Expresión Del Virus De Inmunodeficiencia Humana Tipo 1 Gp120 De Resultados De Herpes Simplex Virus Tipo 1-derivado Amplicones En Respuestas De Inmune Celulares Y Humorales De Durables, Potentes Y Específicas

Journal of Virology. Jun, 2002  |  Pubmed ID: 11991985

Herpes simplex virus tipo 1 (HSV-1) infecta una amplia gama de células, incluyendo células dendríticas. En consecuencia, vectores de HSV-1 pueden ser capaces de suscitar fuerte respuesta inmune a antígenos virales. Para probar esta hipótesis, un plásmido de amplicones de HSV-1 codificación de virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 gp120 fue construidos y murinas inmunorespuestas a ayudante libre de virus amplicon preparados derivados de esta construcción se evaluaron. Estudios iniciales revelaron que una inyección única intramuscular (i.m.) de 10 (6) unidades infecciosas (i.u.) de partículas de amplicones de HSV:gp120 (HSV:gp120) produce respuestas de inmune celulares y humorales Env-específicas. Un potente, CD8 (+)-T-célula-mediado ante un H-2D (d)-péptido restringido de gp120 (RGPGRAFVTI) fue medido por un interferón gamma ELISPOT y fue confirmada por análisis de linfocitos citotóxicos-T estándar. Inmunoglobulina G enzyme-linked immunosorbent assay análisis demostró la inducción de una respuesta fuerte, Env-específica del anticuerpo. Una i.m. o una administración intradérmica de HSV:gp120 en la base de la cola sacaron una inmunorespuesta celular más potente que hicieron una inoculación intraperitoneal (i.p.), aunque una introducción de i.p. generó una fuerte respuesta humoral. La respuesta inmune a HSV:gp120 era resistente, robusto respuestas celulares y humorales, persistiendo en 171 días después una sola inoculación de i.u. 6 10. La respuesta inmune a HSV:gp120 también fue encontrada para ser dependientes de la dosis: tan solo como 10 u.i. suscitó una fuerte respuesta de células T. Finalmente, HSV:gp120 había sacado importantes Env inespecífico celular inmunorespuestas incluso en animales que habían sido previamente infectados con el salvaje-tipo HSV-1. Tomados en conjunto, estos datos apoyan fuertemente el uso de HSV-1 libre de ayudante amplicon partículas como vectores de suministro de la vacuna.

Factor De Necrosis Tumoral-alfa En El Cerebro Normal Y Enfermo: Efectos Contradictorios Via Crosstalk Receptor Intraneuronal?

Journal of Neurovirology. Dec, 2002  |  Pubmed ID: 12476354

Factor de necrosis tumoral alfa (TNF-alfa) es mediador pleiotrópico de una gran variedad de funciones fisiológicas y neurológicas, incluyendo tanto las funciones normales de regulación y la respuesta inmune a los agentes infecciosos. Su papel en el sistema nervioso es importante, pero paradójica. Estudios sobre la inflamada o "normal" del cerebro por lo general han atribuido el TNF-alfa un efecto neuromodulador. Por el contrario, en el cerebro inflamado o enfermo, la abundancia de la evidencia sugiere que el TNF-alfa tiene un efecto general neurotóxico, lo que puede ser particularmente pronunciado para la enfermedad neurológica mediada por virus. Otros han encontrado TNF-alfa a ser de protección, bajo ciertas condiciones de daño neurológico. Todavía no está claro exactamente cómo el TNF-alfa es capaz de inducir estos efectos opuestos a través de la activación del receptor de tan sólo un conjunto limitado de vías de señalización celular. En este trabajo, ofrecemos el apoyo de la literatura para avanzar en nuestra hipótesis de que un mecanismo por el cual el TNF-alfa puede ejercer sus efectos paradójicos en el cerebro es a través de interferencia con las vías de señalización de factores de crecimiento o de otras citoquinas.

Ingeniería De Fibronectina Tipo III Dominio Con Una Secuencia RGDWXE Une Con Mayor Afinidad Y Especificidad a Integrina Alfavbeta3 Humana

Journal of Molecular Biology. Mar, 2003  |  Pubmed ID: 12595259

Fibronectina es una proteína de la matriz extracelular con especificidad de amplia Unión a receptores de la superficie, las integrinas de la célula. Décimo fibronectina tipo III dominio (FNfn10) es un pequeño dominio autónomo de fibronectina que contiene la secuencia RGE que participa directamente en el enlace de la integrina. Sin embargo, en aislamiento FNfn10 solamente débil unen a integrinas. Razonamos que variantes de alta afinidad y alta especificidad de FNfn10 a una particular integrina podrían diseñarse mediante la optimización de residuos que rodean la secuencia RGD de integrina vinculante en el circuito flexible de FG. Maduración de la afinidad de FNfn10 a Alfavbeta3 integrina, una integrina regulado hasta en células endoteliales angiogénicos y en algunas células del tumor metastático, rindió a mutantes de FNfn10 Alfavbeta3 vinculante con una secuencia de consenso RGDWXE novela. Uno de los clones RGDWXE modificados, FNfn10-3JCLI4, caracterizamos como proteína purificada. FNfn10-3JCLI4 se une con alta afinidad y especificidad a integrina Alfavbeta3 purificada. Alanina exploración mutagénesis sugirió que el triptófano y el ácido glutámico residuos siguiendo la secuencia RGD son necesarios para la máxima afinidad y especificidad por Alfavbeta3. FNfn10-3JCLI4 manchadas específicamente células positivas Alfavbeta3 detectada con citometría de flujo y que inhibe la adhesión celular Alfavbeta3-dependiente. Como con el anticuerpo anti-Alfavbeta3 LM609, FNfn10-3JCLI4 puede interferir con la formación capilar in vitro. Tomados en conjunto, estos datos demuestran que FNfn10-3JCL14 es una proteína de unión a Alfavbeta3 específica, alta afinidad que puede inhibir procesos celulares dependientes Alfavbeta3 similares a un anticuerpo monoclonal de anti-Alfavbeta3. Estas propiedades, combinadas con la estructura pequeña, monomérica, libre de cisteína y altamente estable de FNfn10-3JCLI4, pueden hacer que esta proteína útil en futuras aplicaciones que implican la detección y selección de células positivas Alfavbeta3.

Comprensión Mecanicista De Una Fidelidad Alterada Inmunodeficiencia De Los Simios Virus Transcriptasa Reversa Mutación, V148I, Identificada En Un Macaco De Cola De Cerdo

The Journal of Biological Chemistry. Aug, 2003  |  Pubmed ID: 12740369

Recientemente nos han informado que la transcriptasa inversa (RT) de SIVMNE 170 (170), que es un clon viral representativo de la última fase sintomática de la infección con la cepa parental, SIVMNE CL8 (CL8), tiene una fidelidad mayor en gran medida, en comparación con la RT CL8. En el presente estudio, analizamos las alteraciones mecánicas de la variante de alta fidelidad 170 RT. En primer lugar, se encontró que entre varias mutaciones de RT 170, único, V148I, es responsable del aumento de la fidelidad sobre la RT CL8. Esta mutación de V148I se encuentra cerca de los residuos de Gln-151 que encontramos recientemente es importante la baja fidelidad de RT y el atascamiento de dNTPs entrante. En segundo lugar, comparamos dNTP afinidad (Kd) y catálisis (kpol) de la RT CL8 y la RT CL8-V148I usando análisis cinético de pre-steady estado. En este experimento, la alta fidelidad CL8-V148I RT ha disminuido en gran medida vinculante a dNTP tanto correcta e incorrecta sin alterar la kpol. El aumento de fidelidad, impartido por la mutación de V148I es probable debido a la importante reducción en Unión de RT a dNTPs. Esto es paralelo a nuestros resultados con el mutante Q151N. En tercer lugar, dirigida mutagénesis dirigida a residuo de aminoácido 148 ha revelado que un aminoácido valina en esta posición es esencial para la infidelidad de RT. De acuerdo con estos resultados, discutimos posibles impactos estructurales de residuo 148 (y mutaciones en este sitio) en la interacción de RT con dNTPs entrante y deducir cómo alteraciones en estas propiedades pueden relacionarse con aptitud y replicación viral.

La Respuesta Inmune Celular a Ayudante Sin HSV-1 Partículas Amplicon Codificación Gp120 Del VIH-1 Son Realzadas Por Cebado De ADN

Vaccine. Jun, 2003  |  Pubmed ID: 12744859

Una sola inoculación de virus de herpes simple tipo 1 (HSV-1) amplicón vectores codificación gp120 de virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (HSV:gp120) da lugar a respuestas inmunitarias específicas, robustas a gp120. Para explorar más la utilidad de este sistema de entrega de la nueva vacuna, examinamos la cinética de la respuesta inmune celular por la tinción de tetrámero, siguiendo una sola administración intramuscular de partículas HSV:gp120 y encontró que alcanza en post-immunization 9-28 días, antes de negarse a una respuesta de memoria estable. También examinamos la utilidad de los regímenes de primer impulso usando partículas de productos envasados y amplicon desnudo plásmido de DNA (DNA: gp120). Estos experimentos demostraron que dos vacunas secuenciales con HSV:gp120 resultaron en un incremento de 5-10 veces en gp120 inespecífico celular inmunorespuestas y que cebado de ADN plásmido, seguido por amplicon partícula impulsar, impartido más fuerte aguda y las respuestas de células T de memoria, según lo determinado por análisis de tetrámero. Colectivamente, estos resultados demuestran la utilidad de los vectores de amplicones HSV en los regímenes de primer impulso para el desarrollo de vacunas del VIH.

Un Péptido Que Contiene Una Secuencia De Unión FPGN CD40 Novela Mejora La Infección Adenoviral De Células Dendríticas Murinas Y Humanas

European Journal of Biochemistry / FEBS. May, 2003  |  Pubmed ID: 12752448

CD40 es un receptor con numerosas funciones en la activación de células (APC), presentadoras de antígeno células particularmente dendríticas (DC). Utilizando la tecnología de la reproducción del fago, identificamos péptidos lineales que contiene una secuencia de consenso FPGN/S novela que realza el atascamiento de Fago a una proteína de fusión murina purificada de las CD40-inmunoglobulina (Ig) (CD40-Ig), pero no solo de Ig. Para examinar la capacidad de los péptidos FPGN/S para mejorar la infección adenoviral de células positivas CD40, utilizamos bifuncionales péptidos que consta de un péptido que contienen FPGN covalente a un péptido de perilla vinculante adenoviral (KBP). Uno de ellos, FPGN2-KBP, fue capaz de aumentar la infección adenoviral de DCs tanto murinos y humanos de una manera dosis-dependiente. FPGN2-KBP había mejorado también infección de murino B células blastos, una línea de células de linfoma B murina (L10A) y células humanas inmortalizadas de B. Para demostrar que el realce de la infección adenoviral dependía de la presencia de CD40, analizamos la infección de la línea de cáncer de mama, SKBR3, no expresa CD40 o el receptor celular del adenovirus, coche. Infección de células SKBR3 fue realzada por FPGN2-KBP después de transfección transitoria con un vector plásmido que expresa murino CD40, pero no cuando las células eran mock-transfectadas. En conclusión, hemos aislado un péptido que se une a murino CD40 y promueve la absorción de adenovirus en células de CD40-expresión de origen humano y murino, sugiriendo que puede tener aplicaciones potenciales para la entrega del antígeno de células presentadoras de antígeno CD40-positivo.

Citomegalovirus Murino Abortively Infecta Células Dendríticas Humanas, Expresión Y Presentación De Los Genes Virales Viralmente

Journal of Virology. Jul, 2003  |  Pubmed ID: 12805417

Células dendríticas (DC) son potentes presentadoras de antígeno de células que desempeñan un papel crucial en la respuesta inmunitaria específica antígeno. Así, la focalización de los antígenos exógenos a DC se ha convertido en un enfoque popular para el desarrollo de la vacuna y la inmunoterapia del cáncer. En este informe, se estudió la interacción entre humanos y murino citomegalovirus (MCMV) derivados de monocitos DC. Los resultados mostraron que una proteína fluorescente verde mejorada (EGFP)-codificación, réplica-competente MCMV vector experimentó infección abortiva en DC humana; Esto fue acompañado por la expresión eficiente de EGFP. Infección de humano DC por este vector dio lugar a un modesto aumento en la expresión de proteínas de la superficie de la célula asociado con la maduración de la DC y no tiene ningún efecto significativo sobre la función de inmunoestimulantes de las células, tal y como refleja su capacidad para apoyar la proliferación de células T en una reacción de linfocitos mezclado. Por último, un vector MCMV codificación el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) gp120 glicoproteína de envoltura fue construida y utilizada para infectar DC humana cultivada. La DC infectado fueron demostrados para ser capaz de estimular la expansión de linfocitos de T restringida clase autólogo, gp120-específica, de un donante de VIH-1-negativas, según lo determinado por la tinción de tetrámero y análisis enzima-ligado del immunospot. Tomados en conjunto, estos resultados sugieren que MCMV tenga utilidad potencial como vector para el desarrollo de vacunas humanas.

Efectos Del Codón-optimización En La Expresión De La Proteína Por El Marco De Lectura Abierto De Herpesvirus Humano 6 Y 7 U51

Journal of Virological Methods. Aug, 2003  |  Pubmed ID: 12880930

Codón-optimización se refiere a la alteración de secuencias de genes, para hacer uso del codón coincida con la piscina de tRNA disponibles dentro de las célula y las especies de interés. Codón-optimización se ha convertido en una poderosa herramienta para aumentar la expresión de la proteína por los genes de los virus ARN y ADN pequeños, que contienen comúnmente superpuestas marcos de lectura así como elementos estructurales que se encajan dentro de la codificación de las regiones; estas características no están extendidas entre grandes virus de ADN. Por lo tanto, examinamos si codón optimización puede influir en la expresión de la proteína de un gen de herpesvirus. Nos centramos en el gene de U51 de humano herpesvirus-6 y -7, que fue reproducido en forma nativa y codón optimizado, con una etiqueta de epitope HA N-terminal para permitir la detección de la proteína. Codón-optimización se asoció con una profunda (10-100 veces) aumento en la expresión de U51 en humanos (293A, HSG, K562) o líneas celulares de hámster (CHO), sugiriendo que esto puede representar una herramienta valiosa para facilitar estudios funcionales en genes de herpesvirus recalcitrante. Finalmente, se postula que la expresión subóptima de U51 nativo puede reflejar un mecanismo regulador que controla la expresión de genes virales.

Actividades Neuroprotectoras De Valproato De Sodio En Un Modelo Murino De Virus De Inmunodeficiencia Humana-1 Encefalitis

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Oct, 2003  |  Pubmed ID: 14534250

El virus de la inmunodeficiencia humana-1 (VIH-1) del sistema nervioso puede dar lugar a eventos neuroinflamatorios que conducen primero a la disfunción neuronal luego a alteraciones cognitivas y conductuales en las personas infectadas. El carácter polifacético del proceso de la enfermedad, comúnmente llamado VIH-1 asociada a la demencia (HAD), ofrece una serie de oportunidades terapéuticas adyuvantes. Un tratamiento complementario propuesto es el valproato de sodio (VPA), un anticonvulsivo conocido por promover el crecimiento de las neuritas y aumentar la beta-catenina a través de la inhibición de la sintasa de glucógeno y la actividad de la quinasa 3beta fosforilación de tau. Vamos a demostrar que el tratamiento de VPA de las neuronas corticales de ratas expuestas al VIH-1 gp120 impide las actividades resultantes neurotóxicos. Esto incluye la inducción de crecimiento neurítico significativo y microtúbulos proteína asociada 2 (MAP-2) y neuronal específica antígenos nucleares de proteínas (NeuN) en afectados cuerpos de células neuronales y procesos. Del mismo modo, VPA protege inmunodeficiencia combinada severa (SCID) los ratones contra la neurodegeneración del VIH-infectados 1ADA macrófagos derivados de monocitos (MDM). En los ratones SCID con el VIH-1 MDM encefalitis causada por el tratamiento de VPA redujo significativamente neuronal phosphorylatedbeta-catenina y tau, sin afectar la replicación del VIH-1 o la activación glial. Llegamos a la conclusión que el VPA protege a las neuronas contra el VIH-1 neurotoxicidad MDM infectados, posiblemente a través de sus efectos sobre la fosforilación de tau y beta-catenina. El uso de VPA como coadyuvante en el tratamiento de humanos ha está llevando a cabo.

Evaluación Inmunohistoquímica De La Fractalquina, Células Inflamatorias, Y Herpes Humano Tipo 7 En Humanos Glándulas Salivales

The Journal of Histochemistry and Cytochemistry : Official Journal of the Histochemistry Society. May, 2004  |  Pubmed ID: 15100244

Fractalquina Humanos (CX3CL1), una delta-quimioquinas, está implicado en la mediación de las funciones múltiples de la célula. Además de servir como un factor quimiotáctico para los subtipos de células mononucleares, unida a la membrana fractalquina pueden promover la infección vírica mediante la interacción con viriones que codifican putativo fractalquina de unión a proteínas. Fractalquina expresión en tejidos epiteliales normales estudiados hasta la fecha es constitutiva o es aumentada con la inflamación. En las glándulas salivales, la expresión de fractalquina es desconocida. Por otra parte, las glándulas salivales son un sitio importante para la infección persistente y productiva por virus del herpes humano (HHV) -7, que codifica dos supuestos fractalquina vinculantes productos génicos, U12 y U51. Sorprendentemente, la distribución celular del HHV-7 en las glándulas salivales mayores no ha sido explorado. Por lo tanto, determinada por inmunohistoquímica la localización celular de fractalquina en tres diferentes glándulas salivales: parótida, submandibular y glándulas labiales. Expresión fractalquina fue muy variable, desde altos a niveles indetectables. Asimismo, examinó la asociación de fractalquina con infiltración de células inflamatorias o infección por HHV-7 de las células epiteliales salivales. Las células inflamatorias fueron siempre adyacente a las células epiteliales que expresan fractalquina, consistente con una función de fractalquina en el reclutamiento de células inflamatorias y / o retención en las glándulas salivares. En contraste, el HHV-7-células epiteliales infectadas no siempre expresa fractalquina, lo que sugiere que fractalquina puede no ser un requisito absoluto para la entrada viral.

