Transpiración Por Dos Variedades De álamo Cultivadas Como Monte Para Producción De Biomasa

Tree Physiology. Jul, 1999  |  Pubmed ID: 12651539

Clones de árboles de rápido crecimiento seleccionadas para las plantaciones de biomasa son altamente productivas y por lo tanto es probable que utilice más agua que los cultivos agrícolas que reemplazan. Divulgamos las mediciones de campo de transpiración durante el verano de 1994 de dos clones de álamo, Beaupré (Populus trichocarpa a Torr. &. Gray x p. deltoides Bartr. ex Marsh) y Dorschkamp (p. deltoides x p. nigra L.), crecido como secano corta rotación Monte al sur de Inglaterra. Soporte de la transpiración se cuantificó por intensificación de mediciones de flujo de sap con el método del balance de calor en una muestra de tallos. Conductancias de hoja, desarrollo de área foliar, variables meteorológicas y déficit de agua del suelo también se midieron para investigar la respuesta de los árboles para el medio ambiente. Altas tasas de transpiración se encontraron Beaupré. En junio, cuando el agua del suelo era abundante, la tasa de transpiración media (+/-SD) durante un período de 18 días era 5.0 + /-1,8 mm day(-1), alcanzando un máximo de 7,9 mm day(-1). Las tasas de transpiración de Dorschkamp eran más bajas, como consecuencia de su menor índice de área foliar. Se midieron las conductancias foliar total alta para ambos Beaupré (0,34 +-0,17 mol m(-2) s(-1)) y Dorschkamp (0.39 +/-0.16 mol m(-2) s(-1)). Conductancia de la hoja se redujo ligeramente con el aumento del déficit de presión de vapor atmosférica en ambos clones, pero sólo en Beaupré hoja de disminución de la conductancia como déficit de agua del suelo aumentada.

Reclutamiento Selectivo Y Dependiente De La Señal De Las Proteínas De La Membrana a Los Gránulos Secretores Formados Por Heterologously Expresa El Factor De Von Willebrand

Molecular Biology of the Cell. May, 2002  |  Pubmed ID: 12006654

factor de von Willebrand (vWF) es una grande, proteína multimérica secretada por las células endoteliales e implicados en la hemostasia. Cuando se expresan en células AtT-20, vWF conduce a la formación de novo de organelos en forma de cigarro similares en apariencia a los cuerpos de Weibel-Palade de células endoteliales que vWF normalmente se almacena antes de secreción regulada. Las membranas de este orgánulo vWF-inducida, denominado la pseudogranule, son desacostumbradas. Hemos examinado la capacidad de estos pseudogranules, que les mostramos son secretagogos sensible, a reclutar a las proteínas de la membrana. Coexpresión experimentos muestran las proteínas del cuerpo de Weibel-Palade P-selectina y CD63, así como el orgánulo secretores membrana proteínas asociada a vesículas de la membrana protein-2 y synaptotagmin se desvían de los gránulos secretores que contienen la hormona adrenocorticotrópica endógenos a las pseudogranules que contienen vWF. Sin embargo, no son reclutados del receptor de transferrina, proteína de la membrana lisosomal asociada 1 y sialil transferasa. La contratación de P-selectina depende de un motivo basado en tirosina dentro de su dominio citoplásmico. Nuestros datos muestran que pseudogranules de vWF contratar específicamente un subconjunto de las proteínas de la membrana, y que en un proceso impulsado explícitamente por el contenido de pseudogranule (es decir, vWF), la contratación activa de al menos un componente de la membrana de pseudogranule (es decir, P-selectina) es dependiente de residuos de la P-selectina citosólica y por lo tanto incapaz de interactuar directamente con vWF.

Análisis Del Proteoma Citosólico En Un Modelo De Cultura De La Célula De La Esclerosis De Lateral Amiotrófica Revelan Alteraciones En El Proteasoma, Las Defensas Antioxidantes Y Vías Sintéticas De óxido Nítrico

