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 JoVE Immunology and Infection

La diagnosi rapida del virus dell'influenza aviaria nei volatili selvatici: l'uso di un Portable rRT-PCR e liofilizzato reagenti nel campo


JoVE 2829 8/02/2011

1USGS Western Ecological Research Center, 2Wildlife Health Center, University of California, Davis, 3Department of Population Health and Reproduction, University of California, Davis, 4Department of Veterinary and Biomedical Sciences, University of Minnesota, 5Science Applications International Corporation

Questo studio descrive la diagnosi dell'influenza aviaria nei volatili selvatici utilizzando un portatile rRT-PCR sistema. Il metodo si avvale di liofilizzati reagenti per lo screening degli uccelli selvatici in un non-laboratorio di impostazione, tipica di uno scenario di un'epidemia. L'uso di strumenti molecolari fornisce alternative accurata e sensibile per la diagnosi rapida.

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Contaminazione Da Mercurio E Gli Effetti Sulla Sopravvivenza Di Avocetta Americana E Black-necked Stilt Pulcini Nella Baia Di San Francisco

Abbiamo valutato se mercurio influenzato la sopravvivenza di Stray americano Avocetta (Recurvirostra americana) e pulcini dal collo nero Cavaliere d'Italia (Himantopus mexicanus) nella baia di San Francisco, California. Utilizzando la telemetria radio, abbiamo radio-contrassegnato 158 avocetta e 79 trampoli pulcini alla schiusa e li monitorati quotidianamente fino a quando è stato determinato il loro destino. Non abbiamo trovato forte sostegno per un'influenza di ovo esposizione di mercurio sulla sopravvivenza del pulcino, pur osservando una vasta gamma di concentrazioni di mercurio nel pulcino giù piume alla schiusa (0,40-44.31 microg g(-1) fw). Abbiamo stimato che furono ridotti tassi di sopravvivenza del pulcino < o = 3% sopra l'intervallo di concentrazioni di mercurio osservati durante il periodo di 28 giorni dalla schiusa a volare. Abbiamo anche recuperato i pulcini appena nati che sono stati trovati morti durante la routine di nidificano di monitoraggio. In contrasto con i risultati di telemetria, abbiamo trovato che le concentrazioni di mercurio in giù piume dei pulcini morti erano superiori a quelli in campionate casualmente dal vivo pulcini di età simile. Tuttavia, cattura sito era la variabile più importante che influenza le concentrazioni di mercurio, seguite dall'anno, specie e la data di schiusa. Sebbene gli studi di laboratorio hanno dimostrato gli effetti negativi delle concentrazioni di mercurio ambientalmente rilevanti sulla sopravvivenza del pulcino, i nostri risultati concordano con il piccolo numero di precedenti studi di campo che non sono stati in grado di rilevare la ridotta sopravvivenza nel selvaggio.

Movimenti Di Orchetti Svernanti Di Surf: Risposte Predatore a Preda Di Diversi Paesaggi

La distribuzione dei predatori è ampiamente riconosciuta per essere intimamente legata alla distribuzione delle loro prede. Foraggiamento teoria suggerisce che i predatori modificherà i comportamenti, compresi i movimenti, per ottimizzare l'apporto energetico netto di fronte alla variazione in preda attributi o abbondanza. Mentre molti studi hanno documentato i cambiamenti nei modelli di movimento degli animali in risposta a cambiamenti temporali nel cibo, pochissimi hanno contrastato movimenti di una specie di predatore singolo naturally occurring in preda drammaticamente diversi paesaggi. Abbiamo documentato variazione i movimenti invernali, foraggiamento dimensioni dell'intervallo, fedeltà del sito e modelli di distribuzione di un'anatra di mare molluscivorous, l'orchetto marino (Melanitta perspicillata), in due aree costiera British Columbia con caratteristiche preda crostacei molto diversi. Baynes suono ha vasti appartamenti di marea con vongole abbondanti, che sono di alta qualità e temporalmente stabile preda per gli Orchetti. Malaspina Inlet è un'insenatura di fiordo-come rocciosa dove orchetti consumano cozze che sono facilmente accessibili in alcune patch e sovrabbondante, ma sono altamente depauperati nel corso dell'inverno. Abbiamo usato telemetria radio per monitorare i movimenti orchetto marino in entrambe le aree e trovato che negli habitat clam del suono Baynes, surf orchetti esposto movimento limitato, intervalli piccoli inverno, forte fedeltà sito foraggiamento e modelli di distribuzione molto coerente. Al contrario, in habitat di mitili in ingresso Malaspina, surf orchetti visualizzati più movimento, più grandi intervalli, poca fedeltà a specifici siti di foraggiamento ed i modelli di distribuzione più variabile. Concludiamo che caratteristiche associate con i tipi di prede diverse, particolarmente i più elevati tassi di deplezione di cozze, fortemente influenzato i modelli di utilizzo spazio stagionale. Questi risultati sono coerenti con la teoria di foraggiamento e confermano tale comportamento predatore, in particolare movimenti, l'ambiente sono mediati.