Sobreexpresión Transitoria De Los Receptores Opioides Kappa Y Mu Usando Vectores Adenovirus Recombinantes

Journal of Neuroscience Methods. Jul, 2004  |  Pubmed ID: 15183265

Con el fin de estudiar el tráfico y mecanismos de transducción de señales de los receptores opioides múltiples de la señal, estos receptores se expresan transitoriamente o estable en líneas celulares. A menudo, resulta difícil expresos receptores a una densidad suficientemente alta para obtener resultados reproducibles. Para lograr una alta densidad de receptores, se construyeron vectores adenovirus defectuoso de replicación (rAd5) codificación el mu (MOR) y receptores opiáceos kappa (KOR), como proteínas de fusión con la proteína fluorescente verde (GFP) en su C-terminal tanto en su forma nativa. Estos vectores eficientemente y reproducible infectan las células de ovario (CHO) de hámster chino que estable expresan el receptor de coxsackie-adenovirus humano (hCAR), con hasta un 90% de las células que infectan a una baja multiplicidad de infección (MOI). Estudios de unión del receptor de saturación con agonistas mu y kappa-selectivo, Encefalina (DAMGO) de [3 H] [D-Ala2, N-Me-Phe4, Gly5-ol] y [3H](5alpha7alpha,8beta)-(-)-N-methyl-N-(7-(1-pyrrolidinyl)-1-oxaspiro(4,5)dec-8-yl)benzeneacetamide (U69, 593), respectivamente, y un antagonista no selectivo, de [3 H] diprenorphine, reveló que las células rAd5-transduced expresaron MOR y KOR durante al menos 3 días, nivel que superó a los presentes en sublíneas CHO ampliamente utilizado que expresan estable MOR o KOR. Niveles de expresión fueron mayores para los vectores de codificación nativo MOR o KOR y ligeramente reducción para las proteínas de fusión de la GFP. Estos resultados demuestran la viabilidad de utilizar rAd5 vectores para expresar los receptores opioides en altas densidades, que pueden facilitar estudios de receptores opioides.

La Activación De Los Receptores De Adenosina A2A Protege a Las Neuronas Simpáticas Contra La Retirada De Factor De Crecimiento Nervioso

Journal of Neuroscience Research. Jul, 2004  |  Pubmed ID: 15211592

La adenosina interviene en una serie de efectos en el sistema nervioso central (SNC), incluyendo la promoción de la supervivencia neuronal, pero sus acciones en las neuronas simpáticas no están tan bien caracterizados. Por lo tanto, trató de comprender el papel de la adenosina endógena en la contribución a la supervivencia de la neurotrofina-que dependen de las neuronas simpáticas. Rat superiores cervicales ganglionares (SCG) cultivos fueron mantenidos en presencia continua de factor de crecimiento nervioso (NGF) y luego se expusieron a la adenosina desaminasa (ADA), para agotar endógeno adenosina. Esto dio lugar a un marcado incremento en la apoptosis celular, a un nivel que aproximar el efecto de la retirada de NGF. Además, la adición de adenosina exógena al NGF-privadas neuronas SCG resultó en la supervivencia celular mejorada. Análisis de los receptores de adenosina (AR) subtipos de estas neuronas, utilizando en tiempo real RT-PCR y análisis de unión al receptor, reveló que el receptor A2A es el principal subtipo presente. En consecuencia, el agonista de los receptores A2A CGS21680 redujo significativamente tanto la ADA y la inducida por la retirada de NGF inducida por la apoptosis neuronal, mientras que el agonista del receptor A1 R-PIA no tuvo ese efecto. El efecto de supervivencia de promoción de CGS21680 fue eliminado cuando las células se coincubaron con un exceso molar de un antagonista de los receptores A2A. Por último, seguimiento experimentos revelaron que CGS21680 evitar la inducción de los primeros eventos de apoptosis, tales como cambios en la integridad mitocondrial y la activación de caspasas, y que también provocó un aumento en la activación de ERK, que era esencial para la supervivencia celular neurotrofina-independiente. En conjunto, estos resultados proporcionan evidencia de que la adenosina endógena puede ser importante en la mediación de la protección de las neuronas simpáticas y que puede actuar a través del subtipo de receptor A2A.

Herpesvirus Humano Tipo 6 Y Herpesvirus Humano Tipo 7 Infecciones Del Sistema Nervioso Central

Herpes : the Journal of the IHMF. Jun, 2004  |  Pubmed ID: 15319097

En el desarrollo de directrices para la mejora de la gestión de infecciones por virus herpes del sistema nervioso central (CNS), el Foro Internacional de manejo de Herpes (IHMF) ha considerado herpesvirus humano (HHV) tipo 6 y tipo 7 enfermedad. Aunque HHV-6 es generalmente asintomática, se ha asociado con Exantema súbito, convulsiones febriles y encefalitis en niños y adultos inmunocomprometidos y puede desempeñar un papel en la esclerosis múltiple, síndrome de Guillain-Barré y encefalomielitis diseminada aguda. Como HHV-6 está presente en el tejido cerebral de los individuos sanos, su función como agente etiológico en trastornos de la CNS es incierta. Mientras que la reacción en cadena de polimerasa (PCR) es un método útil para el diagnóstico de otras infecciones virales de la CNS, no tiene ningún valor para el diagnóstico de HHV-6. HHV-7 no se ha demostrado que causa una enfermedad específica, pero se asocia con convulsiones febriles y se ha implicado como causa de encefalitis. Ganciclovir y foscarnet, solos o en combinación, pueden utilizarse para el tratamiento de enfermedades neurológicas relacionadas con HHV-6. Aunque el ganciclovir es poco probable que sea eficaz contra las enfermedades relacionadas con HHV-7 CNS, foscarnet puede ser útil pero se necesitan ensayos prospectivos.

Tropismo Macrófago Del VIH-1 Depende De La Utilización Eficiente Celulares DNTP Por La Transcriptasa Inversa

The Journal of Biological Chemistry. Dec, 2004  |  Pubmed ID: 15452123

Retrovirus utilizan dNTPs celular para realizar la síntesis del ADN proviral en las células del huésped infectado. A diferencia de oncoretroviruses, que reproduce en la división de las células, lentivirus, tales como el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) y virus de la inmunodeficiencia de los simios, son capaces de replicar eficientemente en las células no se dividen (macrófagos terminalmente diferenciadas) como bien como divisorias células (células de T de CD4 + es decir activadas). En general, las células no se dividen son propensas a tener baja celulares dNTP contenido en comparación con la división de las células. Aquí, mediante el empleo de un análisis nuevo contenido celulares dNTP, determinamos las concentraciones de dNTP en dos células diana de VIH-1, los macrófagos y las células T CD4 + activadas. Encontramos que los macrófagos humanos contenían 130-250 veces una concentración de dNTP que las células T CD4 + humanas activadas. El análisis bioquímico reveló que, a diferencia de oncoretroviral inversa transcriptasas (RTs), RTs lentivirales eficientemente sintetizan ADN incluso en presencia de las concentraciones de dNTP bajo equivalentes a aquellas encontradas en los macrófagos. En consonancia con esta observación, vectores de VIH-1 que contiene a mutante RTs del VIH-1, que imitan cinéticamente oncoretroviral RTs, no transducir macrófagos humanos a pesar de la retención normal infectividad en las células T CD4 + activadas y otras células divisorias. Estos resultados sugieren que la capacidad del VIH-1 para infectar a los macrófagos, que es esencial para establecer la patogenesia temprana de la infección VIH-1, depende, al menos en parte, en la adaptación enzimática de VIH-1 RT para catalizar la síntesis de ADN en entornos de sustrato limitado celulares dNTP eficientemente.

Infecciones Congénitas Con Herpesvirus Humano 6 (HHV6) Y El Herpesvirus Humano 7 (HHV7)

The Journal of Pediatrics. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15480369

Para examinar si: (1) congénito herpesvirus humano 6 (HHV6) y el herpesvirus humano 7 (HHV7) las infecciones ocurren; Si (2) sus manifestaciones difieren de las infecciones postnatales; y si (3) infecciones HHV6 y HHV7 diferencian a pesar de su estrecha relación.

Herpesvirus Humano 6 (HHV6) ADN Persistencia Y Reactivación En Niños Sanos

The Journal of Pediatrics. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15480370

Para determinar en niños sanos después de la infección primaria la persistencia del herpesvirus humano 6 (HHV6) ADN, la presencia y frecuencia de HHV6 reactivación o reinfección y la relación de ambos a la enfermedad y la presencia de herpesvirus humano 7 (HHV7) infección.

Recuerdos Falsos En Los Niños. Evidencia De Un Cambio De Fonológico a Asociaciones Semánticas

Psychological Science. Nov, 2004  |  Pubmed ID: 15482451

Ilusiones de la memoria en niños de tres grupos de edad (5, 8 y 11 años) fueron investigados usando una versión modificada del procedimiento Deese-Roediger-McDermott (DRM). Los niños de cada grupo de edad recordaron falsamente nonpresented artículos relacionados con las listas de estudio. Sin embargo, la naturaleza de las intrusiones varió entre los diferentes grupos. Los 5 años de edad tenían más probabilidades de falso recordar palabras que rimada con los elementos estudiados que al recordar elementos sin relación, mientras que el 11-años tenían más probabilidades de falso recordar palabras semánticamente relacionados con el tema de la lista que para producir intrusiones con rimas o sin relación. Intrusiones de los 8 años de edad eran igualmente propensos a ser semántico, rimas o relacionado con el estudio de elementos. Los resultados son consistentes con la idea de un cambio del desarrollo de fonológico a asociaciones semánticas, lleva a distorsiones de la memoria cualitativamente diferente en niños de diferentes edades.

Despeinada Promueve Neurita Consecuencia En Diferenciador Neuroblastoma 2A Células Neuronales, Través De Una Vía Dependiente De DIX-dominio

Brain Research. Molecular Brain Research. Dec, 2004  |  Pubmed ID: 15548427

Rizados alborotado (Dvl) es una proteína citoplásmica en la cascada de señalización Wnt-crispado, que también se ha demostrado que interactúan con el citoesqueleto en parte mediante la inhibición de la glucógeno sintasa quinasa 3beta (GSK3beta). Usar ratón neuroblastoma 2A (N2A) células como sistema modelo, hemos encontrado que la sobreexpresión de Dvl promueve la consecuencia de procesos como los neurita y conduce a la inducción de un fenotipo morfológico llamativa, bipolar durante la diferenciación neuronal. En cambio, supresión de la expresión de Dvl mediante siRNAs isoforma específica condujo a una inhibición de neurita consecuencia en estas células. Para aclarar aún más los mecanismos responsables de este efecto, sobreexpresa varias formas mutantes de Dvl en las células N2A, incluyendo deleciones en cada uno de los tres principales subdominios funcionales de la proteína (DeltaDIX, DeltaPDZ, DeltaDEP) y las mutaciones de punto en los dos motivos de interacción bien definida dentro del dominio de DIX (la Unión a actina y elementos de la vesícula-Asociación; K58A y K68A/E69A, respectivamente). Estos experimentos revelaron que el dominio de DIX (y su subregión vesícula vinculante) era esencial para efecto de Dvl neurita extensión y morfogénesis en células N2A. Por el contrario, sobreexpresión directa de una forma resistente a la degradación de la beta-catenina (S37A), o un mutante de GSK3beta negativo dominante (K85R), no tuvo efecto en consecuencia neurita o morfología en neuronally diferenciar las células N2A; exposición de las células a un inhibidor farmacológico de GSK3beta (litio) también no tuvo ningún efecto. Tomados juntos, estos resultados sugieren que Dvl induce los cambios citoesqueleto y morfológicos en células neuronales de N2A diferenciadoras a través de un mecanismo que no se puede atribuir exclusivamente a la modulación de la actividad GSK3beta o beta-catenina, sino que depender de una vía de señalización de DIX-dominio/vesícula-Asociación-dependiente.

Inhibición Del VIH Tipo 1 Replicación Mediante Lentivirales Mediada Por Entrega De Mutante TRNA (Lys3) A58U

AIDS Research and Human Retroviruses. Dec, 2004  |  Pubmed ID: 15650425

En estudios previos, se mostró ese residuo A58 de tRNALys3 celular es necesario para la terminación adecuada del ADN viral plus-filamento fuerte-parada (+ ADN SS) y por lo tanto juega un papel fundamental en el ciclo de vida del VIH-1. También realizamos estudios de prueba-de-principio que establece que una forma mutante de este primer tRNA (tRNA (Lys3) A58U, que carece de la M1A58 residuos necesarios para + terminación SS DNA) podría inhibir la replicación del VIH-1. En el presente trabajo, examinamos si un tercer vector lentivirales generación (pecado) podría ser utilizado para entregar el tRNA (Lys3) A58U a las células de la CEM. Ambos estudios cinéticos virales y limitar los análisis de dilución (LDA), se observa un deterioro significativo de la replicación del VIH-1, hasta 3 registros en el LDA, en CEM sublines mutante expresando su tRNA (Lys3) A58U. Ninguna inhibición se produjo en las células que expresan salvaje-tipo tRNA(Lys3) o fueron transduced con vector vacío de pecado. Además, observamos el deterioro de la replicación viral mediante aislamientos primarios del VIH-1 y VIH-2 en sublíneas que contiene tRNA (Lys3) A58U. También detectamos replicación "avance" VIH-1 en algunos tRNA (Lys3) A58U-expresando culturas. Curiosamente, analizan avance virus parecen ser genéticamente y fenotípicamente tipo salvaje. Una posible explicación de avance virológica es que refleja la acumulación gradual de VIH-1 dentro de la cultura de la célula infectada, a un nivel superior en última instancia, al contención "umbral" conferida por el tRNA (Lys3) A58U. El hecho de que el VIH-1 no parece adquirir resistencia heredable a bloqueo de A58U-mediada del tRNA (Lys3) distingue esta modalidad antiviral de otras intervenciones terapéuticas. También sugiere que el tRNA mediada por la inhibición de la replicación viral podría ser un valioso complemento a otros enfoques antivirales.

Intención De Aprender Influye El Efecto De La Frecuencia De La Palabra En Memoria Pero No En La Memoria De Reconocimiento

Memory & Cognition. Dec, 2004  |  Pubmed ID: 15900925

Watkins, LeCompte y Kim (2000) sugieren que la ventaja de la memoria para palabras raras en listas mixtas obedece a una estrategia de estudio compensatoria que favorece las palabras raras. Encontraron que la ventaja se revirtió cuando palabras raras y comunes fueron estudiados en condiciones de aprendizaje incidental. El presente estudio investigó la posibilidad de que la ventaja de la palabra rara en la memoria de reconocimiento es también el resultado de una estrategia de estudio compensatoria. Experimento 1 replica los resultados de Watkins et al, que se elimina la palabra rara ventaja en memoria bajo condiciones de aprendizaje incidental. Por el contrario, experimento 2 mostró que la ventaja de la palabra rara en la memoria de reconocimiento se mantiene en ambas condiciones de aprendizaje intencional e incidentales. Experimento 3 replica los resultados de los experimentos 1 y 2 usando diferentes estímulos y una tarea de orientación diferente. Finalmente, el experimento 4 mostró que se mantiene la ventaja de la palabra rara en reconocimiento con listas de puras. Estos resultados demuestran que la ventaja de la palabra rara en la memoria de reconocimiento no es el resultado de una estrategia de estudio compensatoria. En cambio, palabras raras se codifican más claramente que las palabras comunes, independientemente de la intención de los participantes a recordarlas.

El Homólogo De Receptor Acoplado a Proteínas Del Herpesvirus Humano 6 G U51 Positivamente Regula La Replicación Del Virus Y Mejora La Fusión De La Célula in Vitro

Journal of Virology. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16140767

Herpesvirus humano 6 (HHV-6) es un betaherpesvirus de T-lymphotropic ubicua que codifica homólogos de receptor acoplado a proteínas G dos, U12 y U51. HHV-6A U51 se ha divulgado para enlazar a quimiocinas CC incluyendo RANTES, pero la función biológica de U51 sigue siendo incierta. En este informe, nos expresó estable corto específico de RNAs (siRNAs) que interfieren para U51 en las células T humanas y luego infectados estas células con HHV-6. Replicación del DNA viral se redujo 50 veces por el siRNA U51 y viralmente efectos citopáticos inducidos también fueron inhibidos. En cambio, formación de sincitio y replicación viral fueron inalteradas en células que expresan un revuelto derivado de los siRNA o un siRNA irrelevante y fueron restauradas a la normalidad cuando un humano derivado de codón optimizado de U51 fue introducido en las células que contienen el siRNA U51. Para examinar el mecanismo por el que U51 podría contribuir a la replicación viral, exploramos las características de señalización de U51. Ninguna de las quimiocinas y opioides probados fue capaz de inducir la proteína G acoplamiento por U51 y se obtuvo evidencia de opiáceos ligando por U51. También se evaluó el efecto de U51 sobre la fusión de la célula; Estos estudios demostraron que U51 mejorado fusión celular mediada por la proteína G del virus de la estomatitis vesicular. Sin embargo, un antisuero específico U51 había tenido actividad neutralizar virus, sugiriendo que U51 no pueden estar implicados en la interacción inicial entre la célula de partículas y anfitrión del virus. En general, estos estudios sugieren que U51 HHV-6 es un regulador positivo de la replicación del virus in vitro, tal vez porque puede favorecer la fusión de la membrana y facilita la propagación de la célula de este virus altamente asociada a la célula.

