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Articles by Sangyoon Han in JoVE
JoVE Clinical and Translational Medicine
Teratoma generación en la cápsula del testículo
1Department of Chemical Physiology, Scripps Research Institute, 2Department of Chemical Physiology, Scripps Research Institute, 3Department of Reproductive Medicine, University of California
Las células madre pluripotentes (hPSCs) tienen el potencial para tratar una gran variedad de enfermedades diferentes. La utilidad de estas células reside en el hecho de que pueden diferenciarse en cualquier tipo de célula en el cuerpo. Aquí se describe el ensayo de teratoma, que se utiliza para demostrar la pluripotence de hPSCs.
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Regulación De La Expresión Génica ALF En Tejidos De Línea Somática Y Hombre Germen Implica Patrones De Metilación Parciales Y Específicos
ALF (TFIIAalpha/beta-como factor) es una contraparte de la célula de germen específico de la subunidad grande (Alfa/beta) del factor de transcripción general TFIIA. Aquí se aislaron homólogos promotores de GC-ricos del ratón y genes humanos de ALF y análisis de la canceladura del promotor usado para identificar secuencias activas en las células COS-7 y 293. Además, análisis de la secuencia de bisulfito del promotor ALF ratón demostró que todos los dinucleótidos CpG 21 entre-179 y 207 fueron parcialmente metilados en cinco tejidos somáticos, cerebro, corazón, hígado, pulmón y músculo y en espermatozoides epididimales de ratones adultos. En cambio, el ADN de testículo de ratón prepubertal y de espermatocitos purificadas eran unmethylated excepto en G de C (+ 19) y G. C + (170) También encontramos que la expresión de ALF se correlaciona con un fuerte promotor proximal ADNasa-hipersensible sitio presente en los núcleos del testículo pero no del hígado. Por último os mostramos que la metilación del promotor ALF in vitro inhibe la actividad y que el tratamiento 5-aza-2'-desoxicitidina reactiva el gen endógeno de ALF en un panel de siete ratón diferente y líneas de células somáticas humanas. En general los resultados muestran que el silenciamiento en células somáticas es dependiente de metilación y reversible y que precede a un único patrón de metilación CpG-específica en el promotor ALF expresión en espermatocitos paquiteno. Este patrón es transitoria, como remethylation del promotor en el ADN de las células germinales haploide ALF ha ocurrido por el momento existen espermatozoides en el epidídimo.
Expresión Del Factor De La Transcripción De La Célula De Germen Específico ALF En Ovocitos De Xenopus Compensa Traslacional Inactivación Del Factor Somático TFIIA
El descubrimiento de variantes de generales de la célula de germen específico la transcripción factor y coactivator ha sugerido que los tejidos reproductivos controlan algo diferentemente que tejidos somáticos expresión génica. Uno de estos factores, ALF (TFIIAtau), primero fue descrito como una contraparte del testículo-específicas de la subunidad grande (Alfa/beta) de TFIIA. Aquí se caracterizan actividades ALF y TFIIA endógenas en el africano Xenopus laevis de Xenopus laevis. ALF está presente en ambos testículos y ovario en este organismo, y lo substituye totalmente TFIIA en ovocitos inmaduros. Cuando ovocitos sufren maduración inducida por la progesterona, actividad ALF desaparece, y se restablezca la actividad TFIIA. La reactivación se produce a través de la para arriba-regulación traduccional de dos mRNAs de TFIIAalpha/beta maternas e implica poliadenilación de un módulo conservado 3'-región sin traducir. Los efectos de la sobreexpresión de ALF y ALF immunodepletion en una construcción de promotor de timidina cinasa demuestran que este factor sirve como un reemplazo activo para TFIIA. En contraste, la sobreexpresión de TFIIA inhibe la transcripción, lo que indica que el factor somático no funciona correctamente en el contexto de la maquinaria de transcripción de ovocitos. En general, los resultados muestran que la expresión regulada de forma recíproca de ALF y TFIIA permite la producción de un factor de generales de la transcripción del TFIIA-como activo a lo largo de la oogénesis.
