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Articles by Sangyoon Han in JoVE
JoVE Clinical and Translational Medicine
Generation teratoma nella Capsule Testicolo
1Department of Chemical Physiology, Scripps Research Institute, 2Department of Chemical Physiology, Scripps Research Institute, 3Department of Reproductive Medicine, University of California
Cellule staminali pluripotenti (hPSCs) hanno il potenziale per trattare una miriade di diverse malattie. L'utilità di queste cellule risiede nel fatto che essi possono differenziarsi in qualsiasi tipo di cellula del corpo. Qui si descrive il saggio teratoma, che viene utilizzato per dimostrare l'pluripotence di hPSCs.
Other articles by Sangyoon Han on PubMed
Regolazione Dell'espressione Genica ALF Nei Tessuti Linea Germinale Maschile E Somatico Coinvolge Parziale E Site-specific Pattern Di Metilazione
ALF (TFIIAalpha/beta-like factor) è una cellula di germe specifico controparte della subunità grande (alfa/beta) del generale fattore di trascrizione TFIIA. Qui abbiamo isolato omologhi promotori di GC-ricco dal mouse e geni umani ALF e analisi di delezione promotore usato per identificare sequenze attivi in cellule COS-7 e 293. Inoltre, analisi di sequenza del bisolfuro del promotore del mouse ALF ha mostrato che tutti i 21 dinucleotidi tra-179 e + 207 erano parzialmente metilati in cinque tessuti somatici, cervello, cuore, fegato, polmone e muscolo e di spermatozoi dell'epididimo da topi adulti. Al contrario, DNA dal testicolo di topo prepuberale e da spermatociti purificati erano unmethylated tranne a C + (19) G e G. C (+ 170) Abbiamo anche trovato che espressione ALF correla con un forte promotore prossimale della dnasi I-ipersensibili sito presente nei nuclei dal testicolo, ma non dal fegato. Infine ci mostrano che la metilazione del promotore ALF inibisce in vitro attività e quel 5-aza-2'-deoxycytidine trattamento riattiva il gene endogeno di ALF in un pannello di sette diverso mouse e linee di cellule somatiche umane. Nel complesso i risultati mostrano che il silenziamento nelle cellule somatiche è metilazione-dipendente e reversibile e che un modello unico di metilazione CpG-specifiche presso il promotore ALF precede espressione in spermatociti di pachitene. Questo modello è transitorio come rimetilazione del promotore ALF nella cellula di germe aploide del DNA si è verificato al momento gli spermatozoi presentano nell'epididimo.
Espressione Del Fattore Di Trascrizione Specifico Delle Cellule Germinali ALF in Xenopus Oocytes Compensa Traslazionale Inattivazione Del Fattore TFIIA Somatico
La scoperta di trascrizione generale delle cellule germinali-specifico fattore e coactivator varianti ha suggerito che tessuti riproduttivi controllano espressione genica in modo un po' diverso rispetto tessuti somatici. Uno di questi fattori, ALF (TFIIAtau), in primo luogo è stato descritto come una controparte testicolo specifici della subunità grande (alfa/beta) di TFIIA. Qui si caratterizzano nello Xenopus laevis rane artigliate africane attività endogena ALF e TFIIA. ALF è presente in sia del testicolo e dell'ovaio in questo organismo, e sostituisce completamente TFIIA in ovociti immaturi. Quando gli ovociti sottoposti a maturazione progesterone-indotta, attività ALF scompare, e attività TFIIA viene ripristinato. Riattivazione avviene attraverso il traslazionale up-regolazione di due mRNAs TFIIAalpha/beta materna e coinvolge poliadenilazione del conservato 3'-modulo regione non tradotta. Gli effetti della sovraespressione di ALF e ALF immunodepletion su un costrutto promotore di timidina chinasi dimostrano che questo fattore serve come un sostituto attivo per TFIIA. Al contrario, sovraespressione di TFIIA inibisce la trascrizione, che indica che il fattore somatico non riesce a funzionare correttamente nel contesto delle macchine di trascrizione ovocita. Nel complesso, i risultati mostrano che l'espressione reciproca translationally regolamentato di ALF e TFIIA permette per la produzione di un fattore di trascrizione generale di active TFIIA-come tutta ovogenesi.
