Identificación Y Localización De T-tipo De Tensión Que Funcionan Con Subunidades Del Canal De Calcio En Las Células Germinales Masculinas Humanos. Expresión De Múltiples Isoformas

The Journal of Biological Chemistry. Mar, 2002  |  Pubmed ID: 11751928

De baja tensión activa, el voltaje de accionamiento de Ca (2 +) canales se expresan en células de roedores germinales masculinas y se cree que es esencial en la inducción de la reacción de acrosoma en los espermatozoides de ratón. Sin embargo, en los seres humanos, se sabe muy poco acerca de la expresión de la tensión que funciona con Ca (2 +) canales en las células germinales masculinas o en su función. Hemos utilizado la polimerasa de transcripción inversa-reacción en cadena, hibridación in situ, y la grabación de patch clamp para investigar la expresión de la baja tensión activa de voltaje que funciona con Ca (2 +) canales en las células germinales masculinas. Nos informan de que de larga duración en las transcripciones de la alfa (1G) y alfa-(1H) de bajo voltaje activados subunidades de los canales se expresan en los testículos humanos. Isoformas múltiples de alfa (1g) están presentes en los testículos y al menos dos isoformas de alfa (1H), incluyendo una variante de empalme no se ha descrito previamente en el ser humano. Las transcripciones de todas las isoformas de la alfa (1G) y alfa-(1H) fueron detectados por reacción en cadena de la polimerasa con transcripción de mRNA aislado de las células de espermatogénesis. Hibridación in situ para alfa (1G) y alfa-(1H) transcripciones localizadas tanto en las células germinales y en otros tipos de células en los testículos. Dentro de los túbulos seminíferos, alfa (1H) se detectó principalmente en las células germinales. Usando el parche de célula entera técnica de la pinza, que hemos detectado tipo T tensión de accionamiento de Ca (2 +) corrientes de los canales en células humanas aisladas germinales masculinas, aunque la amplitud de la corriente y la frecuencia de ocurrencia eran bajos en comparación con la aparición de T-corrientes en murino las células germinales masculinas. Se concluye que la baja tensión activado tensión de accionamiento de Ca (2 +) canales se expresan en células de la línea germinal masculina humana.

Voltaje Que Funciona Con Los Canales De Calcio En Las Células Germinales Masculinas

Reproduction (Cambridge, England). Feb, 2002  |  Pubmed ID: 11866687

La reacción del acrosoma es un acontecimiento clave en la fertilización. Los modelos actuales para la inducción de la reacción de acrosoma incorporar una afluencia necesaria de Ca (2 +), que está mediada por inducida por agonistas de puerta de los canales de iones en la membrana plasmática de espermatozoides. La dificultad de aplicar técnicas electrofisiológicas de los espermatozoides ha obstaculizado seriamente los estudios sobre la expresión de los canales iónicos funcionales en estas células. Sin embargo, durante los últimos años, una combinación de técnicas moleculares y fisiológicos (aplicado a las células inmaduras de espermatogénesis) ha aclarado tanto la expresión de Ca (2 +) canales en las células germinales masculinas y su papel en la inducción de la reacción del acrosoma. Ahora parece que una gama de voltaje que funciona con Ca (2 +) canales, similares a las que se producen en las células somáticas, se expresa en los espermatozoides. Las células germinales masculinas de roedores expresan un bajo voltaje activado (tipo T), canal que está regulada por el potencial de membrana y proporciona la principal Ca (2 +) en el mecanismo de flujo zona pelúcida estimulada por los espermatozoides. En los espermatozoides humanos, canales similares se expresó al parecer, pero su función en la inducción de la reacción del acrosoma aún no se ha establecido. Una serie de otros circuitos de alta tensión los canales activados también parecen estar presentes en los roedores y los espermatozoides humanos, pero sus funciones no se conocen todavía. En esta revisión, la estructura y las características de voltaje que funciona con Ca (2 +) se describen los canales y la evidencia de su expresión y función en las células germinales masculinas se reunió y discutió.