Mecanismos Neuroprotectores De Litio En Murino Virus De Inmunodeficiencia Humana-1 Encefalitis

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16162919

De litio (Li) ha ganado un considerable interés como un fármaco neuroprotector para una amplia gama de trastornos del sistema nervioso. Sus actividades neuroprotectores se producen como consecuencia de la glucógeno sintasa quinasa-3beta (GSK-3beta) que conduce a la inhibición de bloqueo aguas abajo de la beta-catenina y la fosforilación de tau. En el presente estudio, se investigó Li-mediadas por mecanismos neuroprotectores en el laboratorio y el virus murino-1 de la inmunodeficiencia humana (VIH-1) encefalitis (COLMENA) modelos. En pruebas de laboratorio, Li protegida neuronas a partir de las secreciones neurotóxicos del VIH-1-infected macrófagos derivados de monocitos (MDM). Esta fue la neuroprotección mediada, en parte, a través de la 3-kinase/Akt fosfatidilinositol y las vías de la GSK-3beta. Para examinar los efectos del tratamiento in vivo de Li, MDM se inyectaron en los ganglios basales de graves ratones inmunodeficientes combinados y luego se administró Li (60 mg / kg / d). Siete días después de la inyección de MDM, los ratones perdieron la vida y el tejido del SNC y se sometió a ensayos de transferencia de inmuno y occidental para los antígenos de leucocitos y de los nervios, GSK-3beta y sustratos quinasa clave, tales como beta-catenina y Tau. El número de VIH-1 positivos p24 antígeno-MDM no se modificó por el tratamiento de los ratones Li LA COLMENA. De manera similar, en la medida mucho mayor de astrocitos y la activación microglia en ratones COLMENA (10-veces y 16 veces, respectivamente, en comparación con los controles no manipuladas) fue también inalterada por Li. Por el contrario, Li restaurado COLMENA asociada a la pérdida de neuritas de proteínas-2-positivas asociadas con microtúbulos y la densidad sináptica, mientras que la reducción de los niveles o la actividad de fosfo-tau Ser202, fosfato beta-catenina, y GSK-3beta. Registros electrofisiológicos mostraron disminución de la potenciación a largo plazo en rodajas de hipocampo de ratones COLMENA que se restauraron por Li. Basándose en estos datos, el uso de Li como un adyuvante para el VIH-1 asociada a la demencia está siendo perseguido.

Un Método Simple Para Visualizar Las Proteínas Recalcitrantes En La Superficie Del Bacteriófago Lambda

Nucleic Acids Research. 2005  |  Pubmed ID: 16224099

Bacteriófago lambda (lambda) permite la visualización de muchos extranjeros péptidos y proteínas en la proteína de la cápsida principales de gpD. Sin embargo, algunos derivados recombinantes del gpD son incompatibles con el conjunto de partículas del fago estable. Esto presenta una limitación a los actuales sistemas de visualización de la lambda. Aquí describimos un sistema de expresión de la novela, basada en el plásmido en que gpD lysogens lambda deficiente pueden ser co-complemented con formas de tipo natural y recombinantes de gpD. Este sistema de expresión dual permite la generación de mosaico partículas de fagos que contienen otra manera recalcitrante gpD recombinantes proteínas de fusión. En general, este sistema de visualización mejorada gpD se espera para permitir la expresión de una amplia variedad de péptidos y proteínas en la superficie del bacteriófago lambda y facilitar el uso de vectores de Fago lambda modificado en aplicaciones de transferencia de genes mamíferos.

Interferencia Selectiva Con El Uso De Imágenes Visuales En El Paradigma De Distancia Simbólica

Journal of Experimental Psychology. Learning, Memory, and Cognition. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16248750

Ocho experimentos investigan los efectos de interferencia visual, espacial, auditiva y Ejecutivo en la comparación simbólica de animal tamaño y ferocidad, bondad semántica de palabras y números. Ruido visual dinámico (DVN) y la lectura de visualmente presentan estímulo artículos fueron demostrados para interferir selectivamente con tiempos de respuesta en la tarea de comparación del tamaño del animal, aunque la pendiente de la función simbólica de la distancia se mantuvo sin cambios. Mayor cambio de DVN aumentó significativamente la interferencia, pero la interferencia se redujo en equiluminant DVN. Seguimiento espacial reduce la pendiente de la función de la distancia simbólica en contraste con una tarea Ejecutiva que sólo aumento de latencia media y errores para todas las comparaciones. Resultados sugieren que la generación de una imagen es necesaria para la comparación de tamaño, función ni imágenes ni ejecutivo es responsable de la función de distancia-tiempo con frecuencia observada.

Las Células Dendríticas Humanas Transducidas Con El Herpes Virus Simple Amplicones Codificación Virus De Inmunodeficiencia Humana Tipo 1 (VIH-1) Gp120 Elicit La Respuesta Inmune Adaptativa De Las Células Humanas Injertadas En Ratones NOD / SCID Y Conferir Una Protección Parcial Contra El VIH-1 Challenge

Journal of Virology. Feb, 2005  |  Pubmed ID: 15681415

Pequeños animales que se necesitan modelos para probar el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) eficacia de la vacuna después del desafío viral. Con este fin, hemos examinado el VIH-1-respuesta inmune específica después de la inmunización de los no obesos diabéticos severos ratones inmunodeficientes combinados que fueron repoblados con linfocitos humanos de sangre periférica (ratones hu-PBL-NOD/SCID). Células dendríticas autólogas (CC) fueron transducidas ex vivo con replicación defectuosa, ayudante libres de virus, virus herpes simple tipo 1 (VHS-1) amplicones que expresaban el VIH-1 gp120 y se inyectaron luego en el hu-PBL-NOD/SCID ratones. Esto dio como resultado en la enseñanza primaria del VIH-1-respuesta inmune específica humoral y celular. Las muestras de suero procedentes de animales vacunados contenida inmunoglobulina G humana que hace reaccionar con VIH-1 proteínas Env por enzima-linked immunosorbent assay y se neutralizó la infectividad del VIH-1 IAF y cepas de ADA. Las células T aisladas de los ratones respondieron a los antígenos virales mediante la producción de interferón gamma cuando se analizó mediante el ensayo inmunoenzimático ligado a enzimas. Es importante destacar que la exposición de los animales vacunados con infecciosa del VIH-1 ha demostrado una protección parcial contra el VIH-1 infeccioso desafío. Esto se reflejó en una reducción en el VIH-1 (ADA) y por la protección de las células CD4 injertados humanos (+) linfocitos T contra el VIH-1 (LAI), la citotoxicidad inducida. Estos datos demuestran que la transducción de la DC a través de vectores que expresan HSV amplificación del VIH-1 gp120 del virus induce una respuesta inmunitaria específica en ratones hu-PBL-NOD/SCID. Este modelo de ratón puede ser una herramienta útil para evaluar las respuestas inmunes y la protección contra la vacunación viral después de la infección.

Ácido Valproico Mejora La Expresión Génica De Vectores De Transferencia Génica Viral

Journal of Virological Methods. Apr, 2005  |  Pubmed ID: 15737413

Vectores virales representan un método de entrega eficiente transferencia de genes in vitro e in vivo, y su utilidad puede ser reforzada mediante el uso de agentes farmacológicos que aumentan la expresión génica. Aquí, demostramos que el ácido valproico (VPA), un medicamento que se utiliza ampliamente para el tratamiento de trastornos de la epilepsia y el estado de ánimo, mejora y prolonga la expresión de genes exógenos en células transduced con diversos agentes de transferencia de genes, como adenovirus, virus adeno-asociado y vectores de herpesvirus. Este efecto se produce en una amplia gama de tipos de células, incluyendo células primarias y líneas celulares y parece estar asociado con la habilidad de VPA para funcionar como un inhibidor de la deacetilasa de histona (HDACi). Tratamiento de VPA también mejorado vectorizadas adenovirally la expresión de un gen reportero de luciferasa en ratones, según lo demostrado por la proyección de imagen in vivo. VPA también fue menos citotóxico que un inhibidor de HDAC utilizado, TSA, lo que sugiere su uso como una alternativa más segura. Tomados juntos, estos resultados sugieren que el tratamiento de VPA puede representar un enfoque útil para diversos enfoques de transferencia génica en que expresión del transgén mejorada es deseable.

Frente a Efectos De Litio Y ácido Valproico En Activación De Factor Trófico Inducida Por La Deprivación De La Glucógeno Sintasa Quinasa-3, La Expresión De C-Jun Y La Muerte De Células Neuronales

Neuropharmacology. Mar, 2005  |  Pubmed ID: 15755485

Estudios recientes demuestran litio y ácido valproico (VPA), dos fármacos utilizados de ánimo, tienen efectos neuroprotectores contra una variedad de insultos. Inhibición de la enzima proapoptóticas, glucógeno sintasa quinasa-3 (GSK-3), se ha sugerido que el mecanismo de acción de neuroprotección para ambos fármacos. En este estudio, hemos probado si litio y VPA pudieran proteger las neuronas cultivadas gránulo cerebeloso (CGNs) de la apoptosis mediada por GSK-3 inducida por retirada de factor trófico (privación de suero/potasio). Tanto el litio y el indirubina, un inhibidor específico de GSK-3, protegen CGNs en forma dosis dependiente. Por el contrario, VPA no presentó ninguna neuroprotección y potenciada incluso muerte celular. Immunoblot análisis reveló que el litio inhibe la activación inducida por la deprivación de factor trófico de GSK-3, así como la fosforilación in vivo de la proteína asociada a microtúbulos Tau en Ser199, un sitio de destino específico para GSK-3. Bajo estas mismas condiciones experimentales, sin embargo, VPA ni inhibe la activación de GSK-3 ni obstaculizado GSK-3 mediada por la fosforilación de la Tau. Además, según sus efectos sobre la supervivencia neuronal, litio previene la inducción de la expresión de c-Jun en CGNs factor privación tróficas, mientras que VPA había potenciada lo. Colectivamente, estos resultados demuestran que VPA no es un inhibidor universal de GSK-3 neuronal, y que en vez de ser neuroprotector, VPA incluso puede exacerbar la muerte neuronal en ciertas condiciones.

VIH-1 Transactivador De La Proteína De Transcripción Induce Hiperpolarización Mitocondrial Y El Estrés Synaptic Conducen a La Apoptosis

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Apr, 2005  |  Pubmed ID: 15778398

A pesar de la eficacia de la terapia antirretroviral de alta eficacia en la reducción de la carga viral, una enfermedad neurológica asociada con infección VIH-1 de la CNS no ha disminuido la prevalencia. VIH-1 no induce la enfermedad por infección directa de las neuronas, aunque los datos sugieren que extensos intra-CNS carga viral se correlaciona tanto con la severidad de la enfermedad inducida viralmente neurológica, y con la generación de metabolitos neurotóxicos. Muchas de estas moléculas son capaces de inducir la apoptosis neuronal in vitro, pero la apoptosis neuronal in vivo no se correlaciona con trastornos del SNC, lo que nos impulsa a investigar los eventos celulares y sinápticas que se producen antes de la muerte de células que pueden contribuir al VIH-1 asociada a la enfermedad neurológica. Ahora informan que el VIH-1 proteína reguladora de la proteína transactivadora transcripción (Tat) el aumento del estrés oxidativo, los niveles de ATP, y el potencial de membrana mitocondrial en las neuronas corticales de roedores primarios. Además, un metabolito celular proinflamatoria hasta reguladas por Tat, factor activador de plaquetas, también inducida por el estrés oxidativo y la hiperpolarización mitocondrial en las neuronas, lo que sugiere que este tipo de disfunción metabólica puede producirse de forma crónica durante la infección VIH-1 del SNC. Tat-inducida por hiperpolarización mitocondrial podría ser bloqueado con una dosis baja del CFPC protonophore, o el antagonista de los KATP mitocondrial canal, tolbutamida. Es importante destacar que el bloqueo de la hiperpolarización mitocondrial atenuada Tat inducida por la apoptosis neuronal, lo que sugiere que el potencial de aumento de la membrana mitocondrial puede ser un hecho causante en la precipitación de la apoptosis neuronal en cultivo celular. Por último, el factor activador de plaquetas y Tat-también aumentó la liberación vesicular neuronal, que puede estar relacionado con el aumento de la bioenergética mitocondrial y servir como un biomarcador de daño temprano a las neuronas.

Carácter Distintivo, Tipicidad Y Recollective Experiencia En Reconocimiento De La Cara: Un Análisis De Componentes Principales

Psychonomic Bulletin & Review. Dec, 2005  |  Pubmed ID: 16615324

En este estudio, los participantes clasificación caras nunca antes vistos en seis dimensiones: familiaridad, carácter distintivo, atractivo, impresionantes, tipicidad y parecido a una persona familiar. Las caras se presentaron entonces otra vez en una prueba de reconocimiento en el que los participantes asignados a sus decisiones de reconocimiento positivo a recordar (R), saber (K) o categorías de adivinar. En todas las dimensiones excepto la tipicidad, rostros que se clasificaron como respuestas R se asociaron con niveles significativamente más altos que eran caras categorizados como respuestas de K. La clasificación de estudio para las respuestas R y K luego se sometieron a un análisis de componentes principales. Las cargas de factor sugirieron que respuestas R fueron influenciadas principalmente por el carácter distintivo de caras, pero las respuestas de K fueron influenciadas por calificaciones moderadas en las seis dimensiones. Estos resultados indican que las características estructurales de un rostro influyen en la experiencia subjetiva del reconocimiento.

La Inhibición De La Quinasa 3 Mixto Lineage Evita Que El VIH-1 Mediada Por Tat-Neurotoxicidad Y Activación De Los Monocitos

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Jul, 2006  |  Pubmed ID: 16785569

El VIH-1 gen productos Tat y gp120 son tóxicos para las neuronas y puede activar las células de origen mieloide, las propiedades que se cree que contribuyen a las manifestaciones clínicas de VIH-1 asociada a la demencia (HAD). Para investigar los mecanismos de señalización intracelular que participan en estos eventos, el efecto de Tat y gp120 de la quinasa de linaje mixto (MLK) 3, se examinó la activación. Tat y gp120 se demostrado que induce la autofosforilación de MLK3 en las neuronas primarios de rata, lo que fue suprimido mediante la adición de un inhibidor de MLK3 (CEP1347). CEP1347 supervivencia también mejorada de rata y humanos neuronas e inhibe la activación de monocitos humanos después de la exposición a Tat y gp120. Además, la sobreexpresión de tipo salvaje MLK3 condujo a la inducción de la muerte neuronal, mientras que la expresión de un dominante negativo MLK3 neuronas mutantes protegidos de los efectos tóxicos de Tat. MLK3 dependientes de señalización en los eventos se vieron implicados en las vías neuroprotectoras y monocitos desactivar-provocados por CEP1347. Por lo tanto, la inhibición de p38 MAPK y JNK protegidos neuronas de la apoptosis inducida por Tat-, mientras que la inhibición de p38 MAPK, pero no de JNK, fue suficiente para evitar la activación de Tat y gp120 mediada de los monocitos. Estos resultados sugieren que la función normal de MLK3 se ve comprometida por VIH-1 (Tat neurotoxinas, gp120), resultando en la activación de eventos aguas abajo de señalización que resultan en la muerte neuronal y la activación de monocitos (con la liberación de citoquinas inflamatorias). En conjunto, nuestros datos definen MLK3 como una prometedora diana terapéutica para la intervención en HAD.

Amplicones Como Vectores De Vacunas

Current Gene Therapy. Jun, 2006  |  Pubmed ID: 16787189

Vectores de HSV-1 amplicon eficientemente transducen cultivadas células presentadoras de antígeno (APC), incluyendo tanto las células dendríticas humanas y murinas así como las células de B de primaria humana leucemia linfocítica crónica (CLL). Libre de ayudante amplicones han demostrado ser especialmente adecuado para ello, ya que no afecten negativamente a las funciones de antígeno-presentación de estas células diana. In vivo, vectores de amplicones se han utilizado en estudios preclínicos, destinados al desarrollo de vacunas contra el cáncer terapéuticas, así como vacunas para la enfermedad de Alzheimer y patógenos seleccionados microbianos. Estudios en sistemas modelo de animales pequeños han demostrado que ex vivo transducción de las células del tumor irradiado con vectores de amplicon codificación inmunomoduladores citoquinas como IL-2 o GM-CSF puede provocar respuestas protectoras contra el desafío de un tumor. En un modelo experimental de inmunoterapia del cáncer, transducción directo de tumores preformados con vectores codificación CD40L dio lugar a crecimiento lento del tumor o erradicación del tumor. Otros estudios han analizado la capacidad de amplicones para provocar la respuesta inmune contra antígenos codificados y han demostrado que pueden generarse fuerte la respuesta inmune celular contra los antígenos del VIH-1 de amplicon codificado en ratones. Así, vectores de amplicon han demostrado significativo como vectores de la vacuna en una variedad de entornos. Estos resultados iniciales prometedores destacan la necesidad de realizar estudios adicionales, incluidos los experimentos para evaluar la inmunogenicidad de amplicon vectores en modelos animales adicionales, posiblemente incluyendo a primates no humanos. En general, vectores de amplicon ofrecen ventajas atractivas en comparación con otras plataformas de entrega de la vacuna, que incluyen la capacidad para incorporar una carga muy grande del transgen y el potencial de transducir eficientemente superficies de la mucosa. Será importante diseñar estudios futuros directamente probar y explotar estas características del sistema amplicones. Por lo tanto, los próximos años prometen ser un período emocionante e importante en el desarrollo de amplicones como vectores de vacunas.

Virus De Inmunodeficiencia Humana-codificada Activa Tat Glucógeno Sintasa Quinasa-3beta Para Antagonizar El Factor Nuclear-kappaB Vía De Supervivencia De Las Neuronas

The European Journal of Neuroscience. May, 2006  |  Pubmed ID: 16817865

La patogénesis del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) asociada a la demencia está mediada por la disfunción neuronal y la muerte, provocada por la acción de factores neurotóxicos solubles que son liberados por los macrófagos infectados con virus y microglia. Paradójicamente, muchos candidatos del VIH-1 neurotoxinas también poseen la capacidad de activar el factor nuclear kappa B (NF-kappaB), que tiene un potente efecto de pro-supervivencia de las neuronas primarias. El presente estudio exploró este enigma e investigado por NF-kappaB puede fallar para proteger a las neuronas que están expuestos a candidatos VIH-1 neurotoxinas. En este sentido, se evaluó la capacidad del virus de la depleción de medio condicionado producido por el VIH-1-infected macrófagos humanos (VIH-MCM) para modular la actividad de NF-kappaB en las neuronas. Hemos demostrado que el VIH-MCM inhibir los mecanismos normales de señalización que conducen a la activación de NF-kappaB en las neuronas. Este efecto inhibidor del VIH-MCM es dependiente de la presencia de VIH-1 Tat, que activa la glucógeno sintasa quinasa (GSK)-3beta en las neuronas. La activación de GSK-3beta, a su vez, da lugar a la modificación de la rela subunidad de NF-kappaB en la serina 468, con lo que la regulación de la interacción física de RelA con la histona deacetilasa moléculas-3 correpresores. Por otra parte, la neutralización de Tat o la inhibición de la GSK-3beta la actividad previene la apoptosis neuronal inducida por el VIH-MCM. Llegamos a la conclusión de que el VIH-1 Tat puede comprometer la función neuronal y el destino al interferir con vías de supervivencia normales favorecidos por NF-kappaB. Estos hallazgos pueden tener importantes implicaciones terapéuticas para el tratamiento del VIH-1 asociada a la demencia.