The Journal of Biological Chemistry. Feb, 2003  |  Pubmed ID: 12475980

Daño a las neuronas motoras asociadas con mutante Cu, Zn-superóxido dismutasa (SOD1)-relacionadas con la esclerosis de lateral amiotrófica (FALS) resulta de una ganancia de función tóxica de la enzima. Los mecanismos que alteraciones SOD1 provocan muerte neuronal siguen siendo inciertos a pesar del esfuerzo de investigación intensiva. Análisis de las proteínas celulares que se expresan diferencialmente en presencia de mutante SOD1 representa un nuevo enfoque para investigar más a fondo esta ganancia de función tóxica. Utilizando la línea celular de la neurona motora-como NSC34 estable transfectadas con wild-type, G93A, o G37R mutante humano SOD1, investigamos los efectos del mutante humano SOD1 en expresión de la proteína utilizando enfoques proteómicos. Proteínas regulado hasta siete fueron identificadas como Argininosuccinato Sintasa, ARGININOSUCCINATO LIASA, neuronal sintasa de óxido nítrico, proteína de unión a RNA motivo 3 peroxirredoxina I, beta de la subunidad del proteasoma 5 (X) y glutatión S-transferasa (GST) Alpha 2. Proteínas regula siete fueron identificadas como GST Mu 1, GST Mu 2, GST Mu 5, un hipotético Mu GST GST Pi B, leucotrienos B(4) 12-hydroxydehydrogenase y proteasoma subunidad beta5i (LMP7). GST ensayos demostraron una reducción significativa en la actividad de GST total de células que expresaban mutante humano SOD1. Proteasoma ensayos demostraron reducciones significativas en quimotripsina-como, tripsina y actividades de post-glutamylhydrolase proteasoma. Microdissection de la captura del laser de las neuronas motoras de la médula espinal de los casos humanos de FALS, junto con transcriptasa inversa-PCR, demostrada disminuida de niveles de mRNA codificación GST Mu 1, leucotrienos B(4) 12-hydroxydehydrogenase y LMP7. Estos acercamientos combinados proporcionan más evidencia de la implicación de alteraciones en las defensas antioxidantes, función del proteasoma y metabolismo del óxido nítrico en la patofisiología de FALS.

No Se Requieren Para Virulencia De Amastigote O Para La Inhibición De La Activación De Los Macrófagos Por Leishmania Major Glycosylinositolphospholipids Y éter Fosfolípidos

The Journal of Biological Chemistry. Nov, 2003  |  Pubmed ID: 12944391

Éter fosfolípidos son componentes importantes de las membranas de los seres humanos y Leishmania. En protozoos parásitos que se presentan por separado o como parte del ancla glicosilfosfatidilinositol (GPI) de moléculas implicadas en la virulencia, como lipophosphoglycan (LPG), más pequeño glycosylinositolphospholipids (GIPLs) y proteínas GPI-ancladas. Hemos generado a mutantes nulos de la Leishmania alkyldihydroxyacetonephosphate principales sintasa (ADS), el primer paso comprometido de la síntesis de lípidos de éter. Análisis enzimático y espectrometría de masa integral demostraron que carecían de ads1-knock-outs todos los fosfolípidos de éter, incluyendo plasmalógenos, LPG y GIPLs. Leishmania ads1 - así representa el eucariotas primera "éter lípidos-síntesis" que podría obtenerse un mutante nulo completamente. Notable ads1 - creció bien y mantuvo las balsas lipídicas (membranas resistentes a detergentes). En ensayos de virulencia cerca parecía LPG-deficiente L. major, incluyendo sensibilidad para complementar e incapacidad para sobrevivir a la fase inicial de la infección de macrófagos. Además conservó la capacidad de inhibir la señalización de las células huésped y para formar los amastigotes infecciosos de los parásitos pocos sobreviven el defecto del establecimiento. Estos resultados contrarrestar las propuestas actuales que GIPLs son necesarios para la supervivencia de amastigote en el anfitrión mamífero o eso parásito lyso-alquilo o alkylacyl-GPI anclajes están el único responsables de la inhibición de la activación de los macrófagos.

Identificación De Un Operón Biosintético ácido 3-deoxy-D-manno-octulosonic En El Análisis De Un Mutante Isogénicas KdsA Deficientes Y Moraxella Catarrhalis

Infection and Immunity. Nov, 2003  |  Pubmed ID: 14573664

Lipooligosaccharide (LOS), un componente predominante de la superficie expuesta de la membrana externa, se ha implicado como un factor de virulencia en la patogenesia de Moraxella catarrhalis infecciones. Sin embargo, los pasos críticos implicados en la biosíntesis y Asamblea de M. catarrhalis permanecen LOS undefined. En este estudio, utilizamos mutagénesis al azar transposon para identificar un operón biosintético de ácido 3-deoxy-D-manno-octulosonic (KDO) en M. catarrhalis con la orden del gen pyrG-kdsA-eno. La molécula de lípido A-KDO sirve como aceptor en el que una variedad de glicosil transferasas secuencialmente añadir las extensiones de oligosacárido núcleo y rama para la molécula de LOS. KdsA, el KDO-8-fosfato sintasa, cataliza el primer paso de la biosíntesis KDO y es una enzima esencial en bacterias entéricas Gram negativas para el mantenimiento de la viabilidad bacteriana. Divulgamos la construcción de un mutante de kdsA de catarrhalis isogénicas M. en cepa 7169 por intercambio alélica. Nuestros datos indican que una molécula de LOS únicamente de lípido A y carecer de KDO glicosilación es suficiente para mantener la supervivencia de M. catarrhalis in vitro. Además, análisis comparativos de crecimiento y susceptibilidad se realizaron para evaluar la sensibilidad de 7169kdsA11 comparada con la de la cepa parental. Los resultados de estos estudios demuestran que la molécula de LOS nativa es un factor importante para mantener la integridad de la membrana externa y sugieren que LOS es un componente crítico en la capacidad de M. catarrhalis para resistir la actividad bactericida del suero humano.

