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Articles by Simon Menanteau-Ledouble in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Utilisez des fluorescents Immuno-Chimie pour la détection de Edwardsiella ictaluri Dans la barbue de rivière ( I. punctatus) Des échantillons
Department of Basic Sciences, Mississippi State University
Nous décrivons ici une procédure permettant à l'étiquetage des
Other articles by Simon Menanteau-Ledouble on PubMed
Développement De Bioluminescent Edwardsiella Ictaluri Pour La Surveillance Des Maladies Non Invasive
Edwardsiella ictaluri est une bactérie intracellulaire facultative qui provoque une septicémie entérique de poisson-chat (ESC). Dans cette étude, nous avons cherché à développer des bioluminescente E. ictaluri qui peut être surveillé par l'imagerie non invasive bioluminescence (BLI). Pour ce faire, l'opéron luxCDABE de Photorhabdus luminescens a été cloné en aval du promoteur lacZ dans le pBBR1MCS4 large spectre d'hôte plasmide. Edwardsiella ictaluri souche 93-146 transformé avec le nouveau plasmide, pAKlux1, était très bioluminescente. pAKlux1 a été maintenu de façon stable dans E. ictaluri sans aucun effet apparent sur la croissance ou la stabilité du plasmide natif. Pour évaluer l'utilité de la souche bioluminescente dans l'étude des maladies, le poisson-chat ont été infectées par le 93-146 pAKlux1 par injection intrapéritonéale et par immersion dans un bain, et dans la diffusion des bactéries in vivo a été observé en utilisant BLI. Cette étude a démontré que bioluminescente E. ictaluri peut être utilisé pour surveiller en temps réel de l'ESC de poissons vivants, ce qui devrait permettre l'observation des sites de fixation des agents pathogènes et des préférences des tissus.
Importance D'abrasion Cutanée Comme Un Site Principal De L'adhérence Pour Edwardsiella Ictaluri Et Impact Sur Invasion Et L'infection Systématique Dans La Barbue De Rivière Ictalurus Punctatus
La voie d'entrée de Edwardsiella ictaluri dans son hôte le poisson-chat a été un objet d'une enquête depuis le pathogène a été découvert. Il existe des preuves à l'appui d'entrée dans le tractus intestinal, les narines, et les branchies. Ici, nous avons évalué le rôle d'abrasion cutanée par une série de défis expérimentaux utilisant bioluminescente E. ictaluri portant le plasmide pAKLux1. Nos résultats montrent que E. ictaluri est capable de coloniser des sites à l'abrasion sur la peau et le poisson-chat poisson-chat que des abrasions ont développé une infection systématique plus rapide. Nous avons également constaté que les abrasions sont associés à une augmentation significative de mortalité suite à une exposition d'immersion expérimentale. Enfin, un protocole a été développé au cours de cette étude qui a permis à l'examen immunohistochimique des couches de tissu sous les sites de l'abrasion, ce qui confirme la présence de E. dans les tissus sous-cutanés ictaluri à partir de sites à l'abrasion. Cette étude constitue le premier rapport sur le rôle de la peau barbue de rivière comme un portail d'entrée pour E. ictaluri et illustre en outre comment polyvalent cet agent pathogène peut être dans ses mécanismes d'entrée.