Zona Pelúcida Y La Progesterona Inducida Por Ca 2 + De Señalización Y La Reacción Acrosomal En Espermatozoides Humanos

Journal of Andrology. May-Jun, 2002  |  Pubmed ID: 12002428

Codificación De La Intensidad De Progesterona Por El Estímulo Intracelular [Ca2 +] ([Ca2 +] I) En Los Espermatozoides Humanos

The Biochemical Journal. Jun, 2003  |  Pubmed ID: 12614198

La progesterona induce una bifásica Ca (2 +) influjo y la consecuente reacción acrosomal en espermatozoides humanos. Hemos utilizado dos procedimientos para variar el estímulo (dosis y desensibilización del receptor antes) para investigar la codificación de la fuerza por estímulo intracelular [Ca (2 +)] ([Ca (2 +)] (i)). Reacción del acrosoma y la amplitud (pero no la cinética) del transitorio [Ca (2 +)] (i) respuesta (medición de la población) mostraron una sensibilidad dosis sigmoidea en el rango de 0,3 nM de 3 MicroM, saturando a aproximadamente 300 nM (ED (50) aproximadamente 30 nM). La amplitud de la respuesta sostenida saturado a 3 microM. Una sola célula de imágenes mostraron que las amplitudes de dos transitorios y sostenida [Ca (2 +)] (i) las respuestas fueron altamente dependiente de la dosis, pero que su frecuencia de aparición y la cinética eran en gran parte independiente de la dosis. Fluorimétricas mediciones confirmaron que la progesterona inducida [Ca (2 +)] (i) ingreso estaba sujeto a la desensibilización, con las aplicaciones de la segunda y subsiguientes de la progesterona 3 microM ser ineficaz. Sin embargo, las adiciones secuenciales de 3 nM, 30 y 3 de progesterona microM generado transitoria [Ca (2 +)] (i) las respuestas a cada concentración, la amplitud y duración de la respuesta a 3 progesterona microM siendo reducido en comparación con las células no pretratadas . Sola celda de imagen reveló que el pretratamiento no tuvo ningún efecto sobre la proporción de células sensibles, pero una sola célula de respuestas, de manera similar a las respuestas de la población, eran más pequeñas y marcadamente reducida en duración, consistente con un efecto de la desensibilización en un componente tardío de la Ca [ (2 +)] (i) transitoria. Se concluye que la fuerza del estímulo progesterona, cuando varió por dosis o por la desensibilización, es codificada por un análogo de [Ca (2 +)] (i) de la señal. Dependencia de la dosis de la reacción de acrosoma tanto, se determina no por el número de células que responden a la progesterona, pero por la variación en la probabilidad de exocitosis en una "constante" población sensible.

Enfoques Fisiológicos Y Proteómica Para El Estudio Eventos Prefertilización En El Humano

Reproductive Biomedicine Online. Oct-Nov, 2003  |  Pubmed ID: 14753177

Esta investigación tiene como objetivo principal entender, en términos moleculares y celulares, como un espermatozoide humano maduro se prepara para la fertilización, y en segundo lugar, para identificar qué factores están implicados en las interacciones iniciales de señalización entre el óvulo y el espermatozoide. Con el fin de alcanzar estos objetivos, una combinación de enfoques que se están utilizando, incluso una sola célula de imágenes, de sujeción de parches y la proteómica. Una sola célula de imágenes revela la complejidad y la heterogeneidad oculta en la señalización de las respuestas en los espermatozoides. Caracterización de la fisiología celular en el nivel de células individuales debe ser un objetivo futuro, incluyendo el estudio de la expresión de los canales de iones y la función de patch clamp. Experimentos proteómicos se dirigen a la identificación de defectos en la expresión de la proteína en subgrupos específicos de los hombres, por ejemplo, aquellos con globozoospermia. Una mejor comprensión de los acontecimientos prefertilización permitirá el desarrollo de la terapia asistida no reproductiva, drogas a base de tratamientos para la infertilidad masculina.