Un Promotore Di Nucleo Breve Unità Espressione Del Fattore Di Trascrizione ALF in Tessuti Riproduttivi Dei Topi Maschi E Femmine
Il controllo dell'espressione genica in tessuti riproduttivi comporta una serie di fattori di trascrizione specifici delle cellule germinali unico. Un tale fattore, ALF (tau TFIIA), codifica per una proteina simile alla subunità grande del fattore generale della trascrizione TFIIA. Per capire come è regolato questo fattore, abbiamo caratterizzato topi transgenici contenenti il promotore ALF legato ai giornalisti fluorescent protein (GFP) o beta-galattosidasi o verde. I risultati mostrano che appena 133 coppie di basi sono sufficienti a guidare evolutivamente espressione precisa e specifica delle cellule. Transgene DNA metilato e inattivi nel fegato, ma potrebbe essere riattivato in vivo di amministrazione del sistema di 5-aza, 2'-deoxycytidine. Ordinamento di fluorescenza-attivato delle cellule ha permesso l'identificazione di cellule germinali maschili che esprimono il transgene GFP e fornisce un metodo potenziale per raccogliere le cellule che possa essere sotto il controllo di un sistema di trascrizione nonsomatic. Infine, abbiamo trovato che le trascrizioni del gene endogeno di ALF e transgeni derivate possono essere individuate anche in ovario intero e gli ovociti della vescicola germinale-fase di topi femminili. La sequenza ALF cade in una classe di promotori delle cellule germinali cui dotate di piccole dimensioni, ad alto contenuto di GC, numerosi dinucleotidi e un'apparente TATA-come elemento. Nel complesso, i risultati definiscono un promotore di nucleo unico che è attivo in tessuti riproduttivi maschili e femminili e suggeriscono mouse ALF possa avere un ruolo normativo in programmi di espressione genica gametogenic maschile e femminile.
Efficacia Protettiva E L'immunogenicità Di Un Vaccino Di Riossidazione Canina Di H3N2-aviari Inattivato Nei Cani Ha Sfidato Con Il Virus Virulento
Trasmissione di virus influenzali aviari A (H3N2) ai cani era stati segnalati e da allora l'infezione del virus H3N2 in Corea del sud è stato verificato ripetutamente in cliniche per animali e canili del paese. Cane di trasmissione del virus era stato dimostrato sperimentalmente da contatto diretto. In questo studio, immunogenicità ed efficacia protettiva contro l'esposizione di sfida di formalina-inattivato H3N2 influenza virus vaccino con adiuvante un polimero sintetico è stato studiato in cani. I cuccioli di beagle ha ricevuto due iniezioni di vaccino inattivato per via intramuscolare 2 settimane di distanza. Indagine sierologica di un test di emoagglutinazione inibizione (HI) e un'analisi di ELISA ha indicato che un significativo aumento anticorpale è stato visualizzato 2 settimane dopo la seconda vaccinazione. Segni clinici, virus di spargimento e lesioni istopatologiche nei polmoni sono state esposte nei cuccioli di beagle vaccinati sfidati direttamente attraverso un percorso intranasale con il virus 2 settimane dopo la seconda vaccinazione. Tuttavia, gli animali vaccinati non hanno mostrato segni clinici e ha mostrato lesioni patologiche polmonari più lievi e più breve durata spargimento con carichi inferiori rispetto ai controlli. Questi risultati hanno indicato che il vaccino contro il virus (CIV)-aviari di riossidazione canina polimero sintetico-adiuvante aveva prodotto la risposta anticorpale e protezione dalla sfida CIV-aviari nei cani.
