticos o aromáticos dominios. Entre los fragmentos aislados eran dos derivados hidroxifenil informado previamente en ligninas y un novedoso alifático-aromático trimer éster que se identifica provisionalmente. En conjunto, estos protocolos de ayudar a caracterizar los tipos de hidratos de carbono que están unidos de forma covalente con el poliéster suberina y para identificar los vínculos entre los interunidades covalentes éster alifático, compuestos fenólicos, y porciones de carbohidratos en el tejido de papa acorchada. Las estrategias descritas en este documento también se puede avanzar en las investigaciones a nivel molecular de los materiales lignocelulósicos o tejidos vegetales que exhiben fortalecido de adhesión intercelular.
Solución De Estado Estructura Molecular De Hígado Y Oleato De Apo-liganded De ácidos Grasos Proteína De Unión
Hígado de rata de ácido graso-proteína de unión (LFABP) es distintiva entre las proteínas de unión a lípidos intracelulares (iLBPs): más de una molécula de cadena larga de ácidos grasos y una variedad de ligandos diversas se puede enlazar dentro de su cavidad grande, y en los lípidos in vitro transferir a las membranas del modelo sigue un mecanismo que es controlada por difusión en lugar de mediada por las colisiones de proteínas de membrana. Debido a que la apoproteína ha demostrado ser resistente a la cristalización, la espectroscopia de resonancia magnética nuclear ofrece una ruta única para las comparaciones informativas funcionalmente de la estructura molecular y la dinámica de LFABP en libre (apo) y las formas liganded (holo). Se presenta aquí las estructuras del estado solución-determinados para apo-LFABP a pH 6,0 y para holoproteına liganded a dos oleatos a pH 7,0, así como la estructura de los sitios complejos incluyendo de los ligandos. Asignaciones de 1H, 13C, 15N y la resonancia reveló tipos muy similares y la ubicación de elementos de estructura secundaria para apo y holo-LFABP a juzgar por los índices de desplazamiento químico. Las estructuras del estado solución terciaria de las proteínas se obtuvieron con el SNC / protocolo ARIA computacional, utilizando la distancia y restricciones angulares sobre la base de 1H-1H nucleares efectos de Overhauser (NOE), las redes de enlaces de hidrógeno, 3J (HNHA) constantes de acoplamiento, RE intermoleculares y dipolares residuales (NH) acoplamientos. El holo-LFABP solución de estado conformación es sustancialmente de acuerdo con una ya se ha informado rayos X la estructura [Thompson, J., Invierno, N., Terwey, D. Bratt, J., y Banaszak, L. (1997) La estructura cristalina del hígado graso ácido-proteína de unión. Un complejo con dos oleatos enlazados, J. Biol.. Chem.. 272, 7140-7150], incluyendo el típico barril beta coronado por un portal de hélice-giro-hélice. En el estado de solución, el oleato internamente obligado tiene la esperada en forma de U conformación y se ata electrostáticamente, pero el ligando portal extendida puede adoptar una variedad de conformaciones sobre la base de las estructuras computacionalmente refinados, en contraste con la única conformación observada en la estructura cristalina . La apo-LFABP también tiene una bien definida barril beta motivo estructural típico de los demás miembros de la familia de proteínas ILBP, pero la región del portal que se cree para facilitar la entrada ligando y exposiciones de salida variabilidad conformacional y un inusual "tapa abierta" de orientación con respecto al cilindro. Estos resultados estructurales nos permiten proponer un modelo en el que la unión del ligando al LFABP ocurre a través de las fluctuaciones conformacionales que se ajustan el motivo hélice-giro-hélice para abrir o cerrar la parte superior de la beta-barril, y la accesibilidad de disolvente a la cavidad de proteínas favorece la difusión controlada transporte ligando.
