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Articles by Santosha Vardhana in JoVE
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免疫シナプスとKinapseの研究の形成のためのサポートされている平面二重層
サポートされている平面脂質二重層は、免疫学的シナプスの分子間相互作用をモデル化するために使用できる強力なツールです。ここで、我々は、脂質のbilyerの上部のリーフレットにシナプス形成を調節し、全反射顕微鏡を用いてシナプス形成を可視化するために知られている細胞接着タンパク質を固定するための方法を示しています。
Other articles by Santosha Vardhana on PubMed
T細胞、樹状細胞の免疫学的シナプスは、TCR-依存CD28-CD80クラスターを含むものリクルートプロテインキナーゼCシータ
短命のTCRマイクロクラスターと長い寿命のタンパク質キナーゼCthetaフォーカシング中央の分子活性化クラスター（cSMAC）がモデル免疫シナプス（IS）で定義されています。別のモデルシステムでは、CD28媒介刺激の相互作用はマイクロクラスター、cSMACで検出されている、またはTCRを形成する複数の異なる病巣から分離。 T細胞の樹状細胞（DC）があいまいなの生理学的にTCRと共刺激分子の間の関係があります。 T細胞-DCにおけるCD28-CD80とTCRの相互作用の動的な関係を勉強するには銀特異的T細胞活性化時には、我々は、細菌人工染色体形質転換技術を用いてCD80-ECFPのマウスを作製した。脾臓の樹状細胞は、内因性のCD80とCD80-ECFPは細胞膜やゴルジ体に局在し、CD80-ECFPは、生体内で機能していた。 OT-II T細胞-DCと、複数の分離されたTCR、CD80、およびLFA-1のクラスタが検出された。 T細胞-DCシナプスCD80クラスターにCD28とPKCtheta、cSMACの特性と共局在した。抗MHC抗体とシグナリングTCRの急性閉塞は、Ca（2 +）シグナリングとCD80クラスターの数とサイズ、TCRマイクロクラスターの特性が急激に減少した。したがって、T細胞-DCインタフェースは、マイクロクラスターとcSMACsの特性を共有、動的刺激の病巣を含んでいます。
クラスIIホスファチジルイノシトール3キナーゼC2betaはK +チャネルKCa3.1およびCD4 T細胞の活性化に必要である
のCa（2 +）活性化K（+）チャネルKCa3.1は、Ca（2 +）流入とT細胞のその後の活性化が必要となります。我々は以前にそのヌクレオシド二リン酸キナーゼβ（NDPK-B）、哺乳類のヒスチジンキナーゼは、直接リン酸化と活性化KCa3.1し、ヒトCD4 Tリンパ球の活性化に必要であることを示した。我々は今、クラスIIのホスファチジルイノシトール3キナーゼC2beta（PI3K-C2beta）はKCa3.1チャネル活性を活性化する上流のNDPK-BのT細胞受容体（TCR）と機能によって活性化されることを示している。ヒトCD4 T細胞におけるsiRNAによるPI3K-C2betaの発現低下はKCa3.1チャネル活性の阻害をもたらした。阻害はホスファチジルイノシトール3 - リン酸[PI（3）P]が減少したことによるものPIとT細胞PI3K-C2betaのsiRNAで処理した透析ので、（3）PはKCa3.1チャネル活性を救助した。また、KCa3.1トランスフェジャーカットT細胞におけるPI3K-C2betaの過剰発現は増加したTCR刺激KCa3.1の活性化とCa（2 +）流入は、PI3K-C2betaのサイレンシングのに対し、両方の応答を抑制につながった。内部全反射蛍光顕微鏡と平面脂質二重膜を使用して、我々はPI3K-C2betaは免疫学的シナプスにおける末梢微小クラスターにおけるZAP70とTCRと共局在していることがわかった。これは、クラスII PI3KはT細胞活性化において重要な役割を果たしていることを初めて実証します。
中央分子活性化クラスターの形成と機能のユビキチンとTSG101タンパク質の重要な役割
免疫学的シナプスにおけるアゴニストMHC-ペプチド複合体（IS）を中央の分子活性化クラスター（cSMAC）に収束するT細胞受容体（TCR）マイクロクラスター（MCS）を介して信号。 cSMACの決定と機能は不明のままである。我々はcSMACでの信号処理のイベントで、HRSのために以下のようにユビキチン（Ub）とTSG101のために重要な役割を示しますが、。一次T細胞にsiRNAを使用して、我々はそのTSG101によってユビキチン認識がcSMAC形成、TCR MCの信号終端、TCRのダウンレギュレーション、およびPKC-θ濃縮シグナル伝達複合体からTCR-MHC-ペプチドの分離が必要となります。表示の中心部に解離が募集TSG101がないと弱いアゴニストMHC-ペプチド誘導CD80依存のTCRのMC。これらの結果は、TCRのダウンレギュレーションのための分子チェックポイントとして、CD80非依存性のTCR MCのTSG101依存の認識をサポートしています。