La Estimulación De Los Espermatozoides Humanos Con Gradientes De Progesterona Para Simular Aproximación Al Ovocito. La Inducción De La [Ca (2 +)] (i) Las Oscilaciones Cíclicas Y Transiciones Para Superar a Flagelar

The Journal of Biological Chemistry. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15322137

La progesterona está presente en concentraciones micromolares en la matriz de cúmulos, que rodea oocitos de mamíferos. La exposición de los espermatozoides humanos a un gradiente de concentración de la progesterona (0-3 microM) para simular el acercamiento al ovocito inducida por un aumento lento desarrollo en el [Ca (2 +)] (i) en las que, en muchas células, las oscilaciones lentas se superponen. [Ca (2 +)] (i) comenzó a las oscilaciones de frecuencia muy baja de progesterona (<10 nm), y su frecuencia no ha cambiado durante el subsiguiente aumento de la concentración. Las oscilaciones también se produjo, pero en una proporción mucho menor de células, en respuesta a la aplicación escalonada de la progesterona (3 microM). Cuando la progesterona se ha retirado, [Ca (2 +)] (i) las oscilaciones menudo persisten o se reanuda rápidamente. Superfusión con un bajo-Ca (2 +) a medio baño (sin adición de Ca (2 +)) no impidió que [Ca (2 +)] (i) las oscilaciones, pero podría ser abolida mediante la adición de EGTA o La (3 +) . Los inhibidores de la sarcoplásmico / retículo endoplasmático Ca (2 +)-ATPasas o señalización trifosfato de inositol tuvo ningún efecto sobre [Ca (2 +)] (i) oscilaciones, pero la manipulación farmacológica de los receptores de rianodina afectadas tanto su frecuencia y amplitud. La tinción de espermatozoides vivos con BODIPY FL-X rianodina mostró la localización de rianodina uniéndose principalmente a la parte caudal de la cabeza y la pieza media. [Ca (2 +)] (i) las oscilaciones no indujo la reacción del acrosoma, pero en las células que generan oscilaciones, el modo de latido flagelar alternan en sincronía con el ciclo de oscilación. Movimiento flagelar y la flexión lateral de la cabeza del espermatozoide durante la [Ca (2 +)] (i) los picos se aumentó considerablemente en comparación con en el [Ca (2 +)] (i) canales. Este modelo de alternancia de la actividad es probable que para facilitar la penetración zona. Estas observaciones muestran que la progesterona inicia inusual y complejo de tiendas mediada [Ca (2 +)] (i) la señalización en los espermatozoides humanos e identificar un efecto previamente desconocido de la progesterona en la regulación de los espermatozoides "comportamiento" durante la fertilización.

Oscilaciones Lentas De Calcio En Espermatozoides Humanos

The Biochemical Journal. Mar, 2004  |  Pubmed ID: 14606954

Hemos utilizado una sola célula de imágenes para investigar la señalización intracelular de Ca2 + en los espermatozoides humanos estimulados con progesterona (3 microM). En aprox. 9% de progesterona células causado la activación de lenta repetitivo [Ca2 +] i (intracelular de Ca2 + concentración) oscilaciones, con un período de 1-4 minutos, que persistió durante la duración de la grabación (20-30 min). El pretratamiento con nifedipino, que bloquea la T y tipo L voltaje que funciona con canales de Ca2 + en las células de espermatogénesis, no modificar las características de las oscilaciones, pero redujo la proporción de células en las que se observaron. La estimulación con Bay K 8644 o FPL64176 inducida [Ca2 +] i oscilaciones en el 5-10% de las células, pero su frecuencia es baja (periodo, 4-5 min). Aplicación de valinomicina (1 microM) para sujetar el potencial de membrana en E (K) (potencial de equilibrio para el potasio) no modificar la actividad en las células oscilante, mostrando que el potencial de la membrana plasmática y la activación de voltaje que funciona con conductancias no están implicados en el mecanismo por el cual espermatozoides [Ca2 +] i oscilaciones que se generan.

