Analgesia Epidural Controlada En Niños: ¿pueden Hacerlo?

Anesthesia and Analgesia. Mar, 2003  |  Pubmed ID: 12598244

Amplia experiencia clínica y muchos estudios apoyan el uso de la analgesia controlada por el paciente de i.v. (i.v. PCA) y técnicas de anestesia regional para el tratamiento del dolor postoperatorio en niños. En cambio, poco se ha divulgado sobre la capacidad de los niños a usar analgesia peridural controlada por el paciente (PCEA) o acerca de la eficacia de esta técnica. Divulgamos un análisis descriptivo de datos prospectiva registrados en 128 niños (132 procedimientos) en quien PCEA fue utilizado para controlar el dolor postoperatorio agudo. Analgesia satisfactoria se obtuvo en 119 pacientes (90.1%) para un máximo de 103 h sin episodios de desaturación y sin evidencia clínica de toxicidad o efectos adversos graves. La analgesia fue satisfactoria con los ajustes iniciales en 89 pacientes; en 38 de los otros, esto se logró con los cambios en la configuración de PCEA o solución. Cinco pacientes fueron cambiados a i.v. PCA debido a la inadecuada analgesia. Ocho pacientes con analgesia satisfactoria fueron convertidos a i.v. PCA debido a efectos adversos. Niños tan jóvenes como de 5 años tenía la capacidad cognitiva de entender y la voluntad de usar PCEA, consistente con la utilización de i.v. PCA. Preste especial atención a la dosis de anestésico local por hora total para evitar que rebasen los límites recomendados. Nuestros datos recopilados prospectivamente demuestran que PCEA proporciona analgesia satisfactoria con una pequeña incidencia de efectos secundarios adversos en los niños y debe ser considerado junto con otras estrategias en el tratamiento del dolor postoperatorio pediátrico. IMPLICACIONES: Un análisis descriptivo de datos prospectiva registrados en 132 niños recibieron analgesia epidural controlada por el paciente para el alivio del dolor posoperatorio demuestra analgesia satisfactoria sin toxicidad grave o efectos secundarios en niños de 5 años. Esta modalidad puede considerarse otra estrategia en el tratamiento del dolor postoperatorio pediátrico.

¿Grandes Dosis Intravenosa Methotrexate-inducida Cutánea Toxicidad: óxido De Magnesio Oral Puede Reducir El Dolor?

Anesthesia and Analgesia. May, 2003  |  Pubmed ID: 12707144

IMPLICACIONES: La quimioterapia para el cáncer se asocia con dolor incluyendo vasculitis cutánea. Magnesio, un antagonista del receptor de ácido N-metil-D-Aspártico, fue utilizado con éxito para tratar a un adolescente con dolor causado por la vasculitis cutánea secundaria al tratamiento con metotrexato.

Desorción/ionización En Espectrometría De Masas De Tiempo De Vuelo/tiempo-de-vuelo De Silicio

Analytical Chemistry. May, 2003  |  Pubmed ID: 12918997

Desorción/ionización en silicio (DIOS) tiempo de vuelo (TOF/TOF) espectrometría total en tándem (MS) proporciona alta exactitud y obtener información significativa fragmentación, particularmente en la caracterización de biomoléculas. DIOS TOF/TOF ofrece una plataforma de alto rendimiento basadas en superficie ionización como fragmentación completa a través de energías de colisión alta. La ausencia de interferencias de la matriz en DIOS permite el análisis de MS y MS/MS de pequeñas moléculas muy por debajo de la m/z 300. Además, la preparación de la muestra es mínima, y las virutas DIOS pueden almacenarse y reanalizadas para información de fragmentación o las medidas exactas de la masas. Las ventajas combinadas de robustez, preparación de la muestra mínima, buena sensibilidad, alto rendimiento y capacidad de secuenciación hacen DIOS TOF/TOF una poderosa herramienta para la identificación, caracterización y proteína de molécula pequeña.

Proteoma De Haemophilus Ducreyi Por 2D SDS-PAGE Y Espectrometría De Masas: Cepa Expresión Variación, Virulencia Y Carbohidratos

Journal of Proteome Research. Sep-Oct, 2003  |  Pubmed ID: 14582649

Hemos analizado el proteoma de varias cepas de Haemophilus ducreyi por electroforesis bidimensional (2-DE) y espectrometría de masas. 122 Distintas proteínas se identificaron y analizaron más de 100 puntos de las fracciones de proteína soluble e insoluble de la 35000HP de tensión del prototipo. Funciones de aproximadamente el 80% de las 122 proteínas se dedujeron por identificación con homólogos cercanas de Haemophilus influenzae. Cuatro tipo de salvaje adicional y tres cepas mutantes también analizaron que varían en sus estructuras de lipooligosaccharide de virulencia y/o membrana externa. En general, los mapas 2-DE gel del tipo salvaje y estirpes mutantes eran similares a la cepa 35000HP, sugiriendo la poca diversidad de proteoma en relación con la expresión de hidratos de carbono y/o virulencia. Una excepción fue la cepa Kenia 33921 que contenían diferencias significativas en su mapa de 2-DE proteoma y también sintetiza una inusual LOS con una estructura de bifurcación trisacárido. Esta cepa africana puede representar un prototipo de un segundo grupo clónico de H. ducreyi.