Las Estructuras Y Las Transiciones De Fase De Trigonal ZrMo2O8 Y HfMo2O8

Acta Crystallographica. Section B, Structural Science. Feb, 2004  |  Pubmed ID: 14734842

Este documento describe la estructura, propiedades de expansión térmica y transiciones de fase de las formas trigonales de ZrMo(2)O(8) y HfMo(2)O(8). Ambas fases adoptan una estructura de 3 m de P (-) a temperatura ambiente y Mostrar la expansión térmica positiva. Ambas fases también someterse a una transición de fase displacive a altas temperaturas (ZrMo(2)O(8) en 487 K) y HfMo(2)O(8) a 463 K a una estructura de mayor simetría que tiene una menor expansión térmica. La estructura de la forma de alpha'-AMo(2)O(8) de alta temperatura (A = Zr y Hf) ha sido refinado de polvo datos de difracción en grupo del espacio P (-) 3 m 1.

La Naturaleza Del Intercambio De Oxígeno En ZrW2O8 Reveladas Por RMN Bidimensional 17O De Estado Sólido

Chemical Communications (Cambridge, England). Feb, 2004  |  Pubmed ID: 14765224

17O mágico ángulo giro NMR (MAS) se ha utilizado para determinar la naturaleza del intercambio de oxígeno en ZrW(2)O(8). Se ha desarrollado una técnica altamente efectiva de etiquetado isotópica y NMR de 1D y 2D intercambio espectroscopia (EXSY) experimentos han revelado que el intercambio se produce entre todos los sitios de oxígeno, incluso a temperaturas considerablemente por debajo de la alfa para la transición de fase beta orden-desorden.

Seguridad Y Eficacia De Rescate Celular De Perioperatoria Y Autotransfusión Después Coronaria De Injerto De Derivación: Un Ensayo Seleccionado Al Azar

The Annals of Thoracic Surgery. May, 2004  |  Pubmed ID: 15111142

El objetivo de este estudio fue determinar si rescate celular y autotransfusión después primer tiempo electivo coronaria injerto de derivación se asocia con una reducción significativa en el uso de sangre homóloga, un derangement clínicamente significativo del postoperatorios perfiles de coagulación o un mayor riesgo de hemorragia postoperatoria.

Caracterización De Un Racimo De Tres Glicosiltransferasa Enzimas Esenciales Para El Montaje De Moraxella Catarrhalis Lipooligosaccharide

Journal of Bacteriology. May, 2005  |  Pubmed ID: 15838019

Moraxella catarrhalis aísla expresa lipooligosaccharide (LOS) moléculas en su superficie, que comparten epítopes similar a la de las especies de Neisseria y Haemophilus. Estos epitopos de LOS comunes se han implicado en varios pasos de la patogenesia de los diferentes organismos. En este estudio, un grupo de tres genes de glicosiltransferasa LOS (lgt) identificaron en M. catarrhalis 7169, una cepa que produce un serotipo B LOS. Se construyeron mutantes en estos genes glicosiltransferasa y los fenotipos de LOS resultantes eran constantes con diversos grados de truncamiento en comparación con LOS de tipo salvaje. Las estructuras de LOS de cada mutante de la lgt no fueron detectadas por un anticuerpo monoclonal (MAb 4 5) específico a un epitopo terminal altamente conservado ni por un anticuerpo monoclonal (MAb 3F7) específico para el serotipo cadena lateral de LOS B. Espectrometría de masas de la glicoformas de LOS ensamblados por dos de estos mutantes lgt indicó que PGT1 codifica una glucosiltransferasa de alpha(1-2) y el PGT2 codifica una galactosyltransferase de la Unión. Sin embargo, estos estudios estructurales no podrían delinear la función para PGT3. Por lo tanto, M. catarrhalis PGT3 fue introducido en una glucosiltransferasa Unión definida Haemophilus ducreyi 35000glu-mutante en el transporte, y el anticuerpo monoclonal análisis confirmó que PGT3 complementa el defecto de LOS. Estos datos sugieren que PGT3 codifica una glucosiltransferasa involucrado en la adición de una glucosa de beta(1-4)-ligado al núcleo interno. Por otra parte, concluimos que este paso enzimático es esencial para el montaje de la glucoproteína completa de LOS expresado por M. catarrhalis 7169.