Un Promotor De Base Corta Conduce Expresión Del Factor De Transcripción De ALF En Tejidos Reproductivos De Ratones Machos Y Hembras
El control de la expresión génica en tejidos reproductivos implica a un número de factores de transcripción de la célula de germen específico único. Un tal factor, ALF (tau TFIIA), codifica una proteína similar a la subunidad grande del factor de transcripción general TFIIA. Para entender cómo se regula este factor, caracterizamos ratones transgénicos que contienen el promotor ALF vinculado a reporteros de proteína fluorescente (GFP) beta-galactosidasa o verde. Los resultados muestran que tan sólo 133 pares de bases son suficientes para conducir con expresión precisa y específica de la célula. ADN transgénico fue metilado e inactivos en el hígado, pero podría reactivarse en vivo por la administración del sistema de 5-aza, 2'-desoxicitidina. Separación de celular activado por fluorescencia permitió la identificación de células germinales masculinas que expresan el transgén GFP y proporciona un método potencial para recoger células sería bajo el control de un sistema de transcripción nonsomatic. Finalmente, encontramos que las transcripciones del gene ALF endógeno y derivados de los transgenes también pueden detectarse en el ovario entero y en ovocitos de vesícula germinal-etapa de ratones femeninos. La secuencia ALF cae en una clase de células germinales promotores cuyas características incluyen tamaño pequeño, alto contenido de GC, numerosos dinucleótidos CpG y un elemento de TATA-como aparente. En general, los resultados definen un promotor de núcleo único que actúa en los tejidos reproductivos masculinos y femeninos y sugieren ratón ALF puede tener un papel regulador en los programas de expresión del gen gametogénico masculinos y femeninos.
Eficacia Protectora Y La Inmunogenicidad De Una Vacuna Inactivada De Origen Aviar H3N2 Influenza Canina En Perros Desafiados Con El Virus Virulento
Había divulgada la transmisión del virus de origen aviar de la gripe A (H3N2) a perros y desde entonces la infección del virus H3N2 en Corea del sur se ha producido varias veces en clínicas de animales y perreras del país. Perro-a-dog transmisión del virus también había demostrada experimentalmente por contacto directo. En este estudio, inmunogenicidad y eficacia protectora contra la exposición de provocación de la formalina-hizo inactivo H3N2 vacuna antigripal con un adyuvante de polímero sintético fue investigada en perros. Los cachorros de beagle recibieron dos inyecciones de vacuna inactivada por vía intramuscular 2 semanas aparte. Investigación serológica por una prueba de hemaglutinación inhibición (HI) y un ensayo ELISA indica que un aumento significativo en el título de anticuerpos aparecía 2 semanas después de la segunda vacunación. Signos clínicos, vertimiento del virus y las lesiones histopatológicas en los pulmones se exhibieron en los cachorros beagle vacunados desafiados directamente por vía intranasal con el virus 2 semanas después de la segunda vacunación. Sin embargo, los animales vacunados no presentaron signos clínicos y demostraron más leves lesiones patológicas pulmón y menor duración de vertimiento con cargas más bajas que los controles. Estos resultados indicaron que el polímero sintético-adyuvante origen aviar canina (CIV) vacuna antigripal había producido respuesta de anticuerpos y la protección del desafío CIV de origen aviar en perros.
Prevalencia Y Análisis Filogenético De Los Aislados De Tipo I Disgenésico Y Virus Del Síndrome Respiratorio De 2007 a 2008 En Corea
La primera cepa coreana de disgenésico y virus de síndrome respiratorio (porcino PRRS) fue aislada en 1997, y exhibió gran similitud con la cepa VR-2332 (tipo II PRRSV; Tipo de norte americano). Recientemente, sin embargo, la infección con tipo PRRS (tipo europeo) ha también sido divulgado en Corea. Hasta la fecha, los datos preliminares sobre tipo I prevalencia de PRRS en Corea no se han divulgado. Aquí, usando la transcriptasa reversa (RT)-polimerización en cadena, se analizaron 383 muestras de campo archivados de 101 granjas porcinas en Corea que se recolectaron de 2007 a 2008. Identificamos 155 muestras de 68 granjas que eran positivas para PRRS. Muestras de cincuenta y un (51/155; 32.9%) y 20 establecimientos (20/68; 29,4%) fueron de tipo I PRRS positivos/tipo II PRRSV negativo. Además, hemos intentado aislar al tipo me PRRSV de muestras positivas y tipo siete me PRRS fueron aislados con PAM. El análisis filogenético usando el tipo me PRRSV aísla (7 aislados) se realizó basado en el marco de lectura abierta (ORF) 5 (número de acceso GU325642 a GU325648) y ORF7 (adhesión números GU325635 a GU325641). En el estudio filogenético, siete tipo I PRRSV aislamientos estuvieron estrechamente relacionadas con paneuropea basada en ORF7, mientras que ellos eran genéticamente distintos virus Lelystad y hecho un clado único basado en ORF5. Los resultados de este estudio demuestran que la infección con el tipo I PRRSV no es infrecuente en Coreano porcícolas, que sugiere que diagnóstico y control de tipo me PRRSV debería considerarse en Corea. Un nuevo enfoque para la vacunación contra y análisis epidemiológico de, PRRS Coreano es urgentemente necesaria.