Grupo III Metabotrópicos De Glutamato Inhibe La Activación Del Receptor De Ca2 + Afluencia Y Actividad De La óxido Nítrico Sintasa En Las Células De Estroma De Médula ósea

Journal of Cellular Physiology. Aug, 2005  |  Pubmed ID: 15799084

El óxido nítrico (NO) es fundamental para la fisiología ósea. En el constitutiva del sistema nervioso central, Ca (2 +)-calmodulina regula NO sintasa y la señalización de glutamato están íntimamente ligados. Dado que la L-glutamato de señalización se produce en el hueso y está implicada en la regulación del hueso, hemos investigado el efecto de L-glutamato en la NO sintasa en células derivadas del hueso. El tratamiento de células estromales de médula con L-glutamato reducido basal de NO sintasa actividad en un 40%. Imágenes mostraron que la L-glutamato causó una caída rápida, generalmente localizada y lentamente reversible de [Ca (2 +)] (i). Este efecto era resistente a la ruptura intracelular de Ca (2 +) las tiendas, pero sensible a la extracelular (3 +) o la omisión de extracelular Ca (2 +), lo que demuestra que el glutamato actúa por inhibición de la membrana de Ca (2 +) afluencia. La descripción anterior sólo de tal efecto de L-glutamato es a través de la activación del receptor del grupo III, mGluR6, en la retina. Uso de Western Blot y RT-PCR se detectó mGluR6 proteínas y transcripciones en las células estromales de médula. Los efectos de la L-glutamato sobre la actividad NOS y [Ca (2 +)] (i) en las células estromales de médula fueron suprimidas por un inhibidor de grupo III mGluR, (S)-2-amino-2-metil-4-phosphonobutyric ácido. La grabación de potencial de membrana mostraron que, de manera similar a los efectos de la retina mGluR6 activación, L-glutamato hiperpolarización membrana inducida (-16 + / - 2 mV), que también fue sensible a la inhibición del grupo III mGluR. L-glutamato no tuvo ningún efecto sobre los niveles de AMPc. Se concluye que la activación de un mGluR grupo III en células de médula ósea del estroma inhibe una Ca (2 +)-permeable canal membrana plasmática, la reducción de [Ca (2 +)] generación (i) y la supresión de NO. Estas observaciones están directamente relacionados ósea L-glutamato de señalización a los procesos centrales para el crecimiento óseo y la regulación.

Reevaluar El Papel De La Progesterona En La Fertilización - Señalización De Calcio En Compartimentos En Los Espermatozoides Humanos?

Human Reproduction (Oxford, England). Oct, 2005  |  Pubmed ID: 15980011

La progesterona está presente en concentraciones micromolares en las proximidades del oocito. Espermatozoides humanos generan un aumento bifásico en la concentración de calcio intracelular ([Ca (2 +)] (i)) y se someten a la reacción del acrosoma al estímulo de la progesterona, lo que sugiere que la hormona actúa como un inductor de secundaria o 'primer' de la reacción del acrosoma en asociación con la zona pelúcida. Sin embargo, la sensibilidad de los espermatozoides humanos a la progesterona es tal que muchas células pueden someterse a la reacción del acrosoma prematuramente, poniendo en peligro su capacidad de fecundar. Hemos demostrado que la exposición de los espermatozoides humanos a un gradiente de progesterona, simulando el estímulo encontrado como enfoque esperma del oocito, da como resultado una respuesta novedosa. Un lento aumento de [Ca (2 +)] (i) se produce, en las que, en muchas células, [Ca (2 +)] (i) las oscilaciones que se superponen. Las células que muestran este patrón de respuesta no se someten a la reacción del acrosoma, sino que muestran un patrón de alternancia de la actividad flagelar asociado con picos y valles de [Ca (2 +)] (i). A Ca (2 +) tienda en la parte posterior de la cabeza del espermatozoide al parecer, genera esta señal compleja, que funciona como un '[Ca (2 +)] (i) del oscilador. Proponemos que: (i) la reacción del acrosoma y el golpe flagelar están regulados por separado Ca (2 +) tiendas, (ii) estos almacenes se movilizan a través de mecanismos diferentes por los distintos agonistas, y (iii) los actos de progesterona en vivo como un interruptor para el oscilador que regula el modo de latido flagelar.