Prevalenza E Analisi Filogenetica Dell'isolato Tipo Sindrome Respiratoria Virus Dal 2007 Al 2008 E Riproduttiva Dei Suini in Corea
Il primo ceppo coreano di sindrome respiratoria virus (PRRSV) e riproduttiva dei suini è stato isolato nel 1997, ed esposto ad alta somiglianza al ceppo VR-2332 (tipo II PRRSV; Tipo di nord americano). Recentemente, tuttavia, l'infezione con tipo I PRRSV (tipo europeo) è anche stata segnalata in Corea. Ad oggi, dati preliminari sul tipo I prevalenza PRRSV in Corea non sono state segnalate. Qui, usando transcriptase (RT)-PCR, abbiamo analizzato campioni archiviati campo 383 da 101 allevamenti suini in Corea che sono stati raccolti dal 2007 al 2008. Abbiamo identificato 155 campioni provenienti da 68 aziende che erano positivi per PRRSV. Campioni di cinquantuno (51/155; 32,9%) e 20 aziende (20/68; 29,4%) fossi tipo I PRRSV-positivo/tipo II PRRSV-negativo. Inoltre, abbiamo cercato di isolare il tipo PRRSV tipo sette dei campioni positivi e mi PRRSV fossi isolato usando PAM. L'analisi filogenetica utilizzando il tipo mi PRRSV isolati (7 isolati) è stato eseguito basato su open reading frame (ORF), 5 (numeri di adesione GU325642 a GU325648) e ORF7 (numeri GU325635 a GU325641 di adesione). Lo studio filogenetico, sette di tipo PRRSV isolati erano strettamente imparentati con panEuropean basata su ORF7, mentre essi erano geneticamente distinte da Lelystad virus e fatto un clade unico basato su ORF5. I risultati di questo studio dimostrano che l'infezione con il tipo PRRSV non è raro in allevamenti di suini coreano, che suggerisce che la diagnosi e il controllo di tipo ho PRRSV dovrei essere considerato in Corea. Un nuovo approccio alla vaccinazione contro e analisi epidemiologica, PRRSV coreano è urgentemente necessaria.
Retrazione Delle Piastrine Forza Misurazioni Utilizzando Sensori Di Forza Flessibile Post
Le piastrine svolgono un ruolo importante nell'emostasi formando un tappo trombotico che sigilla la parete dei vasi e favorisce la guarigione vascolare. Dopo le piastrine aderiscono e aggregano al sito della ferita, loro prossimo passo è di generare le forze contrattili attraverso il coordinamento delle interazioni fisico-chimiche tra actina e miosina alpha(IIb)beta(3) integrina recettori che ritraggono dimensione dei trombi e rafforzare la sua adesione alla matrice esposta. Anche se forze contrattile delle piastrine (PCF) sono una caratteristica definitiva dell'emostasi e trombosi, ci sono alcuni approcci che possono misurare direttamente li. In questo studio, descriviamo lo sviluppo di un approccio su misura PCF in microthrombi utilizzando una serie di sensori di forza microscopico post flessibile. Misure quasi statiche e imaging microscopica diretta delle piastrine attivato da trombina sui posti sono stati condotti per dosaggio lo sviluppo del PCF a varie condizioni emostatiche. Microthrombi sono stati osservati per produrre le forze che monotona aumentato con il tempo di attivazione e concentrazione di trombina, ma le forze placata quando trombina è stato rimosso. PCF risultati erano statisticamente simili su matrici di messaggi stampati con la fibronectina o fibrinogeno. Misurazioni PCF sono state combinate con le misurazioni di volume di coagulo per determinare che la forza media per piastrinica era 2.1 + /-0.1 nN dopo 60 min, che è significativamente superiore a quello che è stato misurato con precedenti approcci. In generale, le matrici post flessibile per misurazioni PCF sono un promettente approccio per valutare la funzionalità delle piastrine, piastrine fisiologia e patologia, gli impatti delle diverse matrici o agonisti su risposte emostatiche e nel fornire informazioni critiche per quanto riguarda l'attività delle piastrine che possono guidare nuove strategie emostatici o trombotici.