Retracción De Plaquetas Dinamometría Utilizando Sensores De Fuerza Poste Flexible
Las plaquetas desempeñan un papel importante en la hemostasia formando un enchufe trombótico que sella la pared del vaso y promueve la curación vascular. Después de que las plaquetas se adhieren y agregan en el sitio de la herida, su próximo paso es generar fuerzas contráctiles a través de la coordinación de las interacciones fisicoquímicas entre receptores de integrina alpha(IIb)beta(3) que retracción tamaño el trombo y fortalecer su adhesión a la matriz expuesta, actina y miosina. Aunque las fuerzas contráctiles de plaquetas (PCF) son una característica definitiva de hemostasia y trombosis, hay algunos enfoques que pueden medir directamente. En este estudio, describimos el desarrollo de un método para medir el PCF en microthrombi utilizando una matriz de sensor de fuerza microscópica poste flexible. Se efectuaron mediciones cuasi y viva imágenes microscópicas de plaquetas activado por trombina en los postes para analizar el desarrollo del PCF a varias condiciones hemostáticos. Se observaron microthrombi producir fuerzas que monótonamente creciente con el tiempo de concentración y la activación de la trombina, pero las fuerzas se desplomaron cuando la trombina se retiró. PCF resultados fueron estadísticamente similares en matrices de mensajes impresos con la fibronectina o fibrinógeno. Mediciones de PCF se combinaron con las mediciones de volumen del coágulo para determinar que la fuerza promedio por plaquetas fue 2.1 +/-0.1 nN después de 60 minutos, que es muy superior a lo que se ha medido con planteamientos previos. En general, las matrices de poste flexible para mediciones de PCF son un enfoque prometedor para evaluar la funcionalidad de la plaqueta, fisiología plaquetaria y patología, los impactos de diferentes matrices o agonistas en respuestas hemostáticas y en el suministro de información crítica sobre la actividad de plaquetas que puede guiar nuevas estrategias hemostáticas o trombóticas.
Asociación Entre El Vertimiento Nasal Y Fiebre Que Induce La Gripe A (H3N2) En Perros
Virus de la influenza canina de origen aviar fue divulgado en Corea. La transmisión de un perro a otro contacto de virus de la influenza canina de origen aviar (CIV) H3N2 y CIV H3N8 fue demostrada por la transmisión por contacto experimental. Este estudio se centró en la excreción viral y la fiebre para aclarar las asociaciones epidemiológicas que podrían ser útiles para controlar las transmisiones de la enfermedad en brote de CIV en perros.
Simulaciones Del Ciclo Contráctil En La Migración Celular Mediante Un Modelo Bio-químico-mecánico
Migración celular depende de las fuerzas de tracción para propulsar una célula. Se han desarrollado varios modelos computacionales que ayudan a explicar la trayectoria que toman las células durante la migración, pero poca atención se ha colocado a las fuerzas de tracción durante este proceso. Aquí, hemos investigado la dinámica espacio-temporal de migración celular utilizando un modelo biomecánico-química contractilidad que incorpora los primeros pasos de la migración celular en una serie de mensajes. En el modelo, la formación de una nueva adhesión causa una reactivación de la Asamblea de fibra de estrés dentro de una célula. El modelo fue capaz de predecir la distribución espacial de las fuerzas de tracción con experimentos anteriores. Por otra parte, el modelo encontró que la energía de tensión ejercida por las fuerzas de tracción de una migración celular experimentó una relación cíclica que se levantó con la formación de una nueva adhesión y cayó con el lanzamiento de una adhesión en su parte trasera.
Rigidez Del Substrato Aumenta La Potencia De La Contracción De Cardiomiocitos Neonatales En Correlación Con Los Cambios En La Estructura De Miofibrillas Y Calcio Intracelular
Durante el desarrollo neonatal, hay un aumento en la rigidez miocárdica que coincide con un aumento en la contractilidad del corazón. Estudios in vitro han demostrado que la rigidez del sustrato desempeña un papel en la regulación de las fuerzas de contracción producidas por los cardiomiocitos inmaduros. Sin embargo, su efecto sobre el poder de contracción es confuso debido a las dificultades en la medición de la velocidad de contracción de cardiomiocitos. Aquí, presentamos lo que consideramos un nuevo enfoque para cuantificar la potencia de contracción combinando la resolución temporal de línea óptica de exploración con la resolución de fuerza subcelular de micropost matrices. Desde este enfoque, potencia de contracción fue encontrado para ser mayor de células cultivadas en posts más rígidos, a pesar de tener menores velocidades de contracción. El aumento del poder fue atribuido en parte a miofibrilla mejorada estructura (sarcómero mayor longitud y anchura de banda Z) y los niveles de calcio intracelular. Tinción inmunofluorescente de la α-actina reveló que los cardiomiocitos tenían mayor longitud del sarcómero y anchura de banda Z cuando cultivadas en arreglos de discos más rígidos. Por otra parte, la concentración de calcio intracelular y su ascenso con cada contracción de contracción fue mayor en las células en los postes más rígidos. En conjunto, estos resultados indican que los cardiomiocitos responden a rigidez de sustrato con cambios biomecánicos y bioquímicos que conducen a un aumento en la contractilidad cardiaca.