Mutante SOD1 Altera El Transcriptoma Neuronal Motor: Implicaciones Para El ALS Familiar

Brain : a Journal of Neurology. Jul, 2005  |  Pubmed ID: 15872021

La esclerosis de lateral amiotrófica (FALS) es causada, en 20% de los casos, por mutaciones en el gene de Cu/Zn superóxido dismutasa (SOD1). Aunque la lesión de la neurona motora se produce a través de un aumento de tóxico de función, los mecanismos precisos sigue siendo confuso. Utilizando un modelo celular de NSC34 establecido SOD1 asociado Fals, investigó los efectos del mutante SOD1 específicamente en células modelado la población vulnerable de la célula, las neuronas motoras, sin contaminación de células no neuronales presentes en el SNC. Utilizando el perfil de expresión génica, 268 transcripciones fueron expresadas diferencialmente en presencia de mutante humano SOD1 G93A. De estos, 197 fueron disminuidos, demostrando que la presencia de mutante SOD1 conducen a un grado considerable de represión transcripcional. Entre ellos eran un grupo de elemento de la respuesta antioxidante (son) genes codifican enzimas desintoxicantes de fase II y proteínas de respuesta antioxidante (llamados genes 'programado la vida'), la expresión de que es regulada por el factor de transcripción NRF2. Proporcionamos evidencia dysregulation de Nrf2 y son, juntada con la pentosa fosfato vía actividad reducida y disminuyó la generación de NADPH, representa importante y hasta ahora desconocida de componentes de los tóxico ganancia de función del mutante SOD1. Otros genes de interés significativamente alterado en presencia de mutante SOD1 incluyen varios previamente implicados en la neurodegeneración, así como genes implicados en la degradación de las proteínas, la respuesta inmune, muerte/supervivencia celular y la respuesta de choque de calor. Estudios preliminares en motoneuronas aislados de casos de la enfermedad de motoneurona SOD1 asociado sugieren también diferentemente se expresan genes clave en la enfermedad humana.

Transportador De La Novela De ácido Siálico De Haemophilus Influenzae

Infection and Immunity. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16113244

Nontypeable Haemophilus influenzae es un patógeno oportunista y una causa común de la otitis media en niños y de bronquitis y neumonía en pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica. Los lipooligosaccharides, un componente importante de la membrana externa de H. influenzae, juega un papel importante en la patogenicidad y virulencia microbiana. Ácido N-acetilneuramínico (ácido siálico) puede ser incorporado en el lipooligosaccharides como un azucarillo nonreducing terminal. Aunque gran parte de la vía de la incorporación de ácido siálico en lipooligosaccharides se entiende, el transportista responsable de la absorción de ácido N-acetilneuramínico en H. influenzae aún tiene que definirse. En este trabajo demostramos que este transportador es un transportador de azúcar de novela de la familia de transportador periplasmic tripartita de ATP-independiente. En ausencia de este transportador, H. influenzae no puede incorporar ácido siálico en su lipooligosaccharides, haciendo el organismo incapaz de sobrevivir cuando se expone al suero humano y causando reduce la viabilidad en el crecimiento del biofilm.

Monocapa Versus Cierre De Múltiples Capas De Pierna Heridas Después De La Cosecha De La Vena Safena Larga: Un Estudio Prospectivo Aleatorizado

The Annals of Thoracic Surgery. Dec, 2005  |  Pubmed ID: 16305864

La vena safena larga cosechada por las técnicas tradicionales es una vía importante para injerto de bypass de arteria coronaria (CABG). El propósito de este estudio fue determinar si un cierre de una sola capa sobre un drenaje mejora la cicatrización de heridas en comparación con el cierre de dos capas tradicional después de la cosecha.