Disociar La Frecuencia De La Palabra Y La Edad De Adquisición: Klein El Efecto Revivió (e Invertida)

Journal of Experimental Psychology. Learning, Memory, and Cognition. Jul, 2006  |  Pubmed ID: 16822157

El efecto de Klein (G. S. Klein, 1964) se refiere a la conclusión de que las palabras de alta frecuencia producen una mayor interferencia en una tarea de color-nombrar que las palabras de baja frecuencia. El presente estudio utiliza el efecto de Klein para investigar la relación entre la frecuencia y la edad de adquisición (AoA) midiendo su influencia de color de nombres. Dos experimentos mostraron efectos confiables de frecuencia (aunque en sentido contrario a lo reportado por Klein) pero sin efectos del acuerdo sobre agricultura. Experimento 1 produce una disociación entre la frecuencia y AoA cuando manipula ortogonalmente. Experimento 2 había producido la disociación misma utilizando diferentes estímulos. Por el contrario, ambas variables confiablemente habían influenciado palabra nombrando. Estos resultados no concuerdan con la opinión de que la frecuencia y AoA son 2 aspectos de un único mecanismo subyacente.

Características Y Adquisición De Herpesvirus Humano (HHV) 7 Infecciones En Relación Con La Infección Por HHV-6

The Journal of Infectious Diseases. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 16544246

Aunque son ubicuas tanto herpesvirus humano (HHV) 6 y HHV-7 infecciones durante la infancia, se identifican algunas infecciones agudas del HHV-7. Se desconoce si la viremia HHV-7 indica infección primaria, como con HHV-6, o reactivación, y si éstos diferencian clínicamente. Estudiamos, en niños sanos < o = 10 años de edad, infecciones HHV-7 y HHV-6 y su interacción por Evaluación serológica, aislamiento viral y reacción en cadena de polimerasa. En los niños < o = 24 meses de edad, HHV-7 infecciones ocurrieron con menos frecuencia que las infecciones con HHV-6 (P < o =. 002). 2806 Muestras de niños 2365 < o = 10 años de edad, 30 (1%) demostró evidencia de la viremia de HHV-7; 23 (77%) de estos fueron primaria y 7 (23%) fueron infecciones reactivadas HHV-7. Cuatro (13%) mostraron viremia concurrente de HHV-6, 2 asociada a infecciones primarias del HHV-7. Las manifestaciones clínicas de la primarias y reactivadas HHV-7 infecciones fueron similares, excepto que los ataques ocurrieron más frecuentemente en reactivaron infecciones. Estos resultados, previamente desconocidos en niños sanos, sugieren que la viremia HHV-7 podría representar principal o reactiva la infección y puede verse afectado por la interacción de HHV-6 y HHV-7.

Vectores Lentivirales Defectuosas Basadas En VIH-1 Eficientemente Transducen Macrófagos Derivados De Monocitos Humanos Y Suprimen La Replicación Del VIH-1 De Tipo Salvaje

The Journal of Gene Medicine. Jan, 2006  |  Pubmed ID: 16142830

Monocitos humanos jugar un papel importante en la mediación de virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) infección del sistema nervioso central (CNS) y macrófagos derivados de monocitos (MDM) representan un importante reservorio viral dentro del cerebro y otros órganos. Transducción de gene actual de MDM es obstaculizado por una eficacia limitada. En este estudio hemos establecido una técnica basadas en vectores lentivirales mejor transferencia de genes en las culturas MDM humanas in vitro y protección significativa demostrada de transduced MDM de super-infection con salvaje-tipo HIV-1.

Adenovirus Recombinantes Tipo 5 Vectores Dirigidos a DC-SIGN, ChemR23 Y Alfa (v) Integrina Beta3 Eficientemente Transducir Células Dendríticas Humanas Y Mejorar La Presentación De Los Antígenos Virales

Vaccine. Jan, 2006  |  Pubmed ID: 16154247

Adenovirus recombinantes (rAds) representan un sistema prometedor para la entrega de la vacuna pero transducen células dendríticas (DC) relativamente mal. Para abordar esta preocupación, utilizamos un acoplamiento de avidina-biotina conjugar vectores rAd a ligandos que se unen con alta afinidad a los receptores seleccionados en DC (ChemR23, alfa integrina beta3 de (v) y DC-SIGN). Los vectores específicos tenían una capacidad mejorada para transducir DC de derivados de monocitos humano comparado con virus no focalizados. Además, DC transduced con vectores rAd específicas fueron más eficientes en estimular producción de citoquinas por células T CD8 + de memoria autólogo, contra un antígeno de vector-codificado. Estos resultados amplían la gama de receptores de superficie celular que puede utilizarse para vectores rAd5 objetivo DC y puede facilitar el desarrollo futuro de las vacunas basadas en rAd.

Medición De La Velocidad De Los Componentes Conscientes De La Memoria De Reconocimiento: La Memoria Es Más Rápido Que El Saber

Consciousness and Cognition. Mar, 2006  |  Pubmed ID: 16019226

Respuesta de experimentos investigados tres veces (RTs) para recordar y saber las respuestas en la memoria de reconocimiento. RTs para recordar las respuestas eran más rápidas que RTs saber las respuestas, independientemente de si el acuerdo-sabe la decisión estuvo precedida por una vieja/nueva decisión (procedimiento de dos etapas) o se hizo sin una decisión anterior de vieja/nueva (procedimiento de un solo paso). El hallazgo de RTs más rápidos las respuestas R también fue encontrado cuando Recuerde-sabe tomaron decisiones retrospectivamente. Estos resultados concuerdan con modelos de doble-proceso de la memoria de reconocimiento, que predicen que el recuerdo es más lento y más effortful de familiaridad. Frecuencia de la palabra no influyó en RTs, pero recuerde las respuestas fueron más rápido para las palabras que para nonwords. Sostenemos que la diferencia en RTs para recordar y saber las respuestas refleja el tiempo necesario para tomar decisiones viejo/nuevo en función del tipo de información activa en la prueba.

Transducción Mejorada De Las Células Dendríticas Por Vectores Adenovirus Dirigidos a FcgammaRI

The Journal of Gene Medicine. Dec, 2007  |  Pubmed ID: 17966114

El receptor de alta afinidad Fcgamma me (FcgammaRI; también conocido como CD64) se expresa por células dendríticas (DC) y dirigidos a este receptor de antígenos provocan mayor respuesta inmune. Este estudio fue diseñado para probar la hipótesis de que a un vector adenoviral (Ad) FcgammaRI conduciría a la transducción mejorada de DC y una mejor respuesta inmune a los antígenos codificados en vector.

Glucógeno Sintasa Quinasa 3 Beta (GSK-3 Beta) Como Diana Terapéutica En El NeuroSIDA

Journal of Neuroimmune Pharmacology : the Official Journal of the Society on NeuroImmune Pharmacology. Mar, 2007  |  Pubmed ID: 18040831

La terapia antirretroviral altamente activa (HAART) ha hecho un impacto significativo en las vidas de las personas que viven con el VIH-1. La incidencia de la enfermedad neurológica asociada con infección VIH-1 del sistema nervioso central se desplomó entre 1996-2000, pero por desgracia el número de personas actualmente infectadas por el VIH-1 (es decir, la prevalencia) con deterioro cognitivo asociado ha ido en aumento. Aunque las razones de esto puede ser multifactorial, la implicación es clara: hay una necesidad apremiante para la terapia adyuvante dirigida a revertir o prevenir el daño a las vías vulnerables en el sistema nervioso central (SNC) de la infección VIH-1. El uso de un equipo de investigadores preclínicos y clínicos, nos hemos centrado nuestros esfuerzos en la definición de cómo los mediadores proinflamatorios y neurotoxinas de secreción por el VIH-1 perturbar la señalización de la enzima que regula la supervivencia, la glucógeno sintasa quinasa 3 beta (GSK-3beta). En una serie de estudios iniciados con in vitro, a continuación, en modelos in vivo de VIH-1 asociada a la demencia (HAD), hemos demostrado la capacidad de los estabilizadores del humor y de la droga anticonvulsiva, valproato sódico (VPA), que inhibe la actividad de GSK-3beta y otros mediadores de aguas abajo, a la inversa del VIH-1 inducida por el daño a las vías sinápticas en el SNC. Con base en estos resultados, se realizó con éxito en ensayos farmacocinéticos y de seguridad y tolerabilidad con VPA en una cohorte de VIH-1-pacientes infectados con la enfermedad neurológica. VPA fue bien tolerado en esta población y las medidas secundarias del metabolismo cerebral, como se evidencia por un aumento en la N-acetil aspartato / creatina (NAA / Cr), sugirió, además, que el VPA pueden mejorar la integridad de la materia gris en regiones del cerebro dañadas por el VIH-1. Estos resultados destacan el potencial terapéutico de la GSK-3beta bloqueo.

Los Efectos De La Atención Dividida En Estudiar Y Probar Sobre El Falso Reconocimiento: Una Comparación De DRM Y Las Listas De Categorías

Memory & Cognition. Dec, 2007  |  Pubmed ID: 18265611

Tres experimentos investigan los efectos de la atención dividida en la codificación y recuperación en falso reconocimiento. En el experimento 1, los participantes estudiaron listas de palabras en cualquiera de los dos condiciones de atención completa o dividida (generación de números aleatorios) y luego participaron en una prueba de reconocimiento con toda atención. En el experimento 2, después de estudiar las listas de palabras con toda atención, los participantes llevó a cabo una prueba de reconocimiento con atención completa o dividida. 3 Atención manipulada en tanto estudio de experimentar y probar. También compararon Deese/Roediger-McDermott (DRM) y categorizar las listas, debido a demandas recientes en relación con el lugar geométrico de recuerdos falsos producidos por dichas listas (Smith, Gerkens, Pierce & Choi, 2002). Con ambos tipos de lista, respuestas falsas "recordar" se redujo en atención dividida en codificación y aumentó atención dividida en recuperación. Los resultados sugieren que la producción de recuerdos falsos se produce como resultado de la generación de asociados en la codificación y los fracasos de monitoreo de la recuperación de la fuente. Crucial, esto es cierto para DRM y las listas de categorías.

Efecto De La Fuerza Del Promotor En La Expresión De La Proteína Y La Inmunogenicidad De Un Vector De Amplicones De HSV-1 Codificación HIV-1 Gag

Vaccine. Feb, 2007  |  Pubmed ID: 17145123

Vectores de libre de ayudante herpes simplex virus tipo 1 (HSV-1) amplicon provocan robustos inmunorespuestas a proteínas codificadas, incluyendo antígenos de virus de inmunodeficiencia humana tipo-1 (VIH-1). Para mejorar esta vacuna entrega sistema, siete amplicon vectores se construyeron, cada codificación HIV-1 Gag bajo el control de un promotor diferente. Se analizaron los niveles de expresión de mordaza en líneas celulares murinas y humanas, así como en muestras de tejido hecho una biopsia de los ratones inyectados; Estos datos fueron entonces comparados con respuestas de células T de Gag-específicas en ratones BALB/c. La magnitud de la respuesta inmune inducida por amplicon se encontró que correlacionan fuertemente con el nivel de producción de Gag tanto in vitro como in vivo. Curiosamente, la mejor correlación de la fuerza de la respuesta inmune inducida por amplicon era expresión del antígeno en DC cultivada en lugar de expresión en el sitio de tejido de inyección o en líneas celulares cultivadas. Estos resultados pueden tener implicaciones para la generación de vectores de amplicones de HSV-1 mejorados para la entrega de vacunas del VIH-1.

Infección Del Virus De Inmunodeficiencia Humana Y De La Proteína Tat Viral Intracelular Ejerciendo Un Efecto Pro-supervivencia En Una Línea De Células Microgliales Humana

Journal of Molecular Biology. Feb, 2007  |  Pubmed ID: 17157319

La interacción del virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) con los linfocitos T CD4 + es bien estudiada y típicamente produce citólisis inducida por virus. Por el contrario, relativamente poco se sabe sobre la interacción entre el VIH-1 y microglia. Hallazgos recientes sugieren que, intuitivamente, infección por VIH-1 puede extender la vida útil de la microglía. Hemos desarrollado un sistema de modelo de línea de novela celular para confirmar y mecánico estudiar este fenómeno. Encontramos transducción de una línea de células microgliales humano con un resultado de vector de VIH-1 en un efecto citoprotector potente tras desafío apoptótica. Este efecto fue reproducida por la expresión ectópica de una sola proteína codificada por el virus, Tat. Estudios posteriores demostraron que los efectos Pro-supervivencia de Tat intracelular podrían atribuirse a la activación de la PI-3-quinasa (PI3K) / camino de Akt en la microglía células. Además, encontramos que la expresión de Tat condujo a la expresión disminuida de PTEN, un regulador negativo de la vía de la PI-3-K. Consecuente con esto, actividad disminuida de la p53 y mayor actividad de E2F fueron observados. De acuerdo con estos resultados, ha sugerido un modelo de posibles circuitos regulatorios que infección intracelular de Tat y VIH-1 durante el evento de citoprotector microglia. Proponemos que la expresión de Tat puede permitir microglia infectados por VIH-1 sobrevivir a través del curso de la infección persistente producción de VIH-1 y la infección en el sistema nervioso central.

Virus De La Inmunodeficiencia Humana Tipo 1 Patobiología Estudió En Ratones Humanizados BALB/c-Rag2-/-gammac-/-

Journal of Virology. Mar, 2007  |  Pubmed ID: 17182671

La especificidad de tipo virus de inmunodeficiencia humana 1 (VIH-1) para las células humanas se opone a la infección por el virus en la mayoría de las especies de mamíferos y limita la utilidad de los modelos animales pequeños para estudios de patogénesis de la enfermedad, la terapia, y el desarrollo de vacunas. Una forma de superar esta limitación es por el xenotrasplante de células humanas en ratones inmunodeficientes. Sin embargo, esto ha resultado insuficiente, ya que el injerto de las células inmunológicas humanas es limitada (tanto funcional como cuantitativamente) después de un trasplante de linfocitos maduros humanos o el timo fetal o del hígado. Para este fin, un sistema inmunitario humano se generó a partir de sangre de cordón umbilical de derivados CD34 (+) las células madre hematopoyéticas en BALB/c-Rag2 (- / -) gamma (c) (- / -) ratones. Intraparto busulfán administración, seguida de la irradiación de los cachorros recién nacidos como resultado del injerto uniforme se caracteriza por células T humanas de desarrollo en el timo, las células B de maduración en la médula ósea, el desarrollo de los ganglios linfáticos, la inmunoglobulina M (IgM) / producción de IgG, y la respuesta inmune humoral tras ActHIB vacunación. La infección de ratones reconstituidos por correceptor CCR5-que utilizan el VIH-1 (ADA) y el subtipo C 1157 cepas de virus provocó la replicación viral y linfadenopatía productiva de una manera dosis-dependiente. Llegamos a la conclusión de que BALB/c-Rag2 humanizado (- / -) gamma (c) (- / -) ratones representan un recurso único y valioso para el VIH-1 en los estudios de patobiología.

Virus Del Papiloma Humanas Partículas Median Entrega Funcional De ADN Plásmido in Vivo De Células Presentadoras De Antígeno

Vaccine. Apr, 2007  |  Pubmed ID: 17293010

Porque la cápsida viral vacía recombinante es potencialmente atractivas vectores para terapia génica, aquí examinamos la capacidad del virus del papiloma humano (VPH) partículas de tipo virus (VLPs) para mediar la entrega y la expresión de plásmidos de ADN in vitro e in vivo. VLP-mediada de la entrega y la expresión de una construcción de reportero GFP in vitro fue encontrado para ser altamente dependiente de la presencia de proteína integral de L2 dentro de las VLPs. Del mismo modo, expresión de plásmidos reportero GFP y luciferasa en vivo fue fuertemente realzada por la administración concomitante de L1/L2 VLPs. curiosamente, en estos experimentos que rutinariamente observamos expresión de GFP en migrar antígeno que presentaba células (APC), recuperado de ratones inoculados con el plásmido de la GFP en combinación con VLPs, pero no en APC recuperado de ratones inoculados con el plásmido solo. Evidencia adicional para apoyar este concepto fue generado en experimentos en que co-administración de VLPs con un plásmido diseñado para expresar HPV16 E6 oncoproteína se asoció con realce significativo de plasmídico E6-específica celular inmunorespuestas. Estos resultados tienen implicaciones para el diseño de vacunas para la profilaxis combinada y terapia de enfermedades asociadas a VPH y para otras vacunas que dependen de la administración de inmunógenos basadas en ADN, coadyuvantes y otros factores.