A Raíz De La Biosíntesis De Melanina Fúngica Con RMN En Estado Sólido: Estructuras Moleculares Y Biopolímeros Posibles Conexiones Con Polisacáridos De La Pared Celular
Melaninas servir a una variedad de funciones de protección de plantas y animales, pero en los hongos como Cryptococcus neoformans que también están asociados con la virulencia. Un reciente desarrollo de estado sólido de resonancia magnética nuclear (RMN) estrategia, basada en la incorporación de sitio específico (13) C-enriquecidas en precursores de melanina, seguido por espectroscopía de espectros de melanina tanto en polvo y disolvente se hinchó, se utilizó para proporcionar nuevo a nivel molecular ideas sobre la biosíntesis de melanina fúngica. La cadena lateral de un precursor de L-dopa se muestra para ciclar y formar una estructura indol propuesto en C. neoformans melanina, y la modificación de los anillos aromáticos reveló patrones posibles de elongación de la cadena de polímero y de reticulación dentro del biopolímero. Manosa suministrado en el medio de crecimiento se mantuvo como un resto de beta-piranosa en los espectros de melanina, incluso después de exhaustivos tratamientos de degradación y la diálisis, lo que sugiere la posibilidad de incorporación apretado unión covalente o del pigmento en las paredes celulares fúngicas de polisacáridos. En contraste, la glucosa se revueltos metabólicamente e incorporados en ambas paredes celulares y las cadenas de polisacáridos alifáticos presentes en los espectros de melanina, en consonancia con el uso metabólico como un nutriente celular, así como la unión covalente al pigmento. Los grupos alifáticos prominentes informado previamente en varios melaninas hongos fueron identificados como estructuras de triglicéridos que pueden tener uno o más sitios de insaturación de la cadena. Estos resultados establecen que la melanina fúngica contiene componentes químicos procedentes de otras fuentes de L-dopa polimerización y sugieren que enlaces covalentes entre la L-dopa derivados de productos y componentes de polisacáridos pueden servir para unir este pigmento a las estructuras de la pared celular.
Aislamiento E Identificación De Los Oligómeros De La Degradación Parcial De La Fruta De Lima Cutina
Tratamientos complementarios de degradación a baja temperatura con ácido fluorhídrico y el hidróxido de potasio metanólico se han utilizado para investigar la cutina biopolímero de protección de Citrus aurantifolia (lima) los frutos, aumentando las estrategias antes enzimáticos y químicos para obtener una visión más completa de su arquitectura molecular. El análisis de los fragmentos resultantes solubles oligoméricos con una o dos dimensiones de RMN y los métodos MS identificado un nuevo dímero y tres ésteres de alcoholes primarios triméricas basado en 10,16-dihydroxyhexadecanoic ácido y 10-oxo-16-hidroxihexadecanoico unidades de ácido. Considerando sólo 10-oxo-16-hidroxihexadecanoico unidades de ácido se encontraron en los oligómeros de tratamientos con ácido fluorhídrico, el dímero y trímero productos aislados hasta la fecha utilizando diversos métodos degradativos incluidos seis de los siete posibles relaciones estequiométricas de unidades de monómero. Un novedoso glucósido ligado hydroxyfatty ácido tetrámero también fue identificado provisionalmente, lo que sugiere que el biopolímero cutina se puede enlazar covalentemente a la pared celular vegetal. Aunque los resultados sugieren que la arquitectura predominante molecular de este polímero protector en las frutas cal implica ésteres de alcoholes primarios y secundarios basados en los ácidos de cadena larga hydroxyfatty, la posibilidad de reticulación adicional para mejorar la integridad estructural está subrayada por estos hallazgos y afines no estándar de arquitecturas moleculares cutina.
RMN Caracterización De La Hidratación Y El Estrés Térmico En Las Cutículas De Tomates
En su entorno natural, la cutícula de la planta, que se compone de la cutina biopolímero y una mezcla de superficie y embebidos ceras cuticulares, experimenta una gran variedad de temperaturas y estados de hidratación. En consecuencia, una comprensión completa de la función cuticular requiere un estudio de sus propiedades térmicas y mecánicas en función de la hidratación. Aquí, presentamos los resultados de un estudio integral 13C nuclear de la relajación de resonancia magnética (RMN) de la cutícula hidratada fruto de tomate. Experimentos de polarización cruzada y directa polarización-sirven para medir los componentes sólido como líquido y como, respectivamente, de la cutícula hidratada. Localizadas, de alta frecuencia, los movimientos son investigados por T1 (C) medidas de espín de relajación, mientras que T1rho (H) y T1rho (C) reflejan los experimentos de baja frecuencia, la disminución de la amplitud de la cadena de polímeros de movimientos. Además, la variable de temperatura las mediciones de T1 (C) y T1rho (C) para las cutículas secas de tomate se utilizan para evaluar el impacto del estrés de la temperatura. Los resultados de estos experimentos se interpretan en términos de cambios que se producen en los movimientos de polímero individuales de los componentes cutina / cera de cutícula de tomate y en la interacción de estos componentes dentro de la cutícula intacta, los cuales están previstos para influir en la integridad funcional de esta planta de protección que cubre .