Deterioro De La Defensa Antioxidante Mitocondrial En Lesiones Relacionadas Con El SOD1 Motoneurona Y Mejoramiento Por Ebselen

Brain : a Journal of Neurology. Jul, 2006  |  Pubmed ID: 16702190

Hay ahora convincente evidencia de la disfunción mitocondrial en la enfermedad de la motoneurona (EMN), pero la base molecular de estas anormalidades es desconocido. Se desconoce también si la disfunción mitocondrial observada desempeña un papel central en la patogénesis de la enfermedad y en caso afirmativo, si su mejoramiento podría presentar oportunidades terapéuticas. Adoptamos una generación candidato EMN familiar (fMND) relacionados con el enfoque utilizando proteómica a pantalla para cambios en la expresión de la proteína mitocondrial en un modelo de cultivo de células bien validados de la superóxido dismutasa 1 (SOD1). Cambiantes de las proteínas fueron identificadas por espectrometría de masas de tiempo de vuelo (MALDI-TOF) de desorción/ionización de láser asistida por matriz. Candidatos de proteína incluyen reguladores de la apoptosis, antioxidantes y componentes de la cadena de transporte de electrones. Confirmatoria Western Blot fue realizada y validado la expresión de la proteína cambios estaban investigando. Peroxirredoxina 3 (Prx3), un hydroperoxidase tiorredoxina dependiente mitocondrial, es regulada en presencia de mutante SOD1 en tanto nuestro modelo de cultivo celular y en la mitocondria de la médula espinal de ratones transgénicos de mutantes SOD1. Confirmamos la expresión de Prx3 dentro de la mitocondria de las motoneuronas espinales en ratón y humanos por inmunohistoquímica. Mediante PCR cuantitativa a tiempo real (Q-PCR), demostramos que Prx3 también es regulada en motoneuronas espinales de pacientes con esporádico (sMND) y fMND relacionadas con el SOD1. En una enfermedad caracterizada por el estrés oxidativo, esto representa un déficit potencialmente importante en la defensa antioxidante mitocondrial. La evidencia reciente sugiere que estrés oxidativo de la química de cobre aberrante no pueden jugar un papel importante en la patogenesia de fMND relacionadas con el SOD1. De los resultados de este estudio se propone interrupción de defensa antioxidante mitocondrial como un mecanismo alternativo por el mutante SOD1 puede generar estrés oxidativo dentro de las neuronas motoras. Además, demostramos que ebselen, una droga antioxidante ya con seguridad usada en estudios en seres humanos y actúa como un imitador de Prx, es capaz de mejorar la toxicidad del mutante SOD1 en nuestro modelo de cultivo de células. Nos concluir mostrando que eso ebselen es capaz de inducir la transcripción del elemento respuesta antioxidante (ARE) y postulan que Ebselen puede actuar tanto por la regulación transcripcional al alza de proteínas antioxidantes y directamente como un antioxidante por méritos propios.

A Prospective Randomized Comparación De Mosaico De Medtronic Y Carpentier-Edwards-SAV En La Posición Aórtica: Un Informe Provisional

The Journal of Heart Valve Disease. May, 2006  |  Pubmed ID: 16784086

El objetivo del estudio fue comparar prospectivamente el rendimiento clínico y durabilidad a largo plazo de las bioprótesis (CE-SAV) porcinas mosaico de Medtronic y Carpentier-Edwards en la posición aórtica durante 10 años.

Extracorpórea Sin Parada Isquémica: Una Estrategia De Protección Miocárdica Para Pacientes De Alto Riesgo Que Requieren Urgente CABG

Journal of Cardiac Surgery. Sep-Oct, 2006  |  Pubmed ID: 16948769

Para pacientes que requieren revascularización coronaria de emergencia, la mortalidad sigue siendo elevada. Una de las principales razones es pobre recuperación funcional y metabólica del miocardio después de parada isquémica. Describimos un híbrido de las técnicas de la bomba y de bomba para evitar detención isquémica durante revascularización coronaria para este grupo de alto riesgo.

Papel De LgtC En La Resistencia De No Tipificable Haemophilus Influenzae Cepa R2866 En Suero Humano

Infection and Immunity. Nov, 2006  |  Pubmed ID: 16966407

Estamos investigando un no tipificable cepa de Haemophilus influenzae (NTHI), R2866, aislado de un niño con meningitis. R2866 es excepcionalmente resistente a la matanza por el suero humano normal. El suero 50% concentración inhibitoria (IC50) para esta variedad es de 18%, de encapsulado H. influenzae. R3392 es un derivado de R2866 que se encontró que han aumentado la sensibilidad al suero humano (IC50, 1,5%). Análisis de las regiones de repetición tetramérica dentro de genes biosintéticos de lipooligosaccharide (LOS) en ambas cepas indican que el glicosiltransferasa genes lgtC marco ("off") en la mayoría de las colonias de R3392 pero en marco con su codón de inicio ("on") en la mayoría de las colonias de los padres. Se buscaron pruebas antigénicas y bioquímicos para la modificación de la estructura de LOS. En un célula entera enzyme-linked immunosorbent assay, cepa que r3392 muestra reduce atascamiento de la Galalpha1, anticuerpo monoclonal de específico de Gal 4 4 4. Análisis de espectrometría de masas de LOS de cepa R2866 indicó que la glucoproteína oligosacárido primaria contenía Heptosa cuatro y cuatro residuos de hexosa, mientras que la de R3392 contuvo cuatro Heptosa y tres residuos de hexosa. Concluimos que el R2866 lgtC gen codifica una galactosyltransferase implicados en la síntesis de los 4 4 epitope, como en otras cepas y esa expresión de lgtC se asocia con la resistencia de alto nivel del suero que se ha observado para esta variedad. Se trata de la primera descripción de la base genética de la resistencia de alto nivel del suero en NTHI, así como la primera descripción de la composición de LOS en una variedad NTHI para que se ha determinado la secuencia completa del genoma.