Expresión Espacial Y Temporal De Virus Del Herpes Simple Tipo 1 Amplicon Codificados Genes: Implicaciones Para Su Uso Como Vectores De Inmunización

Human Gene Therapy. Feb, 2007  |  Pubmed ID: 17298238

Hay gran interés en el desarrollo de nuevos vectores de inmunización. Ayudante libre de virus herpes amplicones, vectores basadas en plásmidos que no codifican productos del gen viral y tienen una gran capacidad de codificación, son candidatos a vacuna viral atractivo para la expresión de proteínas recombinantes en vivo para la inmunización. Estudios anteriores en ratones, usando amplicones de codificación de la proteína gp120 del virus de inmunodeficiencia humana (VIH), dio lugar a la respuesta inmune celular sorprendentemente robusta según lo medido por análisis de enzima-ligado del immunospot de citotoxicidad e interferón gamma. Para empezar a entender cómo tal función de vectores en vivo para generar una respuesta inmune, utilizamos amplicones codificación reportero construye la proteína fluorescente verde (GFP) y luciferasa para examinar la duración de la expresión después de la administración a ratones. Expresión de la luciferasa, medida con el sistema IVIS de Xenogen/Caliper Life Sciences (Hopkinton, MA) y por ensayos enzimáticos del tejido extractos, reveló que la expresión después de la inyección de los amplicones de HSVluc alcanzó antes de 24 horas después de la inyección en ratones. Inyección de HSVegfp dio lugar a la acumulación de pico de GFP 24 horas después de la administración en vivo. Así, ambos genes reporteros revelaron un patrón de expresión algo rápido y robusto de corta duración. El corto período de expresión en parte parece deberse silenciamiento génico. Examen de las células transduced por amplicones codificación GFP y B7.1 humano sugiere que los amplicones transducen una variedad de células, incluyendo células presentadoras de antígeno profesionales. De esto y trabajos previos, concluimos que amplicones pueden generar una respuesta inmune potente por transducción directamente las células dendríticas, así como por reactividad cruzada de antígeno producido por otras transduced células hospedadoras.

La Sinergia Funcional Entre El Ligando CD40 Y Tat Del VIH-1 Contribuye a La Inflamación: Implicaciones En La Demencia De Tipo VIH-1

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Mar, 2007  |  Pubmed ID: 17312171

El VIH tipo 1 (VIH-1) asociada a la demencia (HAD) se cree que ocurre debido a la activación aberrante de macrófagos derivados de monocitos y el cerebro las células microgliales residentes de las proteínas virales, así como por los mediadores proinflamatorios liberados por las células infectadas. Para investigar los aspectos inflamatorios de la enfermedad, se examinaron los niveles de CD40L soluble (sCD40L) en muestras pareadas de líquido cefalorraquídeo de plasma y obtenidos a partir de 25 personas infectadas con VIH. Un nivel significativamente mayor de sCD40L se detectó tanto en el líquido cefalorraquídeo y el plasma de pacientes infectados por VIH con deterioro cognitivo, en comparación con sus homólogos nonimpaired. La contribución de sCD40L a la patogénesis de HAD se examinó a continuación por los experimentos in vitro. rCD40L sinergia con el VIH-1 Tat para aumentar el TNF-alfa liberación de los monocitos humanos primarios y microglia, en una forma de NF-kappaB-dependiente. La base mecánica de esta sinergia se atribuyó a una Tat-mediada por la regulación de CD40 en monocitos y microglía. Finalmente, el aumento CD40L mediada en la producción de TNF-alfa por los monocitos se demostró que era biológicamente importantes; experimentos inmunodepleción reveló que el TNF-alfa era esencial para los efectos neurotóxicos de medio condicionado se recuperó a partir de monocitos Tat/CD40L-treated. En conjunto, nuestros resultados muestran que la señalización de los CD40 en la microglía y los monocitos pueden crear sinergias con los efectos de los procesos de Tat, inflamatorias más amplificadores en el sistema nervioso central e influir en la supervivencia neuronal.

Un Método Manejable Para Modificaciones Simultáneas a La Cabeza Y La Cola Del Bacteriófago Lambda Y Su Aplicación Para Mejorar La Entrega De Genes Mediada Por Fago

Nucleic Acids Research. 2007  |  Pubmed ID: 17392341

Hay un gran interés en el uso de vectores bacteriófagos para solicitudes de transferencia de genes de células de mamífero, debido a su estabilidad, excelente perfil de seguridad y bajo costo de producción masiva. Sin embargo, hasta la fecha, vectores de Fago han estado plagados de mediocre desempeño como agentes de transferencia de genes. Esto puede reflejar la complejidad de los procesos de infección viral en células de mamífero y la necesidad de perfeccionar cada paso de este proceso para llegar a un sistema de transferencia del gen óptimas basadas en fago. Por lo tanto, se diseñó un sistema flexible que acepta para la introducción de varias modificaciones en la superficie del bacteriófago lambda. Usando este método novedoso, péptidos múltiples fueron exhibidas simultáneamente de la cabeza del fago y cola. Pantalla principal superficial de un motivo de ubiquitinylation había aumentado grandemente la eficiencia de transferencia de genes mediada por Fago en una línea celular de macrófagos murinos. Transferencia génica aumentó aún más cuando este péptido aparecía en combinación con un motivo de CD40-Unión de cola que aparecen. En general, esta obra ofrece un novedoso sistema que puede utilizarse para mejorar racionalmente vectores de transferencia génica bacteriófago y demuestra que es posible y mejorar la eficiencia de la transferencia génica mediada por Fago dirigidos a optimizar los múltiples pasos dentro de la vía de infección viral.

Contextos De La Historia Aumentan La Susceptibilidad a La Ilusión DRM En 5 Años

Developmental Science. May, 2007  |  Pubmed ID: 17444977

Falso reconocimiento en niños de 5, 8 y 11 años de edad fue investigada usando la versión estándar del procedimiento Deese-Roediger-McDermott (DRM) y una versión alternativa en la que los estímulos DRM fueron encajados en historias diseñados para enfatizar su tema general. Relativa a la 8 - y 11 años, el 5-años falsamente reconocieron menos Señuelos críticos cuando los estímulos DRM se presentaron en las listas, pero reconocieron falso Señuelos más críticos cuando los estímulos fueron presentados en historias. Niveles de reconocimiento falso en el 8 y 11-años de edad no fueron afectados por el formato de estudio. Sostenemos que el contexto de la historia mejora la capacidad de hacer inferencias basadas en el tema de los estímulos DRM de los 5 años de edad. Los 5 años de edad entonces mostraron altos niveles de reconocimiento falso que atraen a los niños mayores debido a su incapacidad para rechazar palabras consistentes con las historias.

Reintegro Effortful Operaciones De Codificación En Prueba Mejora La Memoria Episódica

Quarterly Journal of Experimental Psychology (2006). Apr, 2007  |  Pubmed ID: 17455065

Dos experimentos investigaron los efectos de restablecer las operaciones de codificación por recordar y saber las respuestas en la memoria de reconocimiento. El experimento 1 mostró que restablecer una tarea de codificación effortful (generación de palabras de fragmentos) aumentó Recuerde las respuestas en la prueba pero el restablecimiento de una tarea de codificación automática (leer palabras intactos) no. Este patrón fue confirmado en el experimento 2 en que palabras fueron leer intacto o generados a partir de anagramas. Estos resultados demuestran que operaciones de codificación effortful (pero no automático) en prueba de señales no sólo el reconocimiento de la información adquirida mediante esas operaciones, sino el recuerdo consciente del episodio codificación.

Infectividad De Vectores De Amplicon Herpes Simplex Virus Tipo 1 (HSV-1) En Células Dendríticas Se Determina Por La Cepa Del Virus Ayudante Destinada Al Envasado

Journal of Virological Methods. Oct, 2007  |  Pubmed ID: 17606303

Vectores de amplicones de herpes simplex virus tipo 1 (HSV-1) se están estudiando para una amplia gama de aplicaciones potenciales, incluyendo la entrega de vacunas e inmunoterapia del cáncer. Mientras que el gran esfuerzo ha sido dirigido hacia la mejora de los productos "carga útil" en estos vectores, relativamente que poca atención se ha prestado al efecto de las cepas de empaquetado HSV-1 en las propiedades biológicas de amplicon co-packaged vectores. Por lo tanto, comparamos las propiedades biológicas de las poblaciones de amplicon preparadas mediante un panel de primarios aislados de HSV-1, una cepa molecularmente clonado solía amplicones libre de ayudante del paquete (señalado aquí como F5) y dos cepas de laboratorio (KOS y cepa 17, que es el padre del clon F5). Este análisis reveló considerable variabilidad inter-strain en la capacidad de las poblaciones de amplicon empaquetado por diferentes aislados de HSV-1 primarios de transducir eficientemente las líneas celulares establecidas y células dendríticas humanas primarias (DC). Amplicones empaquetado por dos la F5 molecularmente clonaron virus y su padre adaptados al laboratorio (cepa 17) eran muy ineficientes en DC transductoras, comparado con amplicones envasados por KOS o por varios de los aislamientos de virus primario. Éstos que encuentran tienen implicaciones importantes para el futuro desarrollo de sistemas de administración de vacunas basadas en productos mejorados y sugieren que tropismo DC puede ser una propiedad intrínseca de algunas cepas de HSV-1, independientes de la historia de paso o clonación molecular.

Atención Dividida En Recuperación Perturba Saber Pero No Recordar

Memory (Hove, England). Aug, 2007  |  Pubmed ID: 17654280

Recientemente se ha cuestionado la visión que recordar y saber las respuestas pueden explicarse en el marco de un doble proceso (por ejemplo, Gardiner, Konstantinou, Karayianni & Gregg, 2005). Los objetivos del presente estudio fueron a investigar más discrepancias entre los estudios de recordar/saber (R/K) y modelos de proceso dual de la memoria de reconocimiento. En dos experimentos los participantes estaban obligados a tomar decisiones de R/K bajo condiciones de la atención plena y dividida y vieja/nueva. Experimento 1 utilizó un procedimiento de dos pasos R/K y mostró que la atención durante la recuperación redujo el rendimiento global de reconocimiento. Experimento 2 utilizó un procedimiento de un solo paso R/K y demostró que dividir la atención en recuperación afectaba únicamente a saber las respuestas, lo que sugiere que el saber pero no recuerdo se basa en procesos controlados de recuperación. Estos resultados y los resultados de investigaciones recientes evidencian que es incompatible con la explicación del doble proceso de investigación R/K.

El Efecto De La Atención Dividida En Memoria Falsa Depende De Cómo Se Prueba La Memoria

Memory & Cognition. Jun, 2007  |  Pubmed ID: 17848024

En tres experimentos, investigamos los efectos de la atención dividida en memoria falsa, utilizando el paradigma de Deese/Roediger-McDermott (DRM). En los experimentos 1 y 2, los participantes estudiados seis listas DRM con toda atención y seis en una de las dos condiciones de atención dividida (generación de números aleatorios o un dígito control). Ambas condiciones de atención dividida aumentaron falsa memoria de palabras relacionadas (experimento 1) pero reducción el falso reconocimiento (experimento 2). Estos resultados fueron confirmados en el experimento 3, en el que se manipuló el tipo de tarea secundaria dentro de los grupos. Sostenemos que el aumento de memoria falsa con atención dividida refleja un cambio en el criterio de respuesta de los participantes, mientras que la disminución en falso reconocimiento se produce porque las tareas secundarias impiden que los participantes generando asociados de las palabras que se presentó en el estudio.

Vectores De Amplicones De HSV-1 Provocan Polifuncional T Cell Responses to Env Del VIH-1 Y Aumentar Fuertemente Las Respuestas a Un Primer Adenovirus

Vaccine. Oct, 2007  |  Pubmed ID: 17868958

Vectores de HSV-1 amplicon provocan respuestas de células T fuertes a los antígenos codificados pero la naturaleza cualitativa de estas respuestas es mal entendida. Las respuestas de CD4 y CD8 T-cell antigen-specific amplicon y adenovirus (rAd5) vectores codificación gp120 del VIH-1 fueron evaluada tras la vacunación de los ratones, realizando citocinas intracelulares coloración para IFNgamma, IL2 y TNFalpha, después del estímulo de esplenocitos con una piscina de péptido Env del VIH-1. La calidad de la respuesta de células T primaria a vectores amplicon y rAd5 era llamativo similar, pero hubo diferencias cualitativas en respuestas a vectores de productos que incorporan diferentes promotores aguas arriba de la gp120 - sugiriendo que promotores puedan afectar significativamente la calidad de la respuesta inmune. Cuando estudiaron combinaciones de primer impulso, un impulso de prime y amplicon rAd5 generó la mayor respuesta de células T. Además, protocolos que incorporaron un primer rAd5 constantemente produce una mayor proporción de polifuncional CD4 T-células-independientemente de refuerzo. Esto sugiere que cebado inicial puede influenciar la calidad de la respuesta inmune después de un impulso. En general, estos resultados proporcionan información sobre combinaciones de vector eficaz para el desarrollo de vacunas del VIH-1.

El Efecto De La Administración De Glucosa Sobre Los Componentes De Recolección Y Familiaridad De La Memoria De Reconocimiento

Biological Psychology. Jan, 2008  |  Pubmed ID: 17950982

Investigaciones anteriores han demostrado que la administración de glucosa facilita el rendimiento de memoria a largo plazo. El objetivo de la presente investigación fue evaluar el efecto de la administración de glucosa sobre los diferentes componentes de memoria a largo plazo de reconocimiento. Cincuenta y seis individuos jóvenes sanos recibieron una bebida que contiene 25 g de glucosa o (b) una bebida placebo inerte. Componentes de recogimiento y familiaridad de la memoria de reconocimiento se midieron utilizando el paradigma de "recordar-sabe". Los resultados revelaron que la administración de glucosa condujo a una proporción significativamente mayor de las respuestas de reconocimiento basado en la recolección, pero no tuvo efecto sobre la proporción de las respuestas de reconocimiento a través de la detección de los participantes de la familiaridad del estímulo. En consecuencia, los datos sugieren que la administración de glucosa parece facilitar la memoria de reconocimiento que se acompaña de recolección de datos contextuales y riqueza episódica. Los resultados también sugieren que las tareas que resultan en altos niveles de actividad del hipocampo pueden ser más propensas a mejorarse mediante la administración de glucosa que tareas que son menos dependientes de las estructuras del lóbulo temporal medial de la memoria.

Ruido Visual Dinámica Interfiere Con Almacenamiento En Memoria De Trabajo Visual

Experimental Psychology. 2008  |  Pubmed ID: 18683625

Varios estudios han demostrado que el ruido visual dinámico (DVN) no interfiere con memoria para matrices aleatorias. Esto ha llevado a sugerir que memoria de trabajo (a) visual es distinto de imágenes y memoria de trabajo (b) visual no es una pasarela entre la entrada sensorial y almacenamiento a largo plazo. Una comparación de los efectos de interferencia de DVN con memoria para matrices y texturas colores muestra que DVN puede interferir con la memoria de trabajo visual, probablemente en un nivel de detalle visual no fácilmente el apoyo de estructuras de memoria a largo plazo o la recodificación de los elementos del patrón visual. Los resultados apoyan un modelo de pasarela de memoria de trabajo visuoespaciales y plantean algunas preguntas sobre las formas más adecuadas para medir y modelar los distintos niveles de representación de información que puede guardarse en la memoria de trabajo visual.

La Humana H5N1 Influenza A Virus Polimerasa Compleja Es Activa in Vitro Sobre Una Amplia Gama De Temperaturas, En Contraste Con El Complejo WSN, Y Esta Propiedad Se Puede Atribuir a La Subunidad PB2

The Journal of General Virology. Dec, 2008  |  Pubmed ID: 19008377

Virus de la gripe (IAV) replica en el tracto respiratorio de los seres humanos a 33 grados C y en el tracto intestinal de aves en cerca de 41 grados centígrados. El complejo de la polimerasa del RNA viral compone de tres subunidades (PA, PB1 y PB2) y desempeña un papel importante en la adaptación del anfitrión. Por lo tanto, hemos desarrollado un sistema in vitro para examinar la sensibilidad de la temperatura de complejos de IAV RNA polimerasa de distintos orígenes. Se prepararon complejos de células epiteliales del pulmón humano (A549) utilizando un sistema de expresión adenoviral novela. Complejos purificados por afinidad se generaron que contenía los tres subunidades (PA/PB1/PB2) del virus H5N1 A/Viet/1203/04 (H/H/H) o la cepa H1N1 A/WSN/33 (W/W/W). También preparamos quiméricas complejos en los que la subunidad PB2 fue intercambiado (H/H/W, W/W/H) o sustituido con un PB2 aviar de la cepa H3N2 A/pollo/Nanchang/3-120/01 (W/W/N). Los complejos eran funcionales en la transcripción, tapa-encuadernación y endonucleolítico actividad. Complejos que contienen la proteína H5N1 o Nanchang PB2 retuvo actividad transcripcional sobre una gama de temperaturas ancha (30-42 grados C). Por el contrario, complejos que contienen la proteína de WSN PB2 perdieron actividad a temperaturas elevadas (39 grados C o superior). La mutación E627K en el PB2 aviar no fue requerida para este efecto. Por último, la subunidad PB2 aviar fue demostrada para conferir mayor estabilidad a la WSN 3P complejo. Estos resultados demuestran que PB2 desempeña un papel importante en la regulación el óptimo de temperatura para la actividad de la polimerasa de RNA IAV, posiblemente debido a los efectos sobre la estabilidad funcional del complejo P 3.

VIH-1 Tat Activa Los Receptores De Rianodina Neuronales Con Una Rápida Inducción De La Respuesta a Proteínas Desplegadas Y La Hiperpolarización Mitocondrial

PloS One. 2008  |  Pubmed ID: 19009018

Enfermedad neurológica causada por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) es en última instancia, refractarios a la terapia antirretroviral altamente activa (HAART) debido al fracaso de la erradicación completa del virus en el sistema nervioso central (SNC), y la interrupción del normal acontecer de señalización neuronal de forma viral neuroinflamación inducida crónica. Hemos informado anteriormente que el VIH-1 Tat puede inducir hiperpolarización mitocondrial en las neuronas corticales, comprometiendo así la capacidad de la neurona para amortiguar el calcio y mantener la producción de energía para la comunicación sináptica normal. En este informe, demuestran que Tat induce una rápida pérdida de calcio a ER por el receptor de rianodina (RyR), seguida de la respuesta de la proteína desplegada (UPR) y la dilatación patológica de la sala de emergencias en las neuronas corticales in vitro. RyR antagonismo atenuado tanto Tat-mediada por hiperpolarización mitocondrial y la inducción de la UPR. Entrega de Tat a los sistemas CNS murinos in vivo también conduce a la larga duración de dilatación patológica ER y anomalías morfológicas mitocondriales. Por último, se realizó un estudio ultraestructural que demostraron las mitocondrias con una morfología anormal y dilatación de las pupilas retículo endoplásmico (RE) en el tejido cerebral de pacientes con VIH-1 la inflamación y neurodegeneración. En conjunto, estos datos sugieren que la media RyR anormales de señalización neuronal de la UPR con el fracaso del metabolismo energético mitocondrial, y es un lugar crítico para el neuropatogénesis del VIH-1 en el SNC.