El Espermatozoide En La Fecundación: Conocimientos Actuales Y Futuras Líneas De Investigación

Human Fertility (Cambridge, England). Dec, 2005  |  Pubmed ID: 16393824

Cinética De La Reacción Acrosomal Inducida Por La Progesterona Y Su Relación Con Las Respuestas De Calcio Intracelular En Espermatozoides Humanos Individuales

Biology of Reproduction. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 16957023

La progesterona a las 3 microM provoca un aumento bifásico (transitoria y sostenida) de calcio intracelular ([Ca (2 +)] (i)) en el esperma humano, que se cree que es un requisito previo para la progesterona inducida por la reacción del acrosoma (RA). Como se sabe muy poco acerca de cómo AR ocurrencia, la latencia, y la terminación se refieren a las características de la progesterona inducida [Ca (2 +)] (i) de la señal, hemos examinado estos eventos mediante microscopía de fluorescencia de los espermatozoides vida humana individual. La evaluación directa del estado acrosomal después de la filmación de calcio no mostraron diferencias en la cinética o la amplitud de las respuestas anteriores de calcio inducida por la progesterona en las células del acrosoma reaccionado, y el acrosoma intacto-, lo que indica que la amplitud de la [Ca (2 +)] (i) la señal no es el determinante crítico de la AR. La quelación de calcio extracelular para arrestar a AR en distintos momentos después de la estimulación de progesterona reveló que el máximo de AR se produjo inmediatamente después del estímulo de la progesterona, durante la entrada de calcio transitorio inicial en lugar de durante la respuesta de calcio sostenido. Los intentos para seguir la dispersión acrosómica en tiempo real mediante la tinción con el ácido LysoTracker orgánulo sondas DND-99 y dapoxyl (2-aminoetil) sulfonamida (DAES) no fueron concluyentes debido a etiquetado heterogénea de la población celular. Sorprendentemente, el medio de contraste a menudo no se limita a la acrosoma, pero manchada toda la cabeza del espermatozoide, lo que sugiere que sólo una subpoblación de células de esperma humano contiene un acrosoma suficientemente ácida.

Caracterización De Suero Inducidos Por Las Oscilaciones Ca2 + Intracelular En Células Primarias Estromales De Médula ósea

Journal of Cellular Physiology. Mar, 2006  |  Pubmed ID: 16245308

Ca2 + intracelular de señalización es fundamental para la función celular y [Ca2 +] i oscilaciones permiten una modulación precisa y prolongada de una serie de Ca2 + sensibles a los procesos sin la necesidad de elevaciones extendidas y globales en la [Ca2 +] i. Hemos estudiado [Ca2 +] i de señalización en células primarias de rata estroma de la médula expuesta a suero fetal de ternero (FCS) componentes en concentraciones de hasta a las requeridas para promover el crecimiento y la diferenciación en la cultura. Espontánea [Ca2 +] i la señalización no se observó, pero la exposición a un 1% FCS inducida regulares y sostenidos de Ca2 + en las oscilaciones de 41 + / - 3% de las células. Incidencia de la FCS-inducidos por las oscilaciones de la dosis-dependiente, la saturación en el 0,5%. Estas oscilaciones fueron detenidos por la ruptura de Ca2 + tiendas con 100 nM-1 thapsigargin microM o descarga del potencial de membrana mitocondrial y fueron sensibles al bloqueo de IP3-receptores en un 50 microM 2-amino-ethoxydiphenyl borato (2-APB) y la inhibición de la fosfolipasa C con 5 microM U73122. Las oscilaciones disminuye en frecuencia y amplitud consecuencia de la inhibición del influjo de Ca2 + con EGTA o La3 +, pero fueron poco sensibles a la nifedipina (1-10 microM) y la Bahía de K 8644 (300 nm). El factor (s) responsable de inducir [Ca2 +] i oscilaciones son estables al calor, insensible a la reducción de enlace disulfuro con ditioeritritol 20 mM y retenido por un filtro de peso molecular de 30 kDa. El suero es habitualmente presente en medio de cultivo a 10% -15% [v / v] y las células estromales de médula mantenidas bajo condiciones de cultivo exhibieron sostenido oscilaciones. Esta es la primera demostración de la inducida por agonista del complejo Ca2 + señales en las células estromales de médula. Llegamos a la conclusión de que las oscilaciones de Ca2 + se producen constantemente en estas células en cultivo y son importantes reguladores potenciales de proliferación y diferenciación celular.