Un Sondaggio Di Sangue Di Elementi, Gli Anticorpi Virali E Hemoparasites in Svernano Anatre Arlecchino (Histrionicus Histrionicus) E Quattrocchi Di Barrow (Bucephala Islandica)

Ventotto anatre Arlecchino (Histrionicus histrionicus) e quattrocchi 26 di Barrow (Bucephala islandica) sono stati catturati in principe William Sound, Alaska, tra 1 e 15 marzo 2005. Sangue è stato raccolto per la quantificazione delle concentrazioni di elemento, prevalenza degli anticorpi anti-virus diversi e hemoparasite la prevalenza e l'identificazione. Anche se abbiamo trovato concentrazioni di selenio che sono stati associati con selenosi in alcuni uccelli (&gt; o = 2.0 ppm ww), i nostri risultati contribuiscono a una crescente letteratura descrivendo relativamente alta selenio negli uccelli apparentemente sani in ambienti marini. Anticorpi contro il virus dell'influenza aviaria sono stati rilevati nel plasma del 28% delle anatre. Sono stati rilevati senza anticorpi contro adenovirus, reovirus o paramixovirus 1. Nel 7% delle anatre sono state identificate diverse specie di emo-parassita. I nostri risultati sono simili a quelli di altri uccelli acquatici marini libero-viventi e non indicano insoliti preoccupazioni per la salute di queste specie in questa zona alla fine dell'inverno.

Sopravvivenza Di Postfledging Sterne Di Forster in Relazione Alla Esposizione Di Mercurio Nella Baia Di San Francisco

Abbiamo esaminato i fattori che influenzano le concentrazioni di mercurio in Sterne 90 nascente di Forster (Sterna forsteri) e valutate se mercurio influenzato postfledging sopravvivenza nella baia di San Francisco, California. Concentrazioni di mercurio (+ /-SE) nei giorni 21-29 (appena prima di volare) pulcini erano 0,33 + 0,01 microg g(-1) ww per sangue e 6,44 + 0,28 microg g(-1) fw per piume del petto. Sito di Colonia ha avuto un'influenza preponderante sul nascente contaminazione, tuttavia da cova data ed età colpito anche sangue, ma non piuma, concentrazioni di mercurio. Concentrazioni di mercurio di sangue sono diminuite del 28% durante il periodo di cova di 50 giorni e con l'età del pulcino è aumentato del 30% durante l'ultima settimana prima di volare. Utilizzo di radio-telemetria, abbiamo calcolato che la sopravvivenza cumulativa durante i 35 giorni postfledging periodo di tempo era 0,81 + /-0,09 (SE). Postfledging tassi di sopravvivenza aumentato con massa dimensione-regolata, e probabilità di sopravvivenza cumulativa era 61% inferiore per Sterne con il più basso, rispetto al più alto, osservate le masse. Al contrario, la sopravvivenza non è stata influenzata dalla concentrazione di mercurio nel sangue, il tempo dal volare, sesso, o data di tratteggio. Concentrazioni di mercurio nelle piume del petto dell'occasione trovano morto a colonie di nidificazione era anche non diversi da quelli di pulcini vivi. I nostri risultati indicano quel sito di Colonia, da cova data e concentrazioni di mercurio età influenzato in Sterna forsteri nascente, ma che Mercurio non influenza postfledging sopravvivenza.