Hinchazón Y Contracción Secuencial Subyacen En Muerte Y Exposición De Fosfatidilserina Linfocito P2X7-estimulado

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Jan, 2008  |  Pubmed ID: 18097031

Patrones de cambio en la distribución del fosfolípido de volumen y de la membrana plasmática de células durante la muerte celular se consideran medios de diagnóstico de distinguir la apoptosis de la necrosis, el primero que asociarse con la contracción de la célula y la exposición temprana de la fosfatidilserina (PS), mientras que la necrosis se asocia con lisis celular de hinchazón y consecuente. Demostramos que la regulación del volumen celular durante la muerte de linfocitos estimulada por los receptores purinérgicos P2X7 es distinto de ambos. Dentro de segundos de estimulación, linfocitos murinos someterse a concomitante con rápida contracción, pero también necesaria para, exposición de PS. Sin embargo, dentro de 2 minutos se invierte la contracción e hinchazón sobreviene termina en ruptura de la célula. La contracción inducida por P2X7 y desplazamiento de PS dependen de K + emanación via KCa3.1, pero utilizan una vía de Cl-emanación distinta previamente implicados en la apoptosis. Así, P2X7 estimulación activa un nuevo camino de muerte celular que no se ajusta a los convencionalmente asociados con la apoptosis y necrosis. El fenotipo apoptotic/necrótico mixto de células P2X7-estimulado es consistente con un papel potencial para esta vía de la muerte en la enfermedad de lupus.

FC Mejora Mediada Por Receptor, Dependiente De Los Anticuerpos Del Bacteriófago Lambda-mediated Gene Transferencia En Células De Mamíferos

Virology. Apr, 2008  |  Pubmed ID: 18191979

Lambda Fago vectores mediato gene transfer en células cultivadas de mamíferas y en ratones vivos e in vivo expresión génica mediada por Fago se incrementa cuando los ratones son preinmunizados con bacteriófago lambda. Mostramos ahora que, como virus eucariotas, vectores bacteriófagos sufren Fc mejora mediada por receptor, dependiente de los anticuerpos de la infección en células de mamíferos. Estimulación dependiente de los anticuerpos de transferencia de genes del fago necesaria FcgammaRI, pero no su asociado cadena gamma y no fue apoyada por otros miembros de la familia del FcgammaR (FcgammaRIIA, FcgammaRIIB y FcgammaRIII). Estudios con clorpromazina y LATRUNCULINA A revelaron un papel importante de endocitosis mediada por clatrina (clorpromazina) y filamentos de actina (LATRUNCULINA A) en la transferencia de genes del fago anticuerpo mejorada. Esto fue confirmada por experimentos con inhibidores de la acidificación endosomal (bafilomycin A1, monensina) y por immunocytochemical colocalización de partículas del fago interiorizado con principios endosome-associated protein-1 (EAA1). En cambio, agentes dirigidos a los microtúbulos (nocodazole, taxol) aumentaron la eficacia de transferencia de genes del fago anticuerpo mejorada. Estos resultados revelan un realce inesperado anticuerpo-dependiente, mediada por FcgammaRI de transducción del fago en células de mamíferos y sugieren nuevos enfoques para mejorar la transferencia de genes mediada por bacteriófagos.

Inhibidores De Akt Como Un HIV-1 Infectan Terapia Antiviral Macrófago-específica

Retrovirology. 2008  |  Pubmed ID: 18237430

A diferencia de las células CD4 + T, los macrófagos infectados por VIH-1 exhiben vida extendida sobre estrés, consistente con su rol en vivo como depósitos duraderos del VIH-1.

Reconocimiento De Colaboración Falso Y Verídico

Memory (Hove, England). Jan, 2009  |  Pubmed ID: 19058091

Los participantes estudiaron las listas de palabras DRM (Deese, 1959; Roediger & McDermott, 1995) y luego completó una prueba del reconocimiento individual o en un par de colaboración, trío, o Cuarteto. Las respuestas de los grupos colaborativos se compararon con los de grupos nominales tamaños equivalentes. SEÑUELO crítica no estudiado y reconocimiento de palabra estudiados aumentado con el tamaño del grupo y estos incrementos fueron mayores para los grupos colaborativos. Los grupos colaborativos Señuelos de críticas y tasas de reconocimiento de palabra estudiados fueron facilitadas como bajaban sus umbrales de criterio de respuesta a prueba todas las palabras relacionadas semánticamente a aquellos en las listas DRM. Colaboración previa también había mejorado más tarde Señuelos críticas individuales y estudió el reconocimiento de la palabra. Los miembros del grupo creían los señuelos de la críticos y estudiaron estudiadas palabras reconocidas en colaboración, y por lo tanto repitieron estos juicios cuando solo.

Inhibidores Del Proteosoma Derivados Mejoran Bacteriófago Lambda (lambda) Mediada Por La Transferencia De Genes En Células De Mamíferos

Virology. Feb, 2009  |  Pubmed ID: 19064273

Vectores de bacteriófago lambda pueden transferir sus genomas en células de mamíferos, dando por resultado la expresión de los genes codificados en fago. Sin embargo, este proceso es ineficaz. Por lo tanto, se realizaron experimentos para delinear las pasos involucrados, usando un vector de Fago que contiene un cassette de gen reportero de luciferasa mamíferos de limitación de la velocidad. La eficiencia de transferencia de genes mediada por Fago en células de mamífero fue cuantificada, en la presencia o ausencia de inhibidores farmacológicos de vías de absorción y degradación celular. Inhibidores de proteasas lisosomales e inhibidores del proteosoma derivados fuertemente mejoran expresión mediada por Fago luciferasa, sugiriendo que estas vías contribuyen a la destrucción de partículas de fagos intracelulares. Por el contrario, inhibición de la acidificación del endosoma no tenía ningún efecto sobre la transferencia de genes mediada por Fago, presumiblemente porque Fago lambda es tolerante a la exposición prolongada a pH bajo. Estos resultados proporcionan conocimientos sobre los caminos que Fago vectores entran transducen las células mamíferas y sugieren que es posible farmacológicamente, aumentar la eficiencia de transferencia de genes mediada por Fago en células de mamíferos. Finalmente, los datos también sugieren que el proteasoma complejo puede servir como un mecanismo de defensa natural que restringe la infección de células de mamífero por diversos agentes virales.

Recordar El Pasado E Imaginando El Futuro: Diferencias En La Especificidad Del Evento Del Pensamiento Generado Espontáneamente

Memory (Hove, England). May, 2009  |  Pubmed ID: 19235018

Ha surgido un creciente interés en el papel que juega la recuperación de la memoria autobiográfica en simulación de eventos futuros. Exploraciones cognitivas en este dominio generalmente han dependido de paradigmas de palabra de localización con instrucciones específicas (relativos a un día) de desarrollar memorias o acontecimientos futuros. Sin embargo, se ha cuestionado la utilidad de este paradigma con respecto a su capacidad para determinar los patrones habituales de recuperación de la memoria autobiográfica. El actual estudio investigó las similitudes y diferencias en cómo participantes espontáneamente recuerdan el pasado e imaginan el futuro cuando se eliminan las limitaciones de la especificidad inherentes al ejercicio de la palabra de localización. Un total de 93 estudiantes completó dos tareas de terminación de la oración, para pasado y futuros eventos. Surgieron una serie de diferencias entre pasado y futuro pensamiento; en particular, eran menos específicos simular eventos futuros en comparación con los eventos pasados. Esta reducción en la especificidad fue el resultado de los participantes produciendo más pensamientos futuros relativos a los períodos de vida extendida y asociados semánticas. Los resultados se discuten en relación con los procesos cognitivos subyacentes implicados en la recuperación de la memoria autobiográfica y simulación de eventos futuros.

Litio Terapia Para Virus De Inmunodeficiencia Humana Tipo 1 Asociada a Deterioro Neurocognitivo

Journal of Neurovirology. Apr, 2009  |  Pubmed ID: 19306230

El objetivo de este estudio fue evaluar la seguridad y la tolerabilidad de litio y explorar su impacto en la cognición, la función y los biomarcadores de neuroimagen en el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)-sujetos infectados con deterioro cognitivo. Quince deterioro cognitivo sujetos infectados con VIH se inscribieron en este de 10 semanas de estudio de etiqueta abierta de 300 mg de litio dos veces al día. La neuroimagen se realizó al inicio y tras 10 semanas de tratamiento e incluyeron espectroscopia de resonancia magnética (MRS), con tensor de difusión (DTI) y la resonancia magnética funcional (fMRI). Trece de los 14 sujetos (93%) que cumplieron con las visitas de estudio fueron capaces de completar el estudio sobre el litio y el 11 de 13 (79%) completaron el estudio con la dosis asignada originalmente de 300 mg dos veces al día. No hubo cambios significativos en las células CD4 (+) de linfocitos y el recuento de carga viral. El rendimiento cognitivo y el estado de ánimo depresivo no mejora de manera significativa después del tratamiento de litio de 10 semanas, sin embargo, la neuroimagen un descenso en el glutamato + glutamina (Glx) máximo en la materia gris frontal, el aumento de la anisotropía fraccional, y disminución de la difusión media en varias áreas del cerebro y cambios en los patrones de activación cerebral, lo que sugiere la mejora. Estos resultados sugieren que el litio puede ser utilizado con seguridad en pacientes infectados por VIH con deterioro cognitivo. Además, los resultados de neuroimagen sugieren que el litio puede mejorar la asociada al VIH del sistema nervioso central (SNC) la lesión, por lo que nuevas investigaciones de litio como tratamiento adyuvante para el VIH asociado a deterioro cognitivo están garantizados.

Evolución De Gen NEF De Una Sola Cepa Transmitida En La Infección Aguda Del SIV

Retrovirology. 2009  |  Pubmed ID: 19505314

La fase aguda de la infección del virus de inmunodeficiencia humana juega un papel crucial en la determinación de la carga del virus de estado estacionario y posterior progresión de la enfermedad en los seres humanos y primates no humanos. El período agudo es también el momento en que mediada por vacuna efectos sobre la inmunidad del anfitrión son capaces de ejercer sus efectos principales sobre la infección por el virus. Recientemente hemos desarrollado una simulación de Montecarlo (MC) con análisis matemático de la evolución viral durante la infección primaria del VIH-1 que permite la clasificación de nuevas infecciones por el VIH-1 origina múltiples versus solo transmisión cepas virales y la estimación del tiempo transcurrido después de la infección.

La Arquitectura Mecanicista De Termoestable Pyrococcus Furiosus Familia B ADN Polimerasa Motivo A Y Su Interacción Con El Sustrato De DNTP

Biochemistry. Dec, 2009  |  Pubmed ID: 19817489

Termoestables polimerasas de ADN aislados de archaeal organismos no han sido completamente caracterizadas cinéticamente y requieren un estudio más profundo si queremos entender tanto su mecanismo de enlace de dNTP y su papel dentro del organismo. Aquí, demostramos que la polimerasa termoestable de B ADN familiar de Pyrococcus furiosus (Pfu Pol) contiene sensibles determinantes de ambos Unión dNTP y fidelidad replicational dentro del adorno altamente conservado mutagénesis dirigida A. de la región de SYLP A motivo reveló que pequeños cambios en el volumen de cadena lateral como resultado cambios significativos en la afinidad de Unión dNTP, cinética de estado estacionario y fidelidad de la enzima. Mutantes de Y410 muestran alta fidelidad misincorporation ensayos tanto en ensayos de mutación hacia adelante, pero muestran una k substancialmente más alto que el tipo salvaje. En contraste, análisis de mutaciones de residuos aguas arriba L409 causar una afinidad drásticamente reducida para la correcta dNTP, una eficiencia mucho mayor de misincorporation y extensión de desajuste y substancialmente menor fidelidad según lo demostrado por una mutación hacia adelante basadas en PCR. El mutante A408S, sin embargo, muestra un aumento significativo en tanto dNTP afinidad y fidelidad. En Resumen, estos datos demuestran que modulación del motivo A puede cambiar considerablemente tanto la cinética de estado constante y pre-steady de la enzima, así como la fidelidad de Pfu Pol.

Actividades Neuroprotectores Del CEP-1347 En Los Modelos De NeuroSIDA

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Jan, 2010  |  Pubmed ID: 19966207

Cuando el sistema nervioso está infectado con el VIH-1, que normalmente lleva a la neuroinflamación que conduce a la disfunción neuronal y abierta posteriores deterioros cognitivos y de comportamiento. El proceso de la enfermedad de múltiples facetas, ahora se conoce como trastornos neurocognitivos del VIH-1-asociados (mano), ofrece una amplia gama de dianas moleculares para terapias complementarias. Uno de ellos es el PAC-1347, un inhibidor de las quinasas de linaje mixto que provoca respuestas neuroprotectoras y anti-inflamatorios en modelos de enfermedades neurodegenerativas. Desde MANO está asociado con la encefalopatía inflamatoria inducida por la infección del virus y los fagocitos mononucleares (macrófagos perivasculares y microglia) la activación inmunitaria, se investigó si el PAC-1347 puede mejorar la enfermedad en modelos de laboratorio de las manos. Ahora demuestran que la PAC-1347 reduce los niveles de citocinas proinflamatorias secretadas y quimiocinas en el VIH-1-macrófagos infectados humanos y atenúa la neurotoxicidad dependiente de la dosis en las neuronas corticales de roedores. CEP-1347-ratones tratados con facilidad alcanzar niveles terapéuticos de drogas en la sangre periférica. VIH-1 encefalitis (COLMENA), donde los ratones infectados con virus humanos derivados de los monocitos macrófagos son estereotácticamente inyectados en los ganglios basales del CB17 graves ratones inmunodeficientes combinados, recibieron una inyección intraperitoneal diaria de PAC-1347. En este sentido, el PAC-1347 el tratamiento de ratones COLMENA mostró una reducción dosis-dependiente en microgliosis. La integridad dendríticas y pérdida neuronal se mantuvieron e impidió, respectivamente. Estos resultados demuestran que el PAC-1347 provoca respuestas anti-inflamatorias y neuroprotector en un modelo de colmena de las enfermedades humanas y como el estudio de tales órdenes más como un tratamiento adyuvante para la enfermedad humana.

Deficiencia Mixta De Linaje Quinasa 3 Retrasa El Despacho Viral En El Pulmón Y Se Asocia Con Menor Efecto Citopático Inducido Por Gripe En Células Infectadas

Virology. May, 2010  |  Pubmed ID: 20185156

Virus de la influenza conduce a la enfermedad respiratoria aguda resultando en epidemias estacionales y de pandemias periódicas. Poco se sabe sobre los eventos de señalización que regulan la defensa del huésped a la gripe. Una vía particular, la cascada de la quinasa amino-terminal de c-Jun (JNK) es activado después de la infección de la gripe y bloqueo JNK conduce a mayor replicación viral. Presumimos que mezcla linaje quinasa 3 (MLK3), un regulador upstream de JNK, está implicado en la respuesta del huésped a la gripe. Para probar esto, tipo salvaje y MLK3-/-ratones estaban infectados con la cepa patógena del virus de influenza A, A/PR/8/34 (PR8). Aunque, respuesta inmune celular y humoral fueron similar entre salvaje y MLK3-/-hosts, la carga viral en los pulmones fue comparativamente mayor en MLK3-/-ratones en post-infección día 8. De acuerdo con esto, fibroblastos de pulmón de MLK3-/-murino células epiteliales supervivencia prolongada y aumento de la producción del virión infección siguiente en comparación con el tipo salvaje. Estos resultados apoyan un papel para MLK3 en producción viral durante la infección por influenza.

Modelación Matemática De Datos De Secuenciación Ultraprofunda Revela Que Agudas Respuestas De Linfocitos T CD8 + Ejercen Fuerte Presión Selectiva En Macacos Infectados Con Virus De Inmunodeficiencia De Los Simios, Pero Todavía No Claro Secuencias De Fundador Del Epítopo

Journal of Virology. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 20335256

El papel prominente de los antivirales CD8 T-linfocitos citotóxicos (CD8-TL) en la contención de la viremia aguda del virus de la inmunodeficiencia humana y simios (VIH-1 y SIV) ha racionalizado el desarrollo de vacunas basadas en T-célula. Sin embargo, la presencia de mutaciones de escape en la etapa aguda de la infección ha suscitado una preocupación que aceleró la fuga de inducida por la vacuna CD8-TL respuestas podrían debilitar la eficacia de la vacuna. Reanaliza datos previamente publicados de genomas virales 101.822 de tres epitopos de CD8-TL, Nef(103-111) RM9 (RM9), Tat (28-35) SL8 (SL8) y de la mordaza (181-189) CM9 (CM9), muestreados por Pirosecuenciación ultraprofunda de ocho macacos. Múltiples variantes del epítopo aparecieron durante la resolución de viremia aguda, seguida por el predominio de un solo epítope mutante. Instalando un modelo matemático, estimamos la primera tasa de fuga aguda como day(-1) 0.36 epitopos propensos a escapar, RM9 y SL8 y la tasa de fuga crónica como day(-1) 0.014 dentro el epitopo CM9. Nuestra estimación de las tasas de fuga aguda SIV fue encontrado para ser comparables a las tasas de fuga de VIH-1 muy tempranas. El momento de la primera fuga se correlacionó más altamente con la sincronización de la respuesta máxima de CD8-TL que con la magnitud de la respuesta de CD8-TL. El epitopo transmitido decayó más de 400 veces más rápido durante la etapa de decadencia viral aguda de lo previsto por un modelo de evolución neutral. Sin embargo, persistió el epitopo fundador como una menor población incluso en el punto de ajuste viral; en contraste, la mayoría de los epitopos de escape aguda se despejó totalmente. Nuestros resultados sugieren que un reservorio de infección SIV preferencial está formado por virus con el epitopo transmitido.