Expresión De La Mecanosensibles 2 Paquetes De Canal + TREK-1 En Osteoblastos Humanos

Journal of Cellular Physiology. Mar, 2006  |  Pubmed ID: 16250016

TREK-1 es un miembro de mecanosensible de la familia de canal de dos de los poros de dominio de potasio (2 paquetes +) que también es sensible a los lípidos, ácidos grasos libres (incluyendo el ácido araquidónico), la temperatura, el pH intracelular, y una gama de compuestos clínicamente relevantes, incluyendo los anestésicos volátiles . TREK-1 se sabe que se expresa en altos niveles en los tejidos excitables, tales como el sistema nervioso, el músculo cardíaco y liso, donde se cree que desempeñan un papel importante en el control de la excitabilidad en reposo la membrana celular y potencial eléctrico. En este informe, se utiliza RT-PCR, Western Blot e inmunohistoquímica para confirmar que los osteoblastos humanos obtenidos y las células MG63 expresa TREK-1 ARNm y proteínas. Además, se muestra la expresión de genes de los canales de TREK2c y TRAAK. Por otra parte, toda célula de patch clamp electrofisiología demuestra que estas células expresan un activo de forma espontánea, por fuera rectificar potasio "fuga de fondo" actual que comparte muchas similitudes con el TREK-1. La corriente hacia el exterior es bastante insensible a TEA y + Ba2, y es sensible a la aplicación de lisofosfatidilcolina (LPC). Además, el bloqueo de TREK-1 se muestra la actividad del canal para regular al alza la proliferación de células de hueso. Se concluye que los osteoblastos humanos funcionalmente expresa TREK-1 y que estos canales contribuir, al menos en parte, al potencial de membrana de reposo de las células osteoblastos humanos. Nuestra hipótesis es un posible papel de TREK-1 en mecanotransducción, dando lugar a la remodelación ósea.

Conteo De Esperma No Suma Más: Tiempo Para Una Nueva Ecuación?

Reproduction (Cambridge, England). Apr, 2007  |  Pubmed ID: 17504912

Aunque la disfunción de esperma es la causa más común de infertilidad, contamos con métodos de diagnóstico pobres y sorprendentemente no hay un tratamiento eficaz (con exclusión de las técnicas de reproducción asistida). En esta revisión, desafiamos a la utilidad de un análisis de semen básico y argumentan que un nuevo paradigma se requiere de inmediato. Se discute el uso de la evaluación en el hogar para mejorar potencialmente el diagnóstico del varón y de racionalizar la gestión de la pareja sub-fértil. Además, se exponen los avances recientes en el campo, por ejemplo, en la proteómica, que permitirá el desarrollo de nuevos biomarcadores de la función espermática. Este nuevo conocimiento va a transformar nuestra comprensión del espermatozoide como una máquina y es probable que conduzca a la no-ART tratamientos para hombres con disfunción esperma.

Resolución Dinámica De La Exocitosis Acrosomal En Espermatozoides Humanos

Journal of Cell Science. Jul, 2008  |  Pubmed ID: 18522990

Un paso esencial en la fecundación de mamíferos es la reacción del acrosoma de espermatozoides (AR) - exocitosis de una vesícula única de gran tamaño (el acrosoma) que rodea el núcleo de la cabeza del espermatozoide apical. El plasma y las membranas acrosomal fusible, lo que resulta tanto en la liberación de factores que podrían facilitar la penetración de la zona pelúcida (que invierte el huevo) y la externalización de los componentes de la membrana necesarios para la fusión de gametos. Exocitosis en las células somáticas es un proceso rápido - por lo general completa en cuestión de milisegundos - sin embargo, las enzimas acrosomal se requieren a lo largo de la penetración de zona - un período de minutos. A continuación, presentamos los primeros estudios de este evento crucial y complejo que ocurre en tiempo real en el espermatozoide vivo con time-lapse microscopía de fluorescencia. Imagen simultánea de sondas separadas para el contenido acrosomal y exposición de la membrana interna de que la fusión de membranas acrosomal rápida, que se inició en el ápice celular, es seguido por la dispersión excepcionalmente lento del contenido acrosomal (hasta 12 minutos). Las células que pierden su acrosoma prematuramente (espontánea AR), comprometiendo su capacidad de penetrar en las vestiduras de huevo, son los que ya están sujetos a una pérdida de la motilidad y la viabilidad. Las células sometidas a estímulos inducidos por la AR (progesterona o A23187) siguen siendo viables, con una proporción restante móviles (progesterona). Estos hallazgos sugieren que la AR es una forma altamente adaptada de la exocitosis.