Migrazione Del Cigno E Le Epidemie Di Virus Di Influenza Aviaria Altamente Patogena H5N1 in Asia Orientale

Valutare il potenziale coinvolgimento dell'avifauna selvatica nell'emergere di influenza aviaria altamente patogena H5N1 (in appresso H5N1) richiede analisi dettagliate delle relazioni temporali e spaziali tra movimenti di uccelli selvatici e comparsa della malattia. La morte dei cigni selvatici (Cygnus spp.) è stato il primo indicatore della presenza di H5N1 in paesi diversi asiatici ed europei; tuttavia loro ruolo nella diffusione geografica della malattia rimane scarsamente compreso. Abbiamo segnato 10 cigno (Cygnus cygnus) con trasmettitori GPS in Mongolia nord-orientale durante l'autunno 2006 e monitorati i movimenti migratori in relazione a focolai di H5N1. La prevalenza dei focolai di H5N1 fra pollame in Asia orientale nel corso del 2003-2007 ha raggiunto un picco durante l'inverno, in concomitanza con movimenti di cigno selvatico in regioni di densità elevata pollame. Tuttavia focolai di pollame sono stati rilevati l'anno, indicando la perpetuazione di malattia indipendente migratory waterbird presenza. Al contrario, focolai di H5N1 che coinvolgono il cigno, così come altri uccelli acquatici migratori che ha soccombuto alla malattia in Asia orientale, tendevano a verificarsi durante le stagioni (tarda primavera ed estate) e in habitat (aree di vegetazione naturale) dove loro potenziale per contatto con pollame è molto basso per inesistente. Dato ciò che è noto circa la suscettibilità dei cigni H5N1 e sulla base della cronologia e le tariffe dei movimenti di espansione del cigno selvatico, possiamo concludere che, anche se c'è ampia sovrapposizione spaziale tra distribuzioni di cigno selvatico e posizioni epidemia H5N1 in Asia orientale, la probabilità di trasmissione diretta tra questi gruppi è estremamente bassa. Così, i nostri dati supportano l'ipotesi che cigni migliori sono visti come specie di sentinella, e inoltre, che in Asia orientale, è molto probabile che le infezioni si è verificato attraverso il contatto con asintomatico migratori host (ad esempio, le anatre selvatiche) o vicino a loro motivi di allevamento.

Campo Di Rilevamento Dei Virus Dell'influenza Aviaria Nei Volatili Selvatici: Valutazione Di Un Sistema Portatile RRT-PCR E Reagenti Liofilizzati

Gli uccelli selvatici sono stati implicati nella diffusione dell'influenza aviaria altamente patogena (HPAIV) del sottotipo H5N1, spingendo la sorveglianza lungo le rotte migratorie migratori. Campionamento degli uccelli selvatici è spesso condotto in regioni remote, ma i risultati sono spesso in ritardo a causa della limitata capacità analitiche locali, difficoltà di trasporto del campione e permettendo o problemi mantenendo campioni freddo nel campo. In risposta a queste sfide, le prestazioni di un portatile in tempo reale, reverse transcriptase-polymerase chain reaction (rRT-PCR) unità (RAPID((R)), Idaho Technologies, Salt Lake City, UT) quello impiegato liofilizzato reagenti (Influenza A destinazione 1 Taqman; ASAY-ASY-0109, Idaho Technologies) è stato confrontato con l'isolamento del virus combinata con condotti in un laboratorio di RT-PCR in tempo reale. Questo studio ha incluso entrambi campionamento e sperimentale sul campo. Campo campioni furono raccolti da uccelli migratori catturato nella California del Nord, mentre campioni sperimentali sono stati preparati da chiodare materiale fecale con un AIV H6N2 isolare. Risultati hanno indicato che l'unità portatile rRT-PCR era equivalente specificità per l'isolamento del virus senza falsi positivi, ma sensibilità è stato compromesso a bassi titoli virali. Uso del portatile rRT-PCR con reagenti liofilizzati possa accelerare i risultati della sorveglianza, spianando la strada a una migliore comprensione del coinvolgimento di uccelli selvatici nella trasmissione HPAIV H5N1.