Reducción De La Pobreza No Debe Agravar El Cambio Climático

Nature. Mar, 2007  |  Pubmed ID: 17377562

Reglamento De Transporte De ácido Siálico Y Catabolismo En Haemophilus Influenzae

Molecular Microbiology. Oct, 2007  |  Pubmed ID: 17880422

Virulencia de Hemophilus-influenzae no tipificable (NTHi) depende de la decoración de lipooligosaccharide con el ácido siálico. Este azúcar debe derivarse del anfitrión, como NTHi no puede sintetizar ácidos siálicos. NTHi también puede utilizar el ácido siálico como fuente de carbono. Los genes que codifican el transportador de ácido siálico y los genes que codifican las actividades catabólicas se localizan dos operones divergently transcritos, el operón siaPT y el operón de nan, respectivamente. En este estudio, se identificaron SiaR como represor de transporte de ácido siálico y catabolismo en NTHi. Inactivación de siaR dio lugar a la expresión no regulada de los genes en ambos operones. Catabolismo no reglamentada de ácido siálico en el mutante siaR resultó en la reducción de superficie asimismo y un aumento en la sensibilidad del suero. Además de represión mediada por SiaR, CRP, la proteína del receptor de campo, fue demostrado para activar la expresión del operón siaPT pero no el operón de nan. Describimos un modelo en el cual SiaR y CRP trabajan para modular los niveles intracelulares de ácido siálico. Nuestros resultados demuestran la importancia de la regulación mediada por SiaR para equilibrar el requisito de superficie asimismo y la acumulación tóxica de intracelular de ácido siálico.

Caracterización Del Sitio De Unión a ácido N-acetyl-5-neuramínico Del Receptor Soluto Extracitoplásmicos (SiaP) De No Tipificable Haemophilus Influenzae Cepa 2019

The Journal of Biological Chemistry. Jan, 2008  |  Pubmed ID: 17947229

Nontypeable Haemophilus influenzae es un patógeno humano oportunista causando otitis media en niños y la bronquitis crónica y neumonía en pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica. La membrana externa de no tipificable H. influenzae está dominada por la lipooligosaccharides (LOS), muchos de los cuales incorporan ácido siálico como un azucarillo nonreducing terminal. Ácido siálico ha demostrado ser un factor importante en la supervivencia de las bacterias dentro del entorno de host. H. influenzae es incapaz de sintetizar ácido siálico y depende de la compactación de ácido siálico libre desde el entorno de host. Para lograr esto, H. influenzae utiliza un transportador periplasmic tripartito de ATP-independiente. En este estudio, caracterizamos el sitio de unión del receptor extracitoplásmicos soluto (SiaP) de la cepa de influenzae no tipificable H. 2019. Una estructura cristalina de ácido N-acetyl-5-neuramínico (Neu5Ac)-SiaP consolidado se determinó a 1.4A resolución. Caracterización termodinámica de Neu5Ac enlace muestra que esta interacción enthalpically se conduce con una sustancial contribución desfavorable de entropía. Se espera porque el atascamiento de SiaP a Neu5Ac está mediado por numerosos enlaces de hidrógeno y tiene varias moléculas de agua enterrada. Mutaciones puntuales dirigidas a aminoácidos específicos fueron introducidas en el sitio de Unión putativos. Complementación con las construcciones de siaP mutados resultó en total, parcial o no complementación, dependiendo de la función de residuos específicos. Análisis de espectrometría de masas de LOS O-desacilada de la mutación de punto R127K confirman la observación reducida incorporación de Neu5Ac en LOS. La disminución de la capacidad de H. influenzae a importación de ácido siálico tuvo efectos negativos sobre la resistencia a la matanza de complemento-mediada y viabilidad de biofilms in vitro, lo que confirma la importancia del transporte de ácido siálico a la bacteria.