Caracterización Bioquímica De La Fidelidad De La Enzima De La Influenza A Virus ARN Polimerasa Compleja

PloS One. 2010  |  Pubmed ID: 20454455

Se acepta ampliamente que el gran error propenso proceso de replicación del virus de la gripe (IAV), junto con el surtido del genoma viral, facilita la eficiente capacidad evolutiva de IAV. Por lo tanto, ha sido lógicamente asumido que la enzima responsable del proceso de replicación viral RNA, tipo de virus de gripe A ARN polimerasa (IAV Pol), es una polimerasa altamente propensa que proporciona las mutaciones genómicas necesarias para la adaptación viral de evolución y anfitrión. Lo importante, sin embargo, nunca la fidelidad de la enzima real de IAV ARN polimerasa ha caracterizado.

CD8 + Acelera La Depleción De Células Del VIH-1 En Ratones Humanizados Inmunopatología

Journal of Immunology (Baltimore, Md. : 1950). Jun, 2010  |  Pubmed ID: 20495069

Injerto estable de los tejidos humanos linfoides en ratones después de la NOD/scid-IL-2Rgammacnull CD34 + de la reconstitución de células madre hematopoyéticas permite la evaluación de la continua infección VIH-1 durante semanas o meses. Se demuestra que el VIH-1-roedores infectados desarrollan el virus específicos de la respuesta inmune celular. CD8 + depleción de células, o 2 semanas 5-7 después de la infección vírica, se tradujo en un incremento significativo de VIH-1 de carga, la activación de células inmunes robusto, y citopatología en tejidos linfoides, pero conserva CD4/CD8 doble positivas piscinas de células T tímicas. Humanos células CD8 + en la circulación volvió a aparecer tan temprano como 2-3 semanas. Estos datos apoyan el papel de las células CD8 + en la vigilancia viral y la relevancia de este modelo de ratón humanizado para el estudio del VIH-1 patobiología y la inmunidad específica contra el virus.

¿Pueden Recuerdos Falsos Cebar Las Soluciones Del Problema?

Cognition. Nov, 2010  |  Pubmed ID: 20813356

Investigaciones anteriores ha sugerido que recuerdos falsos pueden cebar el rendimiento en tareas relacionadas memoria implícita y explícita. La presente investigación examinada si recuerdos falsos pueden utilizarse también para cebar orden procesos cognitivos superiores, es decir, basadas en el conocimiento de la resolución de problemas. Los participantes debían resolver una serie de problemas de tarea asociado remoto compuesto (CRAT), la mitad de los cuales había cebada por la presentación de listas de Deese/Roediger-McDermott (DRM) cuya Señuelos crítica era también la solución al problema. Los resultados mostraron que cuando el señuelo de la crítico: (a) falso recordó, CRAT problemas fueron resueltos más a menudo y significativamente más problemas que no estaban preparados por una lista DRM y (b) no falsamente recordó, tipos de solución de problema CRAT y los tiempos no fueron diferentes que cuando no hubo cebado de DRM. Un segundo experimento demostró que estos resultados no eran un simple artefacto de la inclusión de una prueba de memoria antes de la tarea de solucionar. Las implicaciones de estos resultados se discuten en relación con la literatura anterior en cebado y la función adaptativa de recuerdos falsos.

Enlace De Amiloide Pequeñas Moléculas Bloquean Eficientemente SEVI (derivado Del Semen Potenciador De La Infección Por El Virus)- Y El Mejoramiento De Semen-mediada De La Infección VIH-1

The Journal of Biological Chemistry. Nov, 2010  |  Pubmed ID: 20833717

Semen fue demostrado recientemente para contener las fibrillas amiloideas formadas a partir de un fragmento capaces de autoensamblado de péptido de la proteína fosfatasa ácida prostática. Estas fibrillas amiloideas, denominadas derivado del semen potenciador de la infección por el virus, o SEVI, han demostrado aumentar fuertemente la infectividad del VIH y pueden desempeñar un papel importante en la transmisión sexual del VIH, haciéndolos un blanco potencial de microbicidas. Un nuevo enfoque para estas fibrillas de destino es el uso de moléculas pequeñas, para intercalar en la estructura de fibrillas amiloideas, tales como derivados de tioflavina-T. Aquí, demostramos que la molécula pequeña de amiloide-Unión BTA-EG(6) (el derivado de la hexa(ethylene glycol) de anilina benzotiazol) es capaz de enlazar las fibrillas SEVI e inhibir eficazmente tanto SEVI-mediada y mediada por esperma mejora de infección por el VIH. BTA-EG(6) también bloquea las interacciones de SEVI con viriones del VIH-1 y VIH-1 objetivo las células pero no causa inflamación ni toxicidad en células epiteliales cervicales. Estos resultados sugieren que una molécula pequeña de enlace de amiloide puede tener utilidad como microbicida o suplemento microbicidas para el VIH-1.

La Reconstrucción De La Arquitectura Sináptica En El VIH-1 Enfermedades Neurocognitiva Asociada: Una Estrategia Terapéutica Basada En La Modulación De La Cinasa De Linaje Mixto

Neurotherapeutics : the Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. Oct, 2010  |  Pubmed ID: 20880503

Trabajo de nuestros laboratorios ha validado tipo mixto quinasa linaje 3 (MLK3) como una enzima patológicamente activado en el SNC por el virus de inmunodeficiencia humana 1 (VIH-1) neurotoxinas. En esta revisión, se discuten MLK3 de activación en el contexto de la neuropatogénesis del VIH-1 déficits neurocognitivos asociados (mano). Utilizamos los resultados de la literatura para fundamentar la pertenencia neuropatológico de MLK3 con las enfermedades neurodegenerativas, con un énfasis en la enfermedad de Parkinson que comparte una serie de importantes características fenotípicas y neuropatológico con la mano. Se discuten las vías de transducción de señales corriente abajo de MLK3 activación, con un énfasis en su participación en la microglia y neuronas en modelos preclínicos de MANO. Por último, hacer un caso para la intervención farmacológica dirigida a la inhibición de la MLK3 como una estrategia para revertir la mano, en vista del hecho de que la terapia antirretroviral combinada, a pesar de gestionar con éxito la infección sistémica del VIH-1, ha tenido muy poco éxito en la erradicación de MANO.

La Ablación De La Quinasa De Linaje Mixto 3 (MLK3) No Inhibe La Ototoxicidad Inducida Por Trauma Acústico O La Exposición a Aminoglucósidos

Hearing Research. Dec, 2010  |  Pubmed ID: 20971179

Jun N-terminal quinasa (JNK) se activa en las células ciliadas de la cóclea después de un trauma acústico o la exposición a los antibióticos aminoglucósidos. El bloqueo de la activación de JNK con quinasa de linaje mixto (MLK) inhibidores evita la pérdida de audición y de la muerte de células del cabello después de estas tensiones. Dado que los actuales inhibidores farmacológicos de MLKs bloquear varios miembros de esta familia de quinasas, se analizó la contribución del miembro de la familia importante neuronal (MLK3) al estrés inducido por ototoxicidad, usingMlk3 (- / -) ratones. La tinción inmunohistoquímica reveló que MLK3 se expresa en las células ciliadas de la cóclea de ratones C57/BL6 (pero no en MLK3 (- / -) los animales). Después de la exposición al trauma acústico no hubo diferencias significativas en los valores de DPOAE y ABR betweenMlk3 (- / -) y ratones de tipo salvaje a las 48 h de exposición siguiente o 2 semanas después. La susceptibilidad de las células ciliadas a toxicidad de los aminoglucósidos se puso a prueba mediante la exposición de utrículos explantados a la gentamicina. Gentamicina muerte celular inducida por el pelo era equivalente en utrículos de tipo salvaje y MLK3 ratones (- / -). El bloqueo de la activación de JNK con el inhibidor farmacológico SP600125 muerte celular atenuada en utrículos, tanto de tipo salvaje y MLK3 (- / -) ratones. Estos datos muestran que la ablación MLK3 no protege contra la muerte de células de cabello después de un trauma acústico o la exposición a los antibióticos aminoglucósidos, lo que sugiere que MLK3 no es el principal regulador de aguas arriba de JNK mediada por la muerte de células del cabello después de estas tensiones. Por el contrario, otros miembros de la familia MLK como MLK1, que también se expresa en la cóclea, puede tener una función anteriormente no apreciada en el ruido y la inducida por aminoglucósidos ototoxicidad.

Investigando El Partido De Recuperación De Codificación En La Memoria De Reconocimiento: Efectos Del Intervalo De Retención, Especificidad Y Diseño Experimental

Memory & Cognition. Dec, 2010  |  Pubmed ID: 21156873

Cinco experimentos investigaron al partido de recuperación de codificación en la memoria de reconocimiento mediante la manipulación de la lectura y generan condiciones en estudio y en la prueba. Experimentos 1A y 1B confirman las conclusiones anteriores que restablecer las operaciones de codificación en prueba mejora la exactitud del reconocimiento en un diseño en grupos pero reduce la exactitud del reconocimiento en un diseño de inter-grupos. 2A experimento demostró que generación de anagramas en estudio y en la prueba reconocimiento precisión incluso cuando estudiar y mejora artículos de la prueba fueron generados de diferentes anagramas. 2B experimento demostró la conmutación de tarea de una generación en estudio (por ejemplo, solución de Anagrama) a una generación diferente tarea en prueba (p. ej., terminación de fragmento) había eliminado esta ventaja de reconocimiento. El experimento 3 mostró que la ventaja de reconocimiento encontró en experimento 1A es confiablemente presentar hasta una semana después de estudio. Los resultados son consistentes con las teorías de la memoria que hacen hincapié en la importancia del partido entre las operaciones de codificación y recuperación.

Pantalla Densa De Espigas De Envolvente De VIH-1 En El Andamio De Fago Lambda No Resulta En La Generación De Respuestas Del Anticuerpo Mejorada a Env Del VIH-1

Vaccine. Mar, 2011  |  Pubmed ID: 21310193

La generación de respuestas del anticuerpo fuerte, neutralización de virus a la espiga de la envolvente de VIH-1 (Env) es una meta importante en la investigación de vacunas de VIH-1. Para intentar mejorar la respuesta de Env-específicas, nos muestran gp140 oligoméricas en un andamio de virus-como de la cápsida del fago lambda. Para ello, se utiliza un sistema de complementación in vitro para "decorar" las partículas de fagos con glucosilada, oligómeros de mamíferos célula-derivados envolvente. Comparamos la respuesta inmune a las partículas de Fago lambda mostrando Env del VIH-1 que sacaron por gp140 oligoméricas solubles en conejos. Títulos de anticuerpos de env-enlace fueron mayores en animales que recibieron oligoméricas gp140 en comparación con partículas de fagos Env decorado, como fueron las respuestas de anticuerpos neutralizantes de virus. Sin embargo, las partículas del fago Env decorada fueron capaces de impulsar eficientemente una respuesta humoral proteína-preparado a niveles equivalentes a los sacados por los oligómeros de Env con altas dosis. Estos resultados demuestran que pantalla de espigas de envolvente de VIH-1 en la cápsida de bacteriófago lambda no lleva a una respuesta inmunitaria humoral mejorada, Env-específica.

El Desarrollo De Procesos Automáticos Y Controlados De Recuperación Inhibitorio En Verdadero Y Falso

Journal of Experimental Child Psychology. May, 2011  |  Pubmed ID: 21320706

En tres experimentos, investigamos el papel de automático y control de procesos de recuperación inhibitorio en el desarrollo de la memoria de verdadero y falso en niños y adultos. Experimento 1 incorpora una tarea olvida dirigida para examinar la inhibición de la recuperación controlada. Experimentos 2 y 3 utilizan una tarea de práctica de localización y recuperación de parte-conjunto para examinar la inhibición de recuperación automática. En el primer experimento, la señal de olvidar no tuvo efecto sobre la memoria falsa para adultos pero había reducida memoria falsa para niños. En los experimentos 2 y 3, ambas tareas causaron deficiencias de recuperación para recuperación de verdadero y falso, y esto ocurrió para todas las edades. Inhibición implícita, lo que ocurre fuera de nuestro control consciente, aparece temprano en la infancia. Sin embargo, porque los niños pequeños no procese recuerdos falsos como automáticamente como adultos, inhibición explícita puede reducir salida falsa memoria.

Mejora De Infectividad Del VIH-1 Por Péptidos Modulares Simples, Capaces De Autoensamblado

Biophysical Journal. Mar, 2011  |  Pubmed ID: 21354406

Potenciador de semen derivados de infección viral (SEVI), un fibrilas amiloides formado a partir de un fragmento de péptido catiónico de fosfatasa ácida prostática (PAP), mejora dramáticamente la contagiosidad del virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1). Insoluble, sedimentables fibrillas contribuyan a mejora de SEVI-mediada de la infección por el virus. Sin embargo, el péptido PAP(248-286) SEVI-formación es capaz de producir estructuras de infección mejora mucho más rápidamente de lo que forma fibrillas amiloideas. Esto sugiere que ensamblados supramoleculares solubles pueden realzar la infección por VIH-1. Para abordar esta cuestión, las fibrillas de amiloide-como no-SEVI se derivan de péptidos anfipáticos general de secuencia Ac-K(n)(XKXE)(2)-NH(2). Estos péptidos catiónicos autoensamblados eficientemente a la forma soluble, fibrilla-como estructuras que fueron, en algunos casos, capaces de mejorar aún más eficientemente que SEVI infección HIV-1. También se realizaron experimentos para determinar si agentes que proteger eficientemente la superficie cargada de las fibrillas SEVI bloquean la infección mejora SEVI-mediada. Para ello, hemos generado capaces de autoensamblado péptidos aniónicos de secuencia Ac-E(n)(XKXE)(2)-NH(2). Uno de estos péptidos completamente abrogado mejora SEVI-mediada de la infección del VIH-1, sin alterar la infectividad del VIH-1 en la ausencia de SEVI. Colectivamente, estos datos sugieren que asambleas SEVI solubles pueden mediar la infección mejora, y que las asambleas supramolecular péptidos aniónicos tienen el potencial para actuar como anti-SEVI microbicidas.

Causas De Metanfetamina Sostenida Depresión Del Flujo Sanguíneo Cerebral

Brain Research. Feb, 2011  |  Pubmed ID: 21156163

La prevalencia de uso de la metanfetamina altamente adictiva psicoestimulante (MA) ha ido en constante aumento durante la última década. MA abuso ha sido asociado con ambas alteraciones transitorias y permanentes en el flujo sanguíneo cerebral (FSC), hemorragias, accidentes cerebrovasculares y la muerte. Para entender los cambios inducidos por MA en el FSC, que expusieron a ratones C56BL / 6 a un bolo aguda de la MA (MA 5mg/kg, IP entregada). Esto provocó una respuesta bifásica CBF, que se caracteriza por un aumento transitorio inicial (~ 5 minutos) seguido de un descenso prolongado (~ 30 minutos) de aproximadamente un 25% respecto al valor basal CPF - medida por flujometría Doppler láser sobre la corteza somatosensorial. Para evaluar si esto se debió a catecolaminas vasoconstricción derivada, fentolamina, un antagonista α-adrenérgicos se administró antes del tratamiento MA. Esto redujo el aumento inicial de la CBF, pero no pudo evitar el descenso posterior, sostenido en el FSC. De acuerdo con informes anteriores, MA causado un aumento transitorio de la temperatura media de la presión arterial del cuerpo, y la frecuencia respiratoria. La frecuencia respiratoria elevada dio lugar a la hipocapnia. Cuando la frecuencia respiratoria fue controlada por los ratones de ventilación artificial, la sangre de anhídrido carbónico (2) niveles después de la exposición MA se mantuvo sin cambios respecto a los niveles fisiológicos, y la disminución de MA-inducida por la CBF fue abolida. En vivo de imágenes de dos fotones de los vasos sanguíneos cerebrales reveló sostenida MA-inducida por la vasoconstricción de las arteriolas piales, de acuerdo con los datos de la flujometría láser Doppler. Estos resultados muestran que incluso una única exposición aguda a MA puede dar lugar a profundos cambios en el FSC, con consecuencias potencialmente perjudiciales para la función cerebral.

Cebado Inducida Por Prueba Deteriora Fuente Seguimiento De Precisión En El Procedimiento DRM

Journal of Experimental Psychology. Learning, Memory, and Cognition. Jul, 2011  |  Pubmed ID: 21480753

Tres experimentos investigan los efectos de la prueba-inducida cebado (TIP) en falso reconocimiento en el procedimiento de Deese/Roediger-McDermott (Deese, 1959; Roediger & McDermott, 1995). En el experimento 1, Punta aumentó significativamente falso reconocimiento para los participantes que decisiones vieja/nueva en prueba pero no para los participantes que hicieron juicios de recordar/saber o recibieron información de diagnóstico para ayudarlos a evitar el falso reconocimiento. En el experimento 2, se observó un efecto de punta con el viejo/nuevo reconocimiento pero no cuando los participantes debían recordar si los objetos de estudio fueron pronunciados por un hombre o un mujer altavoz. En el experimento 3, falso reconocimiento aumenta cuando el críticos Señuelos fueron precedidos por 10 elementos estudiados, pero no cuando precedido por 5 estudiada y 5 artículos estudiados de la misma lista. Estos resultados sugieren que Punta aumenta falso reconocimiento interrumpiendo el seguimiento a los procesos de la fuente.