Indicazione Citocromo P4501A Biomarcatore Dell'esposizione Di Olio in Arlecchino Anatre Fino a 20 Anni Dopo La Fuoriuscita Di Petrolio Della Exxon Valdez

Idrocarburi-inducible citocromo P4501A espressione (CYP1A) è stato misurato, come attività (EROD) attività-O-deethylase, in fegati di svernano anatre Arlecchino (Histrionicus histrionicus) catturati nelle zone di Prince William Sound, Alaska, USA, oliato dalla fuoriuscita di Exxon Valdez 1989 e negli uccelli da vicino con aree, nel corso del 2005 al 2009 (fino a 20 anni dopo la fuoriuscita). Il presente lavoro ripetuti gli studi condotti nel 1998 che ha dimostrato che in Arlecchino anatre utilizzando aree che hanno ricevuto olio di Exxon Valdez, attività EROD fu elevato quasi un decennio dopo la fuoriuscita. I risultati attuali fortemente sostegno la conclusione che livelli medi di attività EROD epatica erano superiori in anatre da aree oliati quelli provenienti da zone con nel corso del 2005 al 2009. Questo risultato è stato coerenza, attraverso quattro periodi di campionamento; Inoltre, i risultati generati da due laboratori indipendenti utilizzando campioni appaiati fegati da uno dei periodi di campionamento erano simili. L'attività EROD non ha fatto variare in relazione a età, sesso o massa corporea degli individui, né ha fatto variare fortemente da stagione in uccelli raccolti presto e nel tardo inverno del 2006-2007, che indica che questi fattori non confusero inferenze circa osservate differenze tra zone oliati e con. Dobbiamo interpretare questi risultati per indicare che Arlecchino anatre ha continuati ad essere esposti a residuo Exxon Valdez olio fino a 20 anni dopo la fuoriuscita di originale. Questo aggiunge un crescente corpo di letteratura, suggerendo che fuoriuscite di petrolio hanno impatto sulla fauna selvatica per molto più tempo time frame than precedentemente assunto.

Harlequin Duck Infortunio E Recupero Dinamica Della Popolazione Dopo La Fuoriuscita Di Petrolio Exxon Valdez 1989

La fuoriuscita di petrolio Exxon Valdez 1989 causato significativi danni alle popolazioni di fauna selvatica in principe William Sound, Alaska, USA. Anatre Arlecchino (Histrionicus histrionicus) erano particolarmente vulnerabili per la fuoriuscita e sono stati studiati estesamente dal, portando ad una delle considerazioni più approfondite delle conseguenze di una fuoriuscita di petrolio più importanti mai intrapreso. Abbiamo compilato demografico e secondo i dati raccolti dalla fuoriuscita per valutare i tempi e misura della mortalità utilizzando un modello di popolazione. Durante all'indomani della fuoriuscita, abbiamo stimato una diminuzione del 25% in numeri Harlequin Duck in aree oliati. I tassi di sopravvivenza è rimasti depressi in oliato zone 6-9 anni dopo la fuoriuscita e non quelli provenienti da zone con uguale almeno 11-14 anni più tardi. Nonostante un alto grado di fedeltà del sito a siti di svernamento, l'immigrazione è stata importante per la dinamica di recupero, come il numero relativamente elevato di uccelli da habitat di fuori della fuoriuscita zona fornito un pool di individui per facilitare l'incremento numerico. Sulla base di questi ingressi modello e ipotesi sui tassi di fecondità per le specie, abbiamo proiettato una sequenza temporale di recupero di 24 anni sotto la combinazione più probabile delle variabili, con una gamma di 16 ai 32 anni per gli scenari ottimistico e pessimistico, rispettivamente. I nostri risultati confermano le asserzioni da altri studi che gli effetti dell'olio versato su fauna selvatica possono essere espressa su più time frame than precedentemente assunto e che la mortalità cumulativa associate all'esposizione cronica a olio residuo può effettivamente superare mortalità acuta, che è stata la preoccupazione primaria seguendo più olio fuoriuscite.

