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Articles by Sabarish V. Indran in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Mit Reverse-Genetics der NSS Gene des Rift Valley Fever Virus MP-12-Stamm zu Vaccine Safety und Wirksamkeit zu verbessern Manipulieren
Department of Pathology, University of Texas Medical Branch
Die reverse Genetik für die Rift Valley-Fieber-Virus MP-12 Impfstamm ist ein nützliches Werkzeug für die Schaffung zusätzlicher MP-12-Mutanten mit erhöhter Dämpfung und Immunogenität. Wir beschreiben das Protokoll zu erzeugen und zu charakterisieren NSs Mutanten.
Other articles by Sabarish V. Indran on PubMed
Bicaudal D1-abhängige Illegalen Handel Mit Menschlichen Zytomegalovirus Charakterisierenden Protein Pp150 in Virus-infizierten Zellen
Menschliche Cytomegalievirus (HCMV) Virion Montage erfolgt im Zellkern und Zytoplasma der infizierten Zellen. Die HCMV Virion charakterisierenden Protein pp150 (ppUL32) ist eine wesentliche Protein des HCMV und eine Rolle in der zytoplasmatischen Phase der HCMV-Versammlung vorgeschlagen worden. Um seine Rolle weiter in virale Baugruppe zu definieren und Host Zelle Proteine zu identifizieren, die Interaktion mit pp150 während der viralen Montage, wir genutzt Hefe-zwei-Hybrid-Analysen um eine Interaktion zwischen pp150 und Bicaudal D1 zu erkennen (BicD1), ein Protein, eine Rolle in den Handel innerhalb des sekretorischen Weges gedacht. BicD1 ist bekannt, dass mit der komplexen Dynein-Motor und die Rab6 GTPase interagieren. Die Interaktion zwischen pp150 und BicD1 wurde durch Coimmunoprecipitation und Fluoreszenz-Resonanz bestätigt Energietransfer. Erschöpfung der BicD1 mit kurzen Haarnadel RNA (ShRNA) verursacht verminderte Virus Ausbeute und einen Defekt im Handel mit pp150 zum zytoplasmatischen virale Versammlung Fach (AC), ohne Veränderung der Handel auf die AC ein weiterer wesentlicher charakterisierenden Protein, pp28 oder die komplexe virale Glykoprotein gM/GN Das Carboxyl-Terminus der BicD1 hat sich zuvor gezeigt Interaktion mit der GTPase Rab6, was auf eine mögliche Rolle für Rab6-vermittelte vesikulären Menschenhandel HCMV-Versammlung. Schließlich eine Überexpression von der N-Terminus des abgeschnittenen BicD1 fungiert eine Dominant-negativer Weise und führt zu Störung der AC und eine Abnahme in der Versammlung des ansteckenden Virus. Dieser Phänotyp war ähnlich wie die beobachteten folgende Überexpression des dynamitin (p50) und die Morphogenese der AC und Virus Assembly Dynein abhängigen wurden zusätzliche Beweise vorgelegt.
Eine Rolle Für Die Kleine GTPase Rab6 in Versammlung Der Menschlichen Zytomegalovirus
In Mensch-Cytomegalievirus (HCMV)-infizierte Zellen, die Sprachunterstützung für das virale Protein pp150 zum Virus Versammlung Fach (AC) ist die direkte Interaktion mit dem zellularen Protein Bicaudal D1 durch Dynein - und Microtubule-abhängigen Mechanismus abhängig. Wir fanden, dass die kleinen, die GTPase Rab6 auch indirekt mit pp150 durch seine Interaktion mit Bicaudal D1 interagiert. Hemmung der Rab6 Aktivität in HCMV-infizierten Zellen unterbrochen, der intrazellulären Menschenhandel pp150, infektiöse Virus-Produktion deutlich zu verringern, ohne die Bildung von AC, als Argument für eine wichtige Funktion für diese zelluläre GTPase in die intrazelluläre Lokalisation der pp150 bei der Virus-Montage.