Residuos De La PA En El Virus De La Influenza Pandémica H1N1 2009 Mejoran Actividad Polimerasa Del Virus De La Gripe Aviar En Células De Mamíferos

Journal of Virology. Jul, 2011  |  Pubmed ID: 21561908

El virus de la influenza pandémica de 2009 (pH1N1) es un antirrotavírica origen porcina que contiene humano, aviar y genes de la gripe porcina. Previamente hemos demostrado que el complejo de la polimerasa de la cepa de pH1N1 A/California/04/2009 (Cal) es muy activa en células de mamífero 293T, a pesar de origen aviar de su PA y PB2. En este estudio, se analizaron los residuos de polimerasa que son responsables de la actividad polimerasa de alta pH1N1 en el anfitrión mamífero. Caracterización de complejos de polimerasa que contienen diversas combinaciones de Cal y virus de la gripe aviar A/pollo/Nanchang/3-120/01 (H3N2) (Nan) por gen reportero ensayo indica que Cal PA, pero no PB2, es un importante factor que contribuye a la alta actividad polimerasa de Cal en células 293T. En particular, PA de Cal activa significativamente la polimerasa de Nan lo contrario inactiva a 37 y 39 ° C, pero no a la baja temperatura de 34 ° C. Más análisis usando dirigida mutagénesis demostró que los residuos de Cal PA 85I, 186S y 336 M contribuyen a la mayor actividad de la polimerasa de la Cal. Recombinante A/WSN/33 (H1N1) virus (WSN) que contiene genes de la polimerasa (PA, PB1, PB2) con mutaciones individuales en Pensilvania en residuos 85 y Nan NP, 186 y 336 producen niveles más elevados de la proteína viral que el virus de tipo salvaje (WT) Nan PA. Curiosamente, en comparación con el peso, el virus que contiene que la mutación 85I crecieron más rápidamente en las células A549 humanas y la mutación de 336 M más significativamente mejorado patogenicidad en un modelo murino, entre las tres mutaciones PA probado. Nuestros resultados sugieren que mutaciones múltiples en PA, que eran raramente presentes en cepas de gripe anteriores, están involucradas en la adaptación mamífero y patogenicidad de la pH1N1 2009.

Deslumbrado Y Confundido Por HHV-6

Blood. May, 2011  |  Pubmed ID: 21566101

Lentivirales Mediada Por Vector Expresión Estable De STNFR-Fc En Macrófagos Humanos Y Células Neuronales Como Una Terapia Potencial Para NeuroAIDS

Journal of Neuroinflammation. 2011  |  Pubmed ID: 21569583

Virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) infección con frecuencia causa enfermedad neurológica, que es el resultado de la replicación viral y la activación de macrófagos y microglia en el SNC y posterior secreción de altos niveles de productos neurotóxicos, incluyendo el factor de necrosis tumoral-α (TNF-α). Por lo tanto la hipótesis de que podría tener utilidad potencial como molécula neuroprotectora effecter un antagonista soluble de TNF-α y llevado a cabo estudios de prueba de concepto para probar esta hipótesis.

Análisis Proteómico Integral De Polimerasa De Virus De Gripe Complejo Revelan Una Asociación Nueva Con Proteínas Mitocondriales Y Factores Accesorios De La ARN Polimerasa

Journal of Virology. Sep, 2011  |  Pubmed ID: 21715506

El complejo trimérica ARN polimerasa (3P, para PA-PB1-PB2) del virus de la gripe (IAV) es un determinante importante de viral de restricción de gama de patogenicidad y anfitrión. Interacciones específicas de la polimerasa compleja con proteínas de host pueden determinar factores tanto de estas características y jugar papeles importantes en el ciclo de vida viral. Para investigar esta cuestión, se realizó un análisis de proteómicos integral del huésped humano aislar proteínas relacionadas con la polimerasa de la bien caracterizadas H5N1 Vietnam/1203/04. Se identificaron más de 400 proteínas por líquido cromatografía-tándem espectrometría de masas (LC-MS/MS), de más 300 fueron encontrados para unirse a la subunidad PA sola. Lo más intrigante y nuevo hallazgo fue el gran número de proteínas mitocondriales (∼20%) que asocia la subunidad PA. Estas proteínas median transporte molecular a través de la membrana mitocondrial o regulan el potencial de membrana y en concierto con el factor inductor de apoptosis asociada a mitocondria identificados (AIFM1) pueden tener papeles en la inducción de apoptosis en asociación con PA Además, se identificaron factores de host que asociada a la PA-PB1 (68 proteínas) o el complejo de 3P (34 proteínas) incluyendo proteínas que tienen funciones en la señalización innata antivirales (p. ej., ZAPS o HaxI) o son factores accesorios celulares RNA polimerasa (por ejemplo, la polimerasa factor de liberación de transcripción [PTRF] o Supt5H). IAV cepa específica host factor binding a la polimerasa no se observó en nuestro análisis. En general, este estudio ha puesto de manifiesto en las contribuciones complejas de la polimerasa IAV a la patogenicidad de la célula huésped y permite investigaciones directas sobre la significación biológica de estas interacciones nuevamente descritas.

Robustos Antígeno-específica Humorales Inmunorespuestas a Vectores Adenoviral Sublingual Entregados Codificación Env Del VIH-1: Asociación Con Mucoadhesion Y Eficaz Penetración De La Barrera Sublingual

Vaccine. Sep, 2011  |  Pubmed ID: 21801777

La eficiente inducción de anticuerpos mucosas virus específicos es un importante objetivo no satisfecha en la investigación de vacunas de Virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1). Un enfoque prometedor es sublingual (SL). Examinamos la efectividad de la entrega de SL de dos vectores virales diferentes: (i) un adenovirus recombinante (rAd5) y (ii) un vector de amplicones de Virus del Herpes simple tipo 1 (HSV-1). Experimentos iniciales videomicroscopía in vitro demostraron que las partículas rAd5 quedaron atrapadas en la saliva (es decir, eso Ad5 era mucoadherentes) - a diferencia de viriones de HSV-1, que migra libremente en la saliva y el agua. Estudios de imagen in vivo en ratones revelaron que sólo el vector rAd5 transduced eficientemente el epitelio SL. Coherente con esta, entrega de SL de un rAd5 codificación HIV-1 glicoproteína de envoltura (Env) resultó en respuestas sólidas específica de antígeno anticuerpo en el plasma y en lavados vaginales, mientras que entrega SL de un vector de amplicones de HSV-1 codificación Env del VIH-1 no pudo generar anticuerpos específicos para Env. Por el contrario, ambos vectores sacaron las respuestas humorales equivalentes después del nacimiento intramuscular (IM). Finalmente, entrega de SL del vector rAd5:Env resultado en niveles elevados de suero específico Env IgA y vaginal IgA e IgG, en comparación con entrega IM del mismo vector. Estos resultados resultados arrojan luz sobre propiedades de vector (mucoadhesion, penetración de la barrera sublingual) que puede ser importante para la inducción de potentes inmunorespuestas humorales, después de la administración sublingual de vector. Nuestros datos también muestran que entrega SL de un vector rAd5 Env-codificación puede provocar una respuesta de potente antígeno-específica mucosa anticuerpos en ausencia de adyuvante. En general, estos resultados apoyan la exploración adicional de la ruta de entrega de SL para la entrega de vacunas del VIH-1.

Impacto Bioquímico De La Host Adaptación Asociada PB2 E627K Mutación En La Cinética De Síntesis De RNA Dependiente De La Temperatura De La Polimerasa De Virus De La Gripe A Complejo

The Journal of Biological Chemistry. Oct, 2011  |  Pubmed ID: 21816827

Virus de gripe aviar A la mayoría, que preferentemente se repliquen en las altas temperaturas que se encuentran en el tracto digestivo de las aves, tienen un ácido glutámico en el residuo 627 de la subunidad de PB2 de polimerasa RNA viral (Glu-627), mientras que los virus humanos, que replican óptimamente en las bajas temperaturas se observaron en el tracto respiratorio humano, tienen una lisina (Lys-627). El mecanismo de acción para esta mutación todavía no se entiende, aunque la interacción con factores del anfitrión ha comenzado a desempeñar un papel importante. En este estudio, se analizó una hipótesis alternativa, pero relacionada, que esta mutación PB2 puede alterar la actividad polimerasa enzimático dependiente de la temperatura de la polimerasa viral. En primer lugar, la proteína de la polimerasa aviar, que se purificó de sistema de la expresión del baculovirus, hecho mantuvo significativamente activa en temperaturas más altas (es decir, 37 y 42 ° C), mientras que el mutante de E627K humano perdió drásticamente la actividad a estas altas temperaturas. En segundo lugar, nuestros datos de cinética de estado estacionario revelaron que la polimerasa mutante de E627K humana es catalítico más activa que la polimerasa Glu-627 aviar a 34 ° C. Lo importante es la mutación E627K eleva aparente K(cat) a baja temperatura con poco efecto sobre k, lo que sugiere que la mutación E627K altera los pasos bioquímicos implicados en la catálisis de la enzima en lugar de la interacción con la NTP entrante. En tercer lugar, este impacto cinético dependientes de la temperatura de la mutación de E627K humana también se observó con diferentes plantillas de RNA, con las cartillas diferentes y también en presencia de nucleoproteína. En conclusión, nuestro estudio sugiere que las variaciones de la secuencia de aminoácidos en el residuo 627 de la subunidad PB2 directamente pueden alterar la cinética de la enzima de la polimerasa de la gripe.

¿Qué Factores Subyacen Ilusiones De Memoria Asociativa Y Categóricos? Las Funciones De Fuerza Asociativa Hacia Atrás Y Conectividad Interitem

Journal of Experimental Psychology. Learning, Memory, and Cognition. Aug, 2011  |  Pubmed ID: 21875250

Se investigaron los factores que afectan las ilusiones de la memoria falsa categóricos y asociativa en 2 experimentos. En el experimento 1, fuerza asociativa al revés (BAS) de la palabra de la lista a los señuelos de la crítica y conectividad interitem fueron manipulados en tipo de lista de Deese-Roediger-McDermott (DRM) y categoría. Para las tareas de recuperación y el reconocimiento, la probabilidad de producir recuerdos falsos DRM y categoría fue mayor en listas con BAS alta y baja conectividad interitem. En las listas de experimento 2, DRM y categoría alta BAS mostró similar cebado indirecta efectos en una palabra tallo tarea de terminación. Con baja BAS, listas de categoría, a diferencia de las listas de los DRM, no mostró ningún efecto de cebado. Discutimos el papel de BAS, conectividad interitem y diferencias de nivel de asociado en medidas implícitas y explícitas de la producción de memoria falsa. (PsycINFO Database Record (c) 2011 APA, todos los derechos reservados).

VIH-1 Tat-inducida Microgliosis Y El Daño Sináptico a Través De Interacciones Entre Las Células Mieloides Central Y Periférico

PloS One. 2011  |  Pubmed ID: 21912650

A pesar de la capacidad de tratamiento de combinación antirretroviral (TAR) para reducir la carga viral a niveles casi indetectables en el líquido cefalorraquídeo y el suero, el VIH-1 trastornos neurocognitivos asociados (MANO) persisten en no menos de la mitad de los pacientes que viven con esta enfermedad. Existe un creciente consenso de que el sustrato real de MANO es la destrucción de la arquitectura sináptica normal, pero la secuencia de eventos celulares que conducen a este resultado no ha sido resuelto. Para determinar si las células mieloides centrales vs periférica linaje contribuir al daño sináptica durante neuroinflamación aguda se inyectó una dosis única de la transactivador VIH-1 de la proteína de la transcripción (Tat) o el control del vehículo en el hipocampo de C57Bl de tipo salvaje o quimérico / 6 ratones genéticamente marcado para distinguir la infiltración y residente células inmunes. Entre los leucocitos 8-24 h después de la inyección de Tat, invadiendo CD11b (+) y / o positiva-mieloperoxidasa con características de granulocitos se encontró que engullen tanto microglía y estructuras sinápticas, y microglía recíprocamente envolvió invadir los leucocitos. Por 24 horas, los procesos microgliales También se observaron ensheathing dendritas, seguido por la inclusión de elementos sinápticas en microglia 7 días después de la inyección Tat, con una microgliosis duradera de al menos 28 días. Así, el sistema nervioso central (SNC), la exposición a Tat induce la activación temprana de las células periféricas linaje mieloide con la fagocitosis de los elementos de inmersión recíproca sinápticas y microglial de los leucocitos periféricos, y microgliosis duradera. Nuestros datos sugieren que una sola exposición a un antígeno extraño, como el VIH-1 Tat puede llevar a la larga duración perturbación de la homeostasis neuroinmunes normal con consecuencias perjudiciales para la arquitectura sináptica y, además, sugieren un posible mecanismo para la neuroinflamación duradera en la ausencia de virus productiva replicación en el SNC.

Compartida De Procesos Cognitivos Subyacentes Pensamiento Pasado Y El Futuro: El Impacto De Las Imágenes Y Concurrente Tarea Exige En La Especificidad Del Evento

Journal of Experimental Psychology. Learning, Memory, and Cognition. Sep, 2011  |  Pubmed ID: 21928933

La literatura reciente ha sostenido que mientras que hacen recordar el pasado e imaginando el futuro uso de sustratos cognitivos compartidos, simular eventos futuros lugares demandas más pesadas sobre los recursos del ejecutivos. Estas proposiciones fueron exploradas en 3 experimentos que comparan el impacto de las imágenes y las demandas de la tarea concurrente en velocidad y exactitud del pasado evento recuperación y simulación de eventos futuros. Resultados apoyan la sugerencia de que episodios del pasado y el futuros pueden construirse a través de 2 mecanismos: un camino "directo" noneffortful y un camino "generativa" controlada y effortful. Sin embargo, surgieron pruebas limitadas para la sugerencia de que la simulación de futuro, en comparación con recuperar pasado, episodios lugares más pesadas demandas sobre los recursos del ejecutivos; solamente bajo ciertas condiciones surge como un proceso de más largo y son propensos a errores más. Los resultados se discuten en términos de cómo recuperación y simulación hacer uso de los mismos sustratos cognitivos en formas sutilmente diferentes. (PsycINFO Database Record (c) 2011 APA, todos los derechos reservados).

Avances En El Desarrollo De Microbicidas VIH

Future Medicinal Chemistry. Dec, 2011  |  Pubmed ID: 22098355

Hay una urgente necesita controlar la propagación de la pandemia mundial del VIH. Un microbicida o fármaco tópico aplicado en el entorno de la mucoso para bloquear la transmisión, es una estrategia prometedora de la prevención de VIH. El desarrollo de un microbicida seguro y eficaz requiere un conocimiento profundo del ambiente mucoso y su papel en la transmisión del VIH. Conocimiento de los acontecimientos clave en la infección viral identifica los puntos en que el virus podría orientarse más eficazmente por un microbicida. El cervicovaginal y mucosa rectal juegan un papel importante en la defensa innata contra el VIH y microbicidas no deben interferir con estas funciones. En esta revisión, discutimos la investigación actual en el desarrollo de microbicidas VIH.

Vector Adenoviral Impulsado Por Un Mínimo De Rad51 Promotor Es Selectivo Para Deficientes En P53 Células Tumorales

PloS One. 2011  |  Pubmed ID: 22174876

El promotor longitud Rad51 completo es altamente activo en las células cancerosas, pero no en células normales. Por lo tanto, se propuso evaluar si se podría atribuir este tipo de tumor selectividad a un vector de adenovirus.

Oligovalent Amiloide-aglutinantes Reducen Mejora SEVI-mediada De La Infección VIH-1

Journal of the American Chemical Society. Jan, 2012  |  Pubmed ID: 22239120

Este documento evalúa la utilización de moléculas de oligovalent amiloide vinculante como agentes potenciales que pueden reducir la mejora del virus de inmunodeficiencia humana-1 (VIH-1) infección en células por derivados del semen potenciador de las fibrillas de infección (SEVI) de virus. Estos naturales fibrillas amiloideas encontradas en el semen se han implicado como mediadores que pueden facilitar el accesorio y la internalización de viriones del VIH-1 a las células inmunes. Moléculas que son capaces de reducir el papel de SEVI en la infección por VIH-1 pueden, por lo tanto, representan una nueva estrategia para reducir la tasa de transmisión sexual del VIH-1 en los seres humanos. Aquí, se evaluaron una serie de sintéticos, derivados de la oligovalent de benzotiazol anilina (BTA, una molécula conocida de amiloide vinculante) por su capacidad para enlazar cooperativamente a péptidos amiloides agregados y para neutralizar los efectos de SEVI en la infección por VIH-1. Demostramos que estos derivados BTA exhiben una tendencia general de mayor Unión a agregados amiloides en función del incremento de Valencia de la oligómero. Lo importante, encontramos que los oligómeros de BTA Mostrar mejora de la capacidad para reducir la infección del VIH-1 en células en comparación con un monómero BTA, con el pentámero exhibiendo una 65-fold mejora en eficacia en comparación con un derivado BTA monomérico previamente divulgado SEVI-mediada. Estos resultados, por lo tanto, apoyan el uso de moléculas metas de amiloide como potencial suplementos para que microbicidas frenar la propagación del VIH-1 a través del contacto sexual.

Cebado Inducida Por Prueba Aumenta Falso Reconocimiento En Niños Mayores, Pero No Más Joven

Journal of Experimental Child Psychology. Jan, 2012  |  Pubmed ID: 21908005

El efecto de cebado inducida por prueba en falso reconocimiento fue investigado en los niños de 5, 7, 9 y 11 años usando listas de asociados semánticos, ejemplares de categoría y asociados fonológicos. En línea con efectos observados previamente en adultos, nueve y once años de edad mostró niveles elevados de falso reconocimiento cuando Señuelos críticos fueron precedidos por cuatro elementos estudiados. Este patrón estuvo presente con todos los tipos de lista tres. En cambio, ningún efecto de cebado inducida por prueba fueron observado en cinco o siete-años con cualquier tipo de lista. Los resultados apoyan también los de estudios previos en Mostrar un cambio del desarrollo de recuerdos falsos fonológicos a semántica. Los resultados se discuten en términos de las teorías actuales de recuerdos falsos de los niños.

Una Diferencia De Género En La Falsa Retirada De Palabras Negativas: Las Mujeres Más Que Hombres DRM

Cognition & Emotion. 2012  |  Pubmed ID: 21432635

Diferencias de género en la susceptibilidad a las ilusiones de la memoria asociativa en el paradigma de Deese/Roediger-McDermott fueron investigadas usando listas de palabra negativa y neutral. Mujeres (n = 50) y hombres (n = 50) estudió 20 listas de 12 palabras que fueron asociados de un señuelo crítico no presentados. Diez listas eran asociados de señuelos negativamente valenced (p. ej., llanto, mal) y diez eran asociados de señuelos neutrales (por ejemplo, silla, lenta). Cuando se le preguntó a recordar las palabras después de cada lista, las mujeres falsamente recordaron Señuelos más negativos que los hombres, pero no hubo diferencias de género en la falsa retirada de señuelos neutrales. Estos resultados sugieren que las mujeres reflexión sobre asociaciones listas negativas en mayor grado que los hombres y son de tal modo más probable que generen los señuelos de la críticos negativos.