Citocromo P4501A Biomarcatore Indicazione Della Sequenza Temporale Di Esposizione Cronica Di Quattrocchi Di Barrow Al Residuo Olio Di Exxon Valdez

Abbiamo esaminato attività EROD epatica, come indicatore di induzione CYP1A, a quattrocchi di Barrow catturati nelle zone oliati durante la fuoriuscita di Exxon Valdez del 1989 e da quelli con zone vicine. Abbiamo trovato che media attività EROD differivano tra aree nel corso del 2005, anche se la grandezza della differenza è ridotta rispetto a un precedente studio dal 1996/1997, e abbiamo trovato che aree non differiscono dal 2009. Allo stesso modo, abbiamo trovato che la proporzione di individui catturati dalle zone oliati con elevata attività EROD (media ≥ 2 volte con) è diminuita dal 41% in inverno 1996/1997 al 10% nel 2005 e del 15% nel 2009. Questo lavoro aggiunge un corpo di letteratura che descrive la tempistica oltre che vertebrati sono stati esposti a olio di Exxon Valdez residua e indica che, per quattrocchi di Barrow in principe William Sound, l'esposizione mantenuta per molti anni con prove di esposizione sostanzialmente ridotta da 2 decenni dopo la fuoriuscita.

Che Caratterizzano L'interfaccia Tra Le Anatre Selvatiche E Pollame Per Valutare Il Potenziale Di Trasmissione Di Agenti Patogeni Aviario

ABSTRACT: BACKGROUND: che caratterizza l'interfaccia tra il selvaggio e nelle popolazioni di animali domestici è sempre più riconosciuto come essenziale nel contesto delle malattie infettive emergenti (EID) che vengono trasmessi da fauna selvatica. Più specificamente, la distribuzione spaziale e temporale dei tassi di contatti tra gli host domestici e selvatici è un parametro chiave per la modellazione dinamica di trasmissione Eid. Abbiamo integrato la telemetria satellitare, telerilevamento e sondaggi basati a terra per valutare la dinamica spazio-temporale dei contatti indiretti tra gli uccelli domestici e selvatici per stimare il rischio che gli agenti patogeni aviaria come l'influenza aviaria e virus di Newcastle saranno trasmesse tra animali selvatici al pollame. Abbiamo monitorato il pettine anatre (Sarkidiornis melanotos melanotos) con trasmettitori satellitari per sette mesi in un vasto umida Afro-tropicale (Delta del Niger interna) in Mali e caratterizzare la distribuzione spaziale di pollame da cortile nei villaggi. Abbiamo modellato la distribuzione spaziale delle anatre selvatiche utilizzando 250 metri spaziali risoluzione 8-giorni risoluzione temporale telerilevamento ambientali indicatori e basati su una metodo di modellazione Maxent di nicchia. RISULTATI: I nostri risultati mostrano una forte variazione stagionale nel tasso potenziale di contatto tra le anatre selvatiche e pollame. Abbiamo trovato che l'esposizione del pollame per uccelli selvatici è stata più grande alla fine della stagione secca e l'inizio della stagione delle piogge, quando il pettine anatre disperdono da corpi idrici naturali a superfici irrigue nei pressi dei villaggi. CONCLUSIONI: Il nostro studio fornisce a scala locale una prova quantitativa della variabilità stagionale del tasso di contatto tra popolazioni di uccelli selvatici e domestici. Viene illustrata una metodologia basata su GIS per la valutazione epidemiologiche tariffe contatti all'interfaccia della fauna selvatica e di allevamento integrando dati rilevamento remoti e satellitari ad alta risoluzione.

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