Ácido-catalizado Oxígeno-18 Etiquetado De Péptidos

Analytical Chemistry. Apr, 2009  |  Pubmed ID: 19243188

En estrategias O etiquetas (18) enzimáticas para proteómica cuantitativa, el intercambio de oxígenos carboxilo en pH bajo es una reacción del lado común, no deseados. Preguntamos si cambio trasero ácido-catalizado pudiera interferir con cuantificación y si la reacción sí mismo podría ser utilizada como método para introducir la etiqueta de (18) O en péptidos. Varios péptidos sintéticos fueron disueltos en ácido diluido que contiene 50% h (18) O (v/v) y se incubaron a temperatura ambiente. Alícuotas fueron durante un período de 3 semanas y analizadas por espectrometría de masas en tándem (MS/MS). (18)Incorporación O cocientes se determinaron mediante análisis de regresión lineal que permitió varias incorporaciones de isótopos estables. En pH bajo, péptidos intercambian sus átomos de oxígeno del carboxilo con el solvente acuoso. Los patrones de isótopo desplazado gradualmente a masas más altas hasta llegar a la esperada distribución binomial en el equilibrio después de aproximadamente 11 días. Velocidades de reacción fueron específicos de residuos y secuencia. Debido a su naturaleza lento, se espera que el cambio trasero ácido-catalizado interferir mínimamente enzimáticos (18) etiquetado O estudios siempre que las condiciones de almacenamiento y análisis de minimizan los tiempos de exposición de pH bajo. Por su parte, ácido-catalizado (18) O etiquetado es una estrategia general de marcado que es una alternativa a la química, metabólica, y enzimático isótopo-etiquetado esquemas actualmente utilizado en proteómica cuantitativa.

Multi-sitio De Evaluación De La Precisión Y La Reproducibilidad De Los Múltiples De Reacción a Base De Monitoreo-Las Mediciones De Proteínas En El Plasma

Nature Biotechnology. Jul, 2009  |  Pubmed ID: 19561596

La verificación de biomarcadores candidatos se basa en los ensayos cuantitativos específicos optimizados para la detección selectiva de las proteínas diana, y está cada vez más como un paso crítico en el descubrimiento de nuevas que el descubrimiento de biomarcadores puentes imparcial para la validación preclínica. A pesar de los distintos laboratorios han demostrado que la monitorización de reacción múltiple (MRM) acoplada a espectrometría de masas por dilución isotópica puede cuantificar biomarcadores candidatos de proteínas en el plasma, la reproducibilidad y la transferibilidad de estas pruebas entre los laboratorios no han sido demostrados. Se describe un estudio de varios laboratorios para evaluar la reproducibilidad, la recuperación, rango dinámico lineal y los límites de detección y cuantificación de MRM multiplexadas, a base de ensayos, llevados a cabo por el NCI CPTAC. El uso de materiales comunes y protocolos estandarizados, se demuestra que estos ensayos pueden ser altamente reproducible dentro y fuera de los laboratorios y plataformas de instrumentos, y son sensibles a bajas concentraciones de proteína taza / ml en plasma no fraccionada. Se aportan datos y puntos de referencia contra el cual los distintos laboratorios pueden comparar su desempeño y evaluar nuevas tecnologías para la verificación de biomarcadores en el plasma.

Superación De Los Retos: El Uso De La Mínima Circulación Extracorpórea En Jehová Testigos Sometidos a Cirugía Cardiaca

The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 19931094

Un Flujo De Trabajo De Afinidad De Lectina Orientación Glycosite Específicos, Relacionados Con El Cáncer Estructuras De Carbohidratos En La Tripsina Digerido Con Plasma Humano

Analytical Biochemistry. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 20705048

Los glicanos son las células específicas del tipo de proteína, modificaciones postraduccionales que se modulan en los procesos de desarrollo y de la enfermedad. Como tal, glicoproteínas son candidatos atractivos biomarcadores. A continuación, describimos una espectrometría de masas basado en flujo de trabajo que incorpora la cromatografía de afinidad de lectina para enriquecer las proteínas que transportan determinadas estructuras de glicano. A medida que aumenta en sialilación y fucosilación destacan entre asociados al cáncer modificaciones, nos centramos en Sambucus nigra aglutinina (SNA) y la lectina Aleuria aurantia (AAL), lectinas que se unen con ácido siálico y las estructuras de fucosa que contienen, respectivamente. Glicopéptidos fucosilados y sialilada de lactoferrina humana sirvieron como controles positivos, y alto contenido en manosa estructuras de invertasa de levadura sirvieron como controles negativos. Las normas se disparó en múltiples sistemas de eliminación de afinidad (MARS) de 14 empobrecido, digerido con tripsina plasma humano de donantes sanos. Las muestras se cargaron en columnas de lectina, separados por HPLC en flujo continuo y fracciones enlazados, y tratados con el péptido N-glicosidasa F para eliminar N-glicanos ligados. Las fracciones peptídicas desglicosiladas fueron interrogados por HPLC-MS/MS ESI. Se identificaron un total de 122 glicoproteínas del plasma humano que contienen 247 glycosites únicas. Es importante destacar que varias de las glicoproteínas observados (por ejemplo, cadherina 5 y neutrófilos lipocalina gelatinasa asociada) normalmente circulan en el plasma a baja nanogramos por mililitro niveles. En conjunto, estos resultados proporcionan la espectrometría de masas basada en la evidencia de la utilidad de la incorporación de la separación lectina-plataformas en las tuberías descubrimiento de biomarcadores de cáncer.

