Phosphatidylinositol 3-Kinase Und Akt Effektoren Vermitteln Insulin-like Growth Factor-I Neuroprotektion in Spinalganglien Neuronen

FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15319368

Fluorescence Resonance Energy Transfer Berichtet Eigenschaften Syntaxin1a Wechselwirkung Mit Munc18-1 in Vivo

The Journal of Biological Chemistry. Dec, 2004  |  Pubmed ID: 15489225

Rezeptor-vermittelte Regulation Der Tomosyn-Syntaxin-1A-Interaktionen in Bovine Adrenal Chromaffin Zellen

The Journal of Biological Chemistry. Aug, 2007  |  Pubmed ID: 17545156

Tomosyn, ein lösliches R-SNARE-Protein identifiziert als verbindliche Partner Q-SNARE Syntaxin 1a, gilt als entscheidend für die Festsetzung des Fusion-zuständigen SNARE-komplexe für Neurosecretion. Bis dato gab es keine direkte Auswertung der Dynamik in der Tomosyn-Transite durch Tomosyn-SNARE-komplexe oder das Ausmaß, zu welchem Tomosyn-SNARE komplexe sekretorischen Nachfrage geregelt sind. Hier uns angewandte biochemische und optische Ansätze charakterisieren die dynamischen Eigenschaften der Tomosyn-Syntaxin-1A-komplexen in Leben Adrenale chromaffin Zellen. Wir zeigen, dass Secretagogue Stimulierung der rapid Translokation von Tomosyn aus dem Zytosol Plasmamembran Regionen führt und dass diese Translokation mit einem Anstieg der Tomosyn-Syntaxin-1A-Aktivität, einschließlich erhöhte Radfahren von Tomosyn in Tomosyn-SNARE-komplexe verbunden ist. Die Secretagogue-induzierte Interaktion wurde durch pharmakologische Hemmung der Rho-assoziierte aufgerollte Spule bilden Kinase, ein Ergebnis mit Ergebnisse demonstrieren Secretagogue-induzierte Aktivierung des RhoA stark reduziert. Stimulation der chromaffin Zellen mit Lysophosphatidic Acid, nonsecretory Impuls, der stark RhoA aktiviert, führte zu Auswirkungen auf die Tomosyn ähnlich der Anwendung der Secretagogue. In PC-12 Zellen ergab überexprimierenden Tomosyn, Secretagogue Stimulierung in Anwesenheit von Lysophosphatidic Säure reduzierten evozierte sekretorischen Antworten, ein Effekt, der bei der Hemmung der Rho-assoziierte aufgerollte Spule bilden Kinase eliminiert wurde. Außerdem benötigt dieser Effekt eine intakte Interaktion zwischen Tomosyn und Syntaxin 1A. Modulation der Tomosyn-Syntaxin-1A-Interaktion als Reaktion auf Secretagogue Aktivierung ist daher ein wichtiger Mechanismus ermöglicht dynamische Verordnung der sekretorische Antwort.

Mausmodelle Von Diabetische Neuropathie

Neurobiology of Disease. Dec, 2007  |  Pubmed ID: 17804249

Diabetische Neuropathie (DN) ist eine schwächende Komplikation von Typ 1 und Typ 2 Diabetes. Nagetier-Modelle von DN Replizieren nicht vollständig die Pathologie in menschlichen Patienten beobachtet. Wir untersuchten DN Streptozocin (STZ)-induzierte [B6] und spontaner Typ 1-Diabetes [B6Ins2(Akita)] und spontaner Typ 2 Diabetes [B6-Db/Db, BKS-Db/Db]. Die STZ-behandelten Mäusen B6 und B6Ins2(Akita) waren trotz persistenten Hyperglykämie resistent gegen die Entwicklung von DN. Dagegen DN entwickelt in beiden Typ 2 Diabetes-Modelle: die B6-Db/Db und BKS-Db/Db-Mäuse. Anhaltende Hyperglykämie und Entwicklung der DN der B6-Db/Db-Mäusen benötigt eine erhöhte fettarme Ernährung, während die BKS-Db/Db-Mäuse schwere DN entwickelt und blieb auf Standardmaus Chow hyperglykämischen. Unsere Daten unterstützen die Hypothese, dass der genetische Hintergrund und Ernährung die Entwicklung von DN beeinflussen und berücksichtigt werden, sollte bei der Entwicklung von neuer Models von DN.

