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Articles by Santosha Vardhana in JoVE
JoVE General
면역 시냅스와 Kinapse 연구의 형성을위한 지원 평면 Bilayers
지원되는 평면 bilayers는 면역 버렸네에서 분자 상호 작용을 모델로 사용할 수있는 강력한 도구입니다. 여기, 우리는 지질 bilyer의 위쪽 전단지에 버렸네 형성을 조절하고 TIRF 현미경을 사용하여 버렸네 형성을 시각화하는 것으로 알려진 세포 부착 단백질을 고정하는 방법을 보여줍니다.
Other articles by Santosha Vardhana on PubMed
T 세포 수지상 세포 면역 냅 단백질 키 니 아 제 C 세타 모집 TCR 종속 CD28-CD80 클러스터 포함
단기 TCR microclusters 및 최소로 단백질 키 니 아 제 Ctheta 초점을 중앙 supramolecular 활성화 클러스터 (cSMAC) 모델 면역 냅 (IS)에 정의 되어 있습니다. 다른 모델 시스템에서 CD28-중재 costimulatory 상호 작용에서 microclusters, cSMAC, 또는 여러 가지 foci 형성 TCR에서 차별 된. TCR과 T 세포 수지상 세포 (DC)의 생리 적 IS costimulatory 분자의 관계는 애매 한. Ag 관련 T 세포 활성화 하는 동안 CD28 cd80의 동적 관계 및 T 세포-DC는 TCR 상호 작용 연구 CD80 eCFP 마우스 세균 인공 염색체 유전자 변형 기술을 사용 하 여 생성 되었습니다. 비장 DCs, 생 CD80 CD80 eCFP 플라즈마로 막와 Golgi 기구 그리고 CD80 Ecfp는 vivo 기능. 2 차 연장 전 T 세포-DC는 여러 차별된 TCR, CD80, 및 LFA-1 클러스터 검출 했다. T 세포-DC 냅 CD80 클러스터 cd28와 Pkctheta는 Csmac의 특성 colocalized 했다. 안티-MHC Ab와 신호 TCR의 급성 봉쇄 Ca(2+) 신호에 급속 한 감소와 수 TCR microclusters 특성 CD80 클러스터의 크기에서 결과. 따라서, T 세포-DC 인터페이스의 microclusters 및 cSMACs 특성을 공유 하는 동적 costimulatory foci 포함 됩니다.
클래스 II Phosphatidylinositol 3 니 C2beta는 CD4 T-세포와 K + 채널 Kca3.1의 활성화 필요 합니다
Ca(2+) 활성화 K(+) 채널 Kca3.1는 Ca(2+) 유입 및 T-세포의 후속 활성화 필요 합니다. 우리 이전에 그 뉴 클레 오 시드 diphosphate 니 베타 (NDPK-B), 포유류 히스티딘 니 직접 phosphorylates 및 Kca3.1을 활성화 주며 인간의 CD4 T 세포의 활성화를 위해 필요. 우리 이제는 클래스 II phosphatidylinositol 3 키 C2beta 표시 (PI3K-C2beta) T 세포 수용 체 (TCR)에 의해 활성화와 상류 기능 KCa3.1 활성화 NDPK-B의 채널 활동. 인간의 CD4 T-세포에 Sirna에 의해 PI3K-c2beta의 감소 표현 KCa3.1 채널 활동의 저해 귀착되 었 다. Dialyzing PI3K C2beta siRNA 취급 T-셀 파이 (3) P 구조 KCa3.1 채널 활동 때문에 억제 감소 phosphatidylinositol 3-인산 염 [파이 (3) P] 때문 이었다. 또한, PI3K c2beta의 입을 모두 응답을 저해 하는 반면 KCa3.1 페 Jurkat T 세포에서 PI3K-C2beta overexpression KCa3.1 및 Ca(2+) 유입의 증가 TCR 자극 활성화를 이끌었다. 총 내부 반사 형광 현미경 검사 법 및 평면 지질 bilayers를 사용 하 여, PI3K C2beta zap70와 TCR 면역 냅 주변 microclusters에서 colocalized를 찾았습니다. 이것은 첫 번째 데모 클래스 II PI3K T 세포 활성화에 중요 한 역할을 한다입니다.
유비퀴틴의 TSG101 단백질 형성과 중앙 Supramolecular 활성화 클러스터의 기능에 필수적인 역할
길 항 제 중앙 supramolecular 활성화 클러스터 (cSMAC)로 수렴 하는 T 세포 수용 체 (TCR) microclusters (MCs)을 통해 면역 냅 (IS) 신호에서 MHC 펩 티 드 복합물. 결정 요인 및 함수는 Csmac의 알 수 없는 남아 있습니다. 우리 유비퀴틴 (Ub)와 TSG101, 필수적인 역할을 증명 하지만 덜 그래서 시간를 위한 신호에는 Csmac에서 이벤트를 처리 합니다. Sirna를 사용 하 여 기본 T 세포에서 우리는 Ub 인식 하 여 TSG101 cSMAC 형성, TCR MC 신호 종료, TCR downregulation 및 PKC 세타 농축 신호 단지에서 TCR MHC 펩 티 드의 분리에 대 한 필요는 보여줍니다. 약한 길 항 제 MHC 펩 티 드 TSG101 모집 없이 IS의 중심에서 해리 CD80 종속 TCR MCs 유발. 이러한 결과 TCR downregulation의 분자 검사점으로 CD80 독립적인 TCR Mcs의 TSG101 종속 인식을 지원합니다.