Deficiencia De Cutina En La Cutícula De Frutas De Tomate Consistente Afecta a La Resistencia a La Infección Microbiana Y Propiedades Biomecánicas, Pero Pérdida De Agua No Transpiración
Cutículas de la planta son ampliamente compuesto de dos componentes principales: cutina polimérico y una mezcla de ceras, que se infiltran en la matriz de cutina y también se acumulan en la superficie, formando una capa epicuticular. A pesar de las cutículas se cree que desempeñan una serie de importantes funciones fisiológicas, con la más importante es limitar la pérdida de agua de los órganos de las plantas aéreas, las contribuciones relativas de cutina y ceras de la cutícula a la función aún no se comprenden bien. Tomate (Solanum lycopersicum) frutas proporcionar un atractivo sistema experimental para abordar esta cuestión, a diferencia de otras plantas modelo como Arabidopsis, tienen una cutícula astomatous relativamente gruesa, proporcionando un material uniforme sin poros que es fácil de aislar y manejar. Se identificaron tres mutantes de tomate, cutina deficientes 1 (CD1), CD2 y CD3, las cutículas de fruta de las cuales tienen una dramática (95-98%) de reducción en el contenido de cutina y modificado sustancialmente, pero claramente diferentes, las arquitecturas. Esta deficiencia cutina resultó en un incremento en la rigidez superficie de la cutícula, y en las proporciones de los componentes poliméricos tanto hidrófilas y entre sí se multiplican. Además, nuestros datos sugieren que no hay una correlación entre la cantidad de cutina y la permeabilidad de la cutícula al agua, pero que cutina juega un papel importante en la protección de los tejidos de la infección microbiana. Las tres mutaciones cd fueron asignadas a diferentes loci, y la clonación de CD2 reveló que para codificar una proteína homeodominio, que proponemos actúa como un regulador clave de la biosíntesis de cutina, en frutos de tomate.
Evaluar El Tamaño, La Estabilidad Y La Utilidad De Los Sistemas De Tumbling Isótropa Bicelle De Biología Estructural
Mezclas acuosas de fosfolípidos que forman micelas de doble capa (bicelles) han ganado un amplio uso por los biofísicos moleculares en los últimos 20 años para los estudios espectroscópicos de péptidos unidos a la membrana y el perfeccionamiento estructural de las estructuras de las proteínas solubles. No obstante, la utilidad de los sistemas de bicelle puede verse comprometida por consideraciones de coste, estabilidad química, y la preservación de la organización global bicelle bajo una amplia gama de temperatura, concentración, pH y condiciones de fuerza iónica. En el presente trabajo, (31) P de resonancia magnética nuclear (RMN) y microscopía de fuerza atómica (AFM) se han utilizado para controlar el tamaño y la morfología de isótropa volteretas bicelles pequeños formados por mezclas de 1,2-dimiristoil-sn-glicero- 3-fosfocolina (DMPC) o 1,2-di-O-tetradecil-sn-glicero-3-fosfocolina (DIOMPC), ya sea con 1,2-dihexanoyl-sn-glicero-3-fosfocolina (CDPS) o 1,2 - di-O-hexil-sn-glicero-3-fosfocolina (DIOHPC), probar su tolerancia a las variaciones en comúnmente utilizados condiciones experimentales. (1) H-(15) N RMN 2D se ha utilizado para demostrar la utilidad de la robusta DMPC-DIOHPC sistema para estudios conformacionales de un ácido graso-proteína de unión que lanzaderas ligandos pequeños hacia y desde las membranas biológicas.
Aislamiento E Identificación De Los Triglicéridos Y Oligómeros De éster De Degradación Parcial De La Papa Suberina
Paredes celulares suberizadas de tubérculos de patata curación de heridas (Solanum tuberosum) se despolimerizado en condiciones suaves utilizando hidróxido de potasio metanólico con el fin de investigar los enlaces químicos presentes en este biopolímero vegetal protectora. El análisis de los fragmentos resultantes de oligómeros solubles con HPLC, 1D y 2D RMN, LC / MS, y MS (n) métodos permitió identificar varios productos nuevos: una familia de homólogos triglicéridos, una familia de trímeros de ésteres alifáticos homóloga, y un éter vinculada dímero de ácido fenilacético. Estos resultados ilustran la diversidad de los vínculos moleculares rígidos y flexibles presentes en ambos poli (alifático) y poli (aromático) dominios de patata suberina, y apuntan hacia arquitecturas que puede dar cuenta de su función como una barrera hidrofóbica potente al agua, el equilibrio térmico, y los patógenos microbianos.