Kriterien Zur Erstellung Und Bewertung Mausmodelle Von Diabetische Neuropathie

Current Drug Targets. Jan, 2008  |  Pubmed ID: 18220709

Diabetische Neuropathie (DN) ist eine schwerwiegende und schwächende Komplikation sowohl Typ 1 und Typ 2 Diabetes. Trotz intensiver Forschungsbemühungen in mehrere Aspekte dieser Komplikation, darunter sowohl Gefäß- und neuronale metabolischen Derangements bleibt die einzige Behandlung Wartung von Euglycemia. Grundlagenforschung in die Mechanismen verantwortlich für DN beruht auf verwenden am besten geeigneten Tiermodell. Das Aufkommen der Genmanipulation hat Mausmodelle menschlicher Erkrankungen in den Vordergrund verschoben. Die Fähigkeit, einfügen oder Löschen von Genen, die in menschlichen Patienten betroffen bietet einzigartige Einblicke in die Krankheitsprozesse; Allerdings Mäuse sind noch nicht Menschen und Schwierigkeiten bei der Interpretation von Daten, die von diesen Tieren bleiben. Eine Reihe von Studien untersucht und beschrieben von DN bei Mäusen haben, aber es ist schwierig, diese Studien miteinander oder mit menschlichen DN aufgrund von experimentellen unterschieden einschließlich Hintergrund Sorte, Art von Diabetes, die Methode der Induktion und Dauer des Diabetes, tierischen Alter und Geschlecht zu vergleichen. Diesen Bericht beschreibt aktuell verwendeten DN Tiermodelle. Wir folgten eine standardisierte Diabetes-Induktion-Protokoll und konzipiert und implementiert eine Reihe von pathologies Parametern, die Entwicklung zu klassifizieren und Schwere der DN. Wir hoffen durch die Anwendung von Standardprotokollen, zur Erleichterung der Vergleich und die Charakterisierung von DN über verschiedene Hintergrund-Stämme in der Hoffnung, entdecken die meisten menschlichen wie Modell, in dem mögliche Therapien zu testen.

Wasserstoffperoxid-induzierte Akt Phosphorylierung Reguliert Bax-Aktivierung

Biochimie. May, 2009  |  Pubmed ID: 19278624

Reaktive Sauerstoffspezies wie Wasserstoffperoxid (H(2)O(2)) engagieren sich viele zelluläre Prozesse, die positiv und negativ regulieren Zelle Schicksal. H(2)O(2), als ein intrazellulärer Messenger Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3K) und das nachgeschaltete Ziel Akt aktiviert und fördert Zelle überleben. Ziel der aktuellen Studie war es, den Mechanismus zu verstehen, durch welche PI3K/Akt signaling Überleben in SH-SY5Y Neuroblastoma Zellen fördert. Wir zeigen, dass PI3K/Akt Phosphorylierung des Pro-apoptotischen Bcl-2 Familienmitglieds Bax vermittelt. Diese Phosphorylierung unterdrückt Apoptosis und Zelle überleben fördert. Erhöhte Überleben in Anwesenheit von H(2)O(2) wurde durch LY294002, ein Inhibitor der PI3K Aktivierung blockiert. LY294002 verhindert Bax Phosphorylierung und Bax Translokation und der Mitochondrien, Cytochrom-C-Freisetzung, Aktivierung der Caspase-3 und Zelltod führte. Diese Ergebnisse zeigen gemeinsam einen Mechanismus, durch welchen H (2) O (2)-induzierte Aktivierung des PI3K/Akt beeinflusst post-translationale Modifikation von Bax und inaktiviert eine Schlüsselkomponente der Zelle Tod Maschine.

Mitochondriale DNA (MtDNA) Biogenese: Visualisierung Und Duell Einbeziehung Von BrdU Und EdU in Neu Synthetisiert MtDNA In Vitro

The Journal of Histochemistry and Cytochemistry : Official Journal of the Histochemistry Society. Nov, 2009  |  Pubmed ID: 19875847

Mitochondrien sind wichtige Regulatoren der zellularen Energie und stehen im Mittelpunkt einer großen Anzahl von Studien, die die Regulierung der mitochondrialen Dynamik und Biogenese in gesunden und Kranken Bedingungen zu untersuchen. Ein Ansatz zur Überwachung der mitochondrialen Biogenese ist die Rate der mitochondriale DNA (MtDNA) zu messen. Wir entwickelten eine sensible Technik um eben synthetisierten MtDNA in einzelne Zellen zu visualisieren, um MtDNA-Replikation innerhalb subzellulare Depots von Neuronen zu studieren. Die Technik kombiniert die Einbeziehung von BrdU und/oder EdU in MtDNA gemeinsam mit einem Tyramide Signal-Verstärkung-Protokoll. Mit dieser Technik, wir visualisiert und MtDNA Biogenese in einzelnen Zellen gemessen. Das Kennzeichenrecht Verfahren für EdU erlaubt umfassendere Ergebnisse dadurch, dass des Vergleichs der Gründung mit anderen intrazellulären Markern weil es keine harten Säure erfordert oder Enzym verdaut der BrdU-Epitope Wiederherstellung erforderlich. Darüber hinaus gestattet die Nutzung von BrdU und EdU sequenzielle Puls-Chase-Experimente, die intrazelluläre Lokalisation der MtDNA-Replikation zu folgen. Die Fähigkeit, mitochondriale Biogenese quantifizieren stellt ein wesentliches Instrument für ermittelnden-Änderungen in der mitochondrialen Dynamik an der Pathogenese beteiligt mehrere zellulären Störungen einschließlich Neuropathien und Neurodegenerative Krankheiten.