Mecanismo Molecular De La Quimiotaxis De Los Espermatozoides Humanos Mediada Por La Progesterona

PloS One. 2009  |  Pubmed ID: 19997608

Quimiotaxis espermática es un mecanismo químico de guía que puede orientar a los espermatozoides a la superficie del huevo. Un gradiente de concentración picomolar de progesterona (P), el principal componente esteroide secretada por las células del cumulus que rodean el huevo, atrae espermatozoides humanos. Con el fin de dilucidar el mecanismo molecular de la quimiotaxis de los espermatozoides mediada por P, que combinan la aplicación de diferentes estrategias: la inhibición farmacológica de moléculas de señalización, las mediciones de las concentraciones de segundos mensajeros y la activación de la señalización quimiotáctica. Nuestros datos implican una serie de clásicos de las vías de transducción de señales en la respuesta y proporcionar un modelo para la secuencia de eventos, donde se activa la vía TMAC-AMPc-PKA primero, seguido por la fosforilación de la proteína tirosina (ecuatorial banda y flagelo) y la movilización de calcio ( a través de IP (3) R y canales SOC), mientras que la cascada de GCs-GMPc-PKG, se activa después. Estos acontecimientos conducen a la orientación de los espermatozoides hacia la fuente de la chemoattractant. El hallazgo propone un mecanismo molecular que contribuye a la comprensión de la vía de transducción de señal que tiene lugar en un proceso fisiológico como quimiotaxis.

Auto-incompatibilidad En Papaver Rhoeas Activa Conductancia Catiónica Inespecífica Permeable Al Ca2 + Y K +

Plant Physiology. Feb, 2011  |  Pubmed ID: 21177472

Las respuestas celulares dependen de señalización. En las células vegetales, calcio libre citosólico es un segundo mensajero importante, y los canales iónicos desempeñan un papel clave en la mediación de las respuestas fisiológicas. Autoincompatibilidad (SI) es un importante mecanismo genéticamente controlado para evitar la autofecundación. Se utiliza la interacción de igualar S-determinantes del pistilo y el polen para permitir que el "yo" el reconocimiento, lo que provoca el rechazo del polen incompatible. En Papaver rhoeas, los S-son los factores determinantes de las ELP y PRPs. PRSS es una novela pequeña proteína rica en cisteína; Prps es una nueva proteína transmembrana pequeño. Interacción de las ELP incompatibles con el polen estimula la S-específicas aumentos en el calcio libre citosólico y alteraciones en el citoesqueleto de actina, lo que resulta en la muerte celular programada en el polen incompatible, pero no compatibles. En este caso, hemos utilizado células enteras patch clamp de protoplastos de polen para demostrar que PRSS estimula SI específico de la activación de la conductancia de la membrana plasmática de granos de polen en protoplastos de granos incompatibles, pero no compatible con el polen. La conductancia SI-activado no requiere la activación de tensión, pero es sensible al voltaje. Es permeable a los cationes divalentes (Ba (2 +) ≥ Ca (2 +)> Mg (2 +)) y los iones monovalentes K (+) y NH (4) (+) y se ha mejorado en los voltajes negativos a -100 mV. El Ca (2 +) conductancia está bloqueada por la (3 +), pero no por el verapamil; los K (+) corrientes son el cloruro de tetraetilamonio insensible y no requieren Ca (2 +). Proponemos que la conductancia SI-estimulado puede representar un canal catiónico inespecífico o, posiblemente, dos conductancias y permeables a los cationes monovalentes y bivalentes. Nuestros datos proporciona una visión de acoplamiento de la señal de respuesta que impliquen una respuesta biológicamente importante. PRSS ofrece un raro ejemplo de una proteína desencadenante alteraciones en la actividad del canal iónico.