Revisión De Estándares Fluorescentes Para La Calibración De Fluorómetros in Situ: Recomendaciones Aplicación En La Costa Y El Océano, Observando Programas

Optics Express. Dec, 2011  |  Pubmed ID: 22274260

Fluorómetros son ampliamente utilizados en la observación de ecosistemas para monitorear las señales de fluorescencia de compuestos orgánicos, así como para inferir parámetros geofísicos, tales como la clorofila o concentración del CDOM, pero las medidas son susceptibles de variación causada por incrustaciones biológicas, diseño de instrumento, deriva del sensor, entorno operativo y rigor de calibración. Para recolectar datos de alta calidad, estos sensores necesitan frecuentes verificaciones y calibraciones regulares. En este estudio, una amplia variedad de materiales fluorescentes tanto líquidas y sólidas fueron incluido en el ensayo para evaluar su idoneidad como patrones de referencia para la evaluación del desempeño de fluorómetros in situ. Criterios utilizados para evaluar las normas incluyen las respuestas de excitación/emisión espectral de los materiales en relación con sensores de fluorescencia y a propiedades específicas del océano, la linealidad de la respuesta óptica de Fluorímetro con el aumento de la concentración, estabilidad y consistencia, disponibilidad y facilidad de uso, así como costos. Los resultados se resumen como una serie de estándares de referencia recomendada para sensores desplegados en plataformas fijas y móviles, para adaptarse a una variedad de in situ costera a configuraciones de sensor del océano. Determinaciones repetidas de factor de escala de clorofila utilizando el estándar de líquido recomendado, fluoresceína, logra una precisión de 2,5%. Repetir las mediciones con el recomendado sólida estándar, Plexiglas Satinice ® ciruela 4 H 01 DC (polimetilmetacrilato), durante un período de 18 días varió entre el valor medio de 1,0% para los sensores de la clorofila y 3.3% para sensores CDOM.

Un Flujo De Descubrimiento De Lectinas Cromatografía/masa Espectrometría Identifica Posibles Biomarcadores Del Cáncer De Mama Agresivo

Journal of Proteome Research. Feb, 2012  |  Pubmed ID: 22309216

Utilizamos un lectina cromatografía/MS-enfoque basado en pantalla acondicionado medio de un panel de luminal (menos agresivo) y triple negativo (más agresivas) líneas de células de cáncer de mama (n = 5/subtipo). Las muestras fueron fraccionadas utilizando las lectinas Aleuria aurantia (AAL) y Sambucus nigra aglutinina (SNA), que reconocen la fucosa y ácido siálico, respectivamente. Las fracciones consolidadas fueron enzimático N-deglycosylated y analizan por LC-MS/MS. En total, se identificaron 533 glicoproteínas, ~ 90% de los cuales eran los componentes de la célula matriz extracelular o superficial. Observamos 1011 único glycosites, 100 de los cuales fueron detectados únicamente en líneas negativas triple ≥ 3. Análisis estadístico indicaron que varios de estos glycosites fueron triple negativo específico y así potenciales biomarcadores para este subtipo de tumor. Un análisis de datos RNAseq reveló que aproximadamente la mitad de los mRNAs de codificación de los andamios de la proteína que lleva a glycosites de biomarcadores potenciales fueron alza en triple negativo frente a líneas celulares luminal, y que un número de genes que codifican Fucosil - o sialiltransferasas fueron expresado diferencialmente entre los dos subtipos, sugiriendo que alteraciones en la glicosilación pueden conducir también identificación de candidatos. En particular, las glicoproteínas de la que se derivan estos candidatos putativos biomarcador participan en procesos relacionados con el cáncer. Así, pueden representar nuevas dianas terapéuticas para este subtipo de tumor agresivo.