CCK-unabhängige MTORC1 Aktivierung Während Diätetische Protein-induzierte Exokrine Bauchspeicheldrüse Wachstum

American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. Nov, 2010  |  Pubmed ID: 20798356

Ernährungseiweiß kann Wachstum Pankreas in Ermangelung der CCK-Version, aber sind nur wenige Daten über die Regulierung der CCK-unabhängigen Wachstum. Um Mechanismen zu identifizieren, wobei Protein Pankreas Wachstum in Ermangelung der CCK-Version stimuliert, wurden C57BL/6-Kontrolle und CCK-Null männliche Mäuse Normal-Protein (14 % Kasein) oder proteinreiche (75 % Kasein) Chow für 7 Tage gefüttert. Das Gewicht der Bauchspeicheldrüse stieg um 32 % bei C57BL/6 Mäusen und 26 % bei CCK-Null-Mäusen gefüttert proteinreiche Chow. Änderungen im Pankreas Gewicht im Steuerelement Mäuse waren aufgrund der Zelle Hypertrophie und Hyperplasie, da gab es eine Steigerung in Protein-DNA-Verhältnis, Gesamtgehalt von DNA und DNA-Synthese. CCK-Null Mäuse Pankreas Wachstum wurde fast vollständig durch Hypertrophie mit Protein-DNA-Verhältnis und Zelle ohne signifikanten Anstieg der DNA-Gehalt oder DNA-Synthese Größe steigt. ERK, Calcineurin und Säugetier-Ziel von angiomiolipomas Komplex 1 (mTORC1) werden aktiviert, in Modellen der CCK-induzierte Wachstum, aber gab es keine Unterschiede in der ERK oder Calcineurin-Aktivierung zwischen fastete und CCK-Null-Mäusen gefüttert. Im Gegensatz dazu mTORC1 Aktivierung erhöhte sich nach der Fütterung und die Dauer der Aktivierung wurde bei Mäusen gefüttert proteinreiche Chow verglichen mit Normal-Protein Chow verlängert. Änderungen im Pankreas Gewicht und RNA Inhalt waren völlig gehemmt, und Änderungen im Proteingehalt wurden teilweise nachgelassen, wenn die mTORC1 Inhibitor angiomiolipomas während Chow proteinreiche Fütterung verabreicht wurde. Verlängerte mTORC1 Aktivierung ist somit für diätetische Protein-induzierte Pankreas Wachstum in Ermangelung der CCK.

Vulnerability of the Retinal Microvasculature to Oxidative Stress: Ion Channel-dependent Mechanisms

American Journal of Physiology. Cell Physiology. May, 2012  |  Pubmed ID: 22345512

Although oxidative stress is a hallmark of important vascular disorders such as diabetic retinopathy, it remains unclear why the retinal microvasculature is particularly vulnerable to this pathophysiological condition. We postulated that redox-sensitive ion channels may play a role. Using H(2)O(2) to cause oxidative stress in microvascular complexes freshly isolated from the adult rat retina, we assessed ionic currents, cell viability, intracellular oxidants, and cell calcium by using perforated-patch recordings, trypan blue dye exclusion, and fura-2 fluorescence, respectively. Supporting a role for the oxidant-sensitive ATP-sensitive K (K(ATP)) channels, we found that these channels are activated during exposure of retinal microvessels to H(2)O(2). Furthermore, their inhibition by glibenclamide significantly lessened H(2)O(2)-induced microvascular cell death. Additional experiments established that by increasing the influx of calcium into microvascular cells, the K(ATP) channel-mediated hyperpolarization boosted the vulnerability of these cells to oxidative stress. In addition to the K(ATP) channel-dependent mechanism for increasing the lethality of oxidative stress, we also found that the vulnerability of cells in the capillaries, but not in the arterioles, was further boosted by a K(ATP) channel-independent mechanism, which our experiments indicated involves the oxidant-induced activation of calcium-permeable nonspecific cation channels. Taken together, our findings support a working model in which both K(ATP) channel-independent and K(ATP) channel-dependent mechanisms render the capillaries of the retina particularly vulnerable to oxidative stress. Identification of these previously unappreciated mechanisms for boosting the lethality of oxidants may provide new targets for pharmacologically limiting damage to the retinal microvasculature during periods of oxidative stress.