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 JoVE General

Etiquetado selectiva de las proteínas de la superficie celular con CyDye DIGE Colorantes Fluor mínimo


JoVE 945 11/26/2008

Research and Development, GE Healthcare Bio-Sciences AB

Un método sencillo y específico se ha demostrado para el etiquetado fluorescente y mejorar la detección de las proteínas de la superficie celular sin una etapa de fraccionamiento. Abundancia diferencial de proteínas de superficie celular se analizó mediante electroforesis bidimensional (2-D) y Ettan ™ tecnología DIGE.

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A Proteómica Aproximación Al Estudio De La Absorción, Distribución, Metabolismo, Excreción Y Toxicidad

Un enfoque proteómica se utiliza para identificar las proteínas hepáticas que muestran niveles alterados en ratones después del tratamiento con un fármaco candidato. Las muestras de los hígados de los ratones tratados con el fármaco candidato o no tratada se prepararon, cuantificado, marcado con CyDye Fluors DIGE, y se sometió a electroforesis en dos dimensiones. Después de exploración y las imágenes de geles a partir de tres diferentes intervalos de isoelectroenfoque (3-10, 7-11, 6.2 a 7.5), el manejo automatizado lugar se realizó en un gran número de manchas de gel incluyendo aquellos encontró que difieren en más del 20% entre el grupo tratado y la condición no tratada. Posteriormente, las proteínas reguladas diferencialmente fueron sometidos a un enfoque de tres pasos de la espectrometría de masas utilizando (a) láser asistida por matriz de desorción / ionización tiempo de vuelo espectrometría de masas péptido masiva de huellas dactilares, (b) después de la fuente de la caries utilizando la fragmentación químicamente asistida, y (c) cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem. Utilizando este enfoque hasta ahora hemos resuelto 121 proteínas diferencialmente reguladas después del tratamiento de ratones con el fármaco candidato y se identificaron 110 de estos espectrometría de masas utilizando. Estos datos pueden potencialmente dar una idea molecular mejora en el metabolismo de los fármacos así como las proteínas implicadas en la toxicidad potencial después del tratamiento. Las proteínas diferencialmente regulados podrían ser utilizados como dianas para estudios metabólicos o como marcadores para la toxicidad.

Un Análisis De La Proteómica Cuantitativa De Proteínas Líquido Broncoalveolar Soluble De Pacientes Con Sarcoidosis Y Enfermedad Crónica Del Berilio

Sarcoidosis y enfermedad crónica del berilio (CBD) son desordenes granulomatosos que pueden conducir al desarrollo de la inflamación crónica y fibrosis. Estas enfermedades tienen varias similitudes de sus aspectos clínicos. El objetivo de este estudio fue comparar el perfil de proteína en el sitio de inflamación activa, es decir los pulmones de pacientes con sarcoidosis y CBD.

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