Un Protocolo General Para La Calibración De La Temperatura De Las Sondas De RMN MAS Arbitrarias En Velocidades De Centrifugado
Un protocolo de utilización (207) Pb RMN de nitrato de plomo sólido fue desarrollado para determinar la temperatura de la magia de ángulo de giro (MAS), sondas de RMN en un rango de temperaturas de ajuste nominales y velocidades de giro. Uso de biomas y sondas FastMAS con frecuencias de muestreo típicas de hilado de 8 y 35 kHz, respectivamente, las ecuaciones empíricas han sido concebidos para predecir las temperaturas de la muestra correspondientes. Estos procedimientos proporcionan una receta sencilla para calibrar la temperatura de cualquier sonda MAS.
Una Resonancia Magnética Nuclear Con Sede En Justificación Estructural Para Estequiometría Contraste Y El Sitio Ligando Vinculante (s) En ácidos Grasos De La Unión a Proteínas
Hígado de ácidos grasos de la proteína de unión (LFABP) es un polipéptido de 14 kDa citosólicas, a diferencia de otros miembros de la familia en el número de sitios de unión del ligando, la diversidad de ligandos unidos, y la transferencia de ácidos grasos (s) a las membranas principalmente a través de la difusión acuosa en lugar de interacciones directas colisión. Distinct bidimensional (1) H-(15) N resonancia magnética nuclear (RMN) señales indicativas de intercambio lentamente ensamblados LFABP formados durante el ajuste de ligando por pasos fueron explotados, sin determinar las estructuras de complejos proteína-ligando, para producir las estequiometrías para el enlazado ligandos, su ubicación dentro de la cavidad de unión a proteínas, la secuencia de ocupación ligando, y los alojamientos de proteínas estructurales correspondientes. Los desplazamientos químicos fueron controlados por tipo salvaje y un mutante LFABP R122L/S124A en el que las interacciones electrostáticas vistos como esenciales a la unión de ácidos grasos se han eliminado. Por tipo salvaje LFABP, los resultados se compararon favorablemente con los datos anteriores para estructuras terciarias de oleato de enlazado de tipo salvaje LFABP en cristales y en solución: hay dos oleatos, una forma de U ligando que posiciona la cadena hidrófoba larga profundamente dentro del cavidad y otra estructura extendida con la cadena hidrófoba orientado hacia la cavidad y el grupo carboxilato acostado cerca de la superficie de la proteína. La valoración de RMN validado una hipótesis previa de que el oleato de primero en entrar en la cavidad ocupa el sitio de la proteína interna. En contraste, (1) cambia de H y N (15) de desplazamiento químico admite sólo un oleato liganded para R122L/S124A LFABP, en un lugar intermedio dentro de la cavidad proteína. Un argumento basado en la secuencia de proteínas y la electrostática fue desarrollado para explicar las tendencias del sitio estequiometría y vinculantes para LFABPs y poner estos resultados en su contexto dentro de la familia de proteínas más grandes.
La Formación De Nanocompuestos De óxido De Grafeno a Partir Del Dióxido De Carbono Utilizando Borano De Amoníaco
Para reciclar eficientemente CO (2) a los productos económicamente viables, tales como combustibles líquidos y los nanomateriales de carbono, la reactividad de CO (2) se requiere que se entiende completamente. Hemos investigado la reacción de CO (2) con borano de amoníaco (AB), ambas moléculas ser capaz de funcionar como un ácido o una base, para obtener más luz en la actividad anfótero de CO (2). En el presente trabajo, se demuestra que el CO (2) puede ser convertido en óxido de grafeno (GO) utilizando AB en condiciones moderadas. La conversión consiste en dos pasos consecutivos: CO (2) de fijación (CO (2) la presión de <3 MPa y la temperatura <100 ° C) y graphenization (600-750 ° C por debajo de 0,1 MPa de N (2)). El primer paso genera un compuesto sólido que contiene metoxi (OCH (3)), formiato (HCOO) y grupos alifáticos mientras que el segundo graphenization es la pirólisis del compuesto sólido para producir grafeno óxido de boro-nanocompuestos de óxido, que han sido confirmados por micro -La espectroscopia Raman de estado sólido (13) y C (11) B ángulo mágico giro-resonancia magnética nuclear (RMN-MAS), microscopía electrónica de transmisión (TEM) y microscopía de fuerza atómica (AFM). Nuestras observaciones muestran también que la masa de producto sólido en CO (2) proceso de fijación y primas nanocompuestos de óxido de grafeno es dos veces y 1,2 veces la de AB inicialmente cargados, respectivamente. La formación de grupos alifáticos sin utilizar compuestos que contienen metal en condiciones suaves es de gran interés para la síntesis de diversos productos orgánicos a partir de CO (2)..