Associazione Tra Spargimento Nasale E La Febbre Che Induce L'influenza A (H3N2) in Cani
Virus di riossidazione canina di origine aviaria è stato segnalato in Corea. Trasmissione del virus di riossidazione canina di origine aviaria (CIV) Contatta di cane H3N2 e CIV H3N8 è stato mostrato da trasmissione sperimentale di contatto. Questo studio si è concentrato sulla escrezione virale e febbre per delucidare le associazioni epidemiologiche che potrebbero essere utile per controllare le trasmissioni di malattia nel focolaio CIV in cani.
Simulazioni Del Ciclo Contrattile in Migrazione Cellulare Utilizzando Un Modello Bio-chimico-meccanica
Migrazione cellulare si basa su forze di trazione per azionare una cella. Sono stati sviluppati diversi modelli computazionali che aiutano a spiegare la traiettoria che cellule durante la migrazione, ma poca attenzione è stata posta per le forze di trazione durante questo processo. Qui, abbiamo studiato il spatiotemporal dynamics della migrazione cellulare utilizzando un modello di bio-chimico-meccanica contrattilità che incorpora i primi passi della migrazione cellulare su una matrice di tutti i messaggi. Nel modello di formazione di una nuova adesione provoca una riattivazione dell'Assemblea fibra dello stress all'interno di una cella. Il modello è stato in grado di prevedere la distribuzione spaziale delle forze di trazione osservato con esperimenti precedenti. Inoltre, il modello ha trovato che l'energia di deformazione esercitata dalle forze di trazione di una migrazione cellulare ha subito un rapporto ciclico che è aumentato con la formazione di una nuova adesione e cadde con il rilascio di un'adesione al suo posteriore.
Rigidità Del Substrato Aumenta La Potenza Di Contrazione Dei Cardiomiociti Neonatali in Correlazione Con I Cambiamenti Nella Struttura Della Miofibrilla E Calcio Intracellulare
Durante lo sviluppo neonatale, c'è un aumento della rigidità del miocardio che coincide con un aumento della contrattilità del cuore. Saggi in vitro hanno dimostrato che la rigidità del substrato gioca un ruolo nel regolare le forze di contrazione prodotte da cardiomiociti immaturi. Tuttavia, l'effetto sulla potenza di contrazione è chiaro a causa delle difficoltà nel misurare la velocità di contrazione dei cardiomiociti. Presentiamo qui, ciò che noi consideriamo un nuovo approccio per quantificare la potenza di contrazione combinando la risoluzione temporale della linea ottica di scansione con risoluzione forza sottocellulare di micropost matrici. Utilizzando questo approccio, potenza di contrazione è stato trovato per essere maggiore per le cellule coltivate su messaggi più rigidi, nonostante la bassa velocità di contrazione. L'aumento di potenza è stato attribuito in parte alla struttura migliorata Miofibrilla (sarcomero maggiore lunghezza e larghezza di banda Z) e i livelli di calcio intracellulare. Colorazione di immunofluorescenza di α-actina ha rivelato che cardiomyocytes avevano una maggiore lunghezza del sarcomero e larghezza di banda Z quando coltivate su matrici più rigidi. Inoltre, la concentrazione di calcio intracellulare a riposo e la sua ascesa con ogni contrazione contrazione è stata maggiore per le celle sui posti più rigidi. Complessivamente, questi risultati indicano che cardiomyocytes rispondere alle rigidità del substrato con modifiche biomeccaniche e biochimiche che portano a un aumento di contrattilità cardiaca.