Hacia La Definición Del Proteoma Salival Parótida Humana Y Peptidome: Identificación Y Caracterización Mediante SDS-PAGE 2D, Ultrafiltración, HPLC Y Espectrometría De Masas

Biochemistry. Mar, 2005  |  Pubmed ID: 15723531

Saliva desempeña muchas funciones biológicas, de la lubricación y la digestión a la regulación de la adhesión de bacterias y leucocitos. Para entender las funciones de los componentes individuales y familias de moléculas, es importante identificar proteínas salivales tantos como sea posible. Hacia este objetivo, utilizamos un enfoque proteómico como el primer paso en un análisis global de este importante líquido del cuerpo. Recogimos saliva parótida como la secreción ductal de tres donantes humanos y separados los componentes de proteínas mediante electroforesis bidimensional de gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE 2D). Proteínas en gel de puntos fueron identificadas por la masa de péptido toma de huellas dactilares, y los resultados fueron confirmados por espectrometría total en tándem de péptidos seleccionados. Complementando este enfoque utilizamos ultrafiltración para preparar una fracción de bajo peso molecular de saliva parótida, que analizó directamente o después invirtió separación de cromatografía líquida de alto rendimiento de fase utilizando enfoques de espectrometría de masa. Análisis de MS de puntos 2D de SDS-PAGE revelaron componentes conocidos de saliva, incluyendo cistatinas, histatins, lisozima e isoformas o fragmentos de alfa-amilasa, albúmina y proteínas ricas en prolina. También descubrimos nuevas proteínas, como varias isoformas de Zn-alfa-2-glicoproteína y proteína de unión a actina secretor. Los análisis de MS de la ultrafiltrado demostraron que la fracción de bajo peso molecular de saliva parótida era rica en péptidos, con nuevos fragmentos de proteínas ricas en prolina y histatins en abundancia. Experimentos utilizando Candida albicans como el organismo de prueba demostró que al menos uno de los péptidos novela tiene actividad antifúngica. Nuestros resultados muestran que la saliva es una fuente rica de proteínas y péptidos que son potenciales dianas diagnósticas y terapéuticas.

Evaluar Los Efectos De La Variación Diurna En La Composición De La Saliva Parótida Humana: Análisis Cuantitativo De Péptidos Nativos ITRAQ Reactivos

Analytical Chemistry. Aug, 2005  |  Pubmed ID: 16053308

Cambios en la composición salival se correlacionan con la susceptibilidad de la enfermedad, el estado de la enfermedad o ambos. Sin embargo, el uso de saliva para propósitos de diagnóstico se complica por los efectos específicos de la glándula del ritmo circadiano o variación diurna. Caracterizamos recientemente un conjunto de péptidos en la < o = fracción de 10 kDa de saliva parótida humana que incluye muchas nuevas especies. En este estudio, utilizamos la novela iTRAQ etiquetado química para investigar posibles efectos diurnos en la generación de péptidos. Recogimos muestras producidas por el estímulo gustativo como las secreciones ductales en cuatro puntos del tiempo en condiciones que minimizan la proteólisis, les agruparon según el tiempo de colección y aislaron de las fracciones de BPM. Las muestras recogidas en cada momento de la colección fueron derivatizadas con un reactivo de diferentes iTRAQ isobárico. Las muestras marcadas fueron combinadas, separadas por HPLC de fase inversa, co-spotted con matriz en objetivos MALDI y analizadas por espectrometría de masas MALDI TOF/TOF. Con este enfoque, logramos cuantificación relativa de los péptidos parótidas en cuatro puntos del tiempo. En varios casos, la abundancia durante el día cambió dramáticamente. Etiquetado iTRAQ mejoró la eficacia de la fragmentación de MS/MS, que a su vez permitió la identificación de varios péptidos novela. Nuestros resultados demuestran tanto la utilidad de este método y la importancia de diurnas efectos sobre la composición de la saliva parótida humana peptidome.

¿Anestesia Espinal En Niños: Es El Práctico Práctico?

Anesthesia and Analgesia. Jan, 2006  |  Pubmed ID: 16368804

Formación En Anestesiología De La Investigación: Ampliar Ahora!

Anesthesiology. Sep, 2006  |  Pubmed ID: 16931975

Complejos De Alta Masa Molecular APOBEC3G Restringen Alu Retrotransposition

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Oct, 2006  |  Pubmed ID: 17030807

APOBEC3G (A3G) y Desaminasas desoxicitidina relacionados son factores potentes antirretrovirales intrínseca. A3G se expresa como una forma de enzimáticamente activa baja molecular-masa (LMM) o como un complejo de Ribonucleoproteína enzimáticamente inactivo alta--masa molecular (HMM). Descanso T CD4 células exclusivamente expresa A3G LMM, donde funciona como un factor de restricción postentry potente para VIH-1. Activación de células T CD4 promueve el reclutamiento de LMM A3G por 5 - a 15-MDa HMM complejos cuya función se desconoce. Técnicas de purificación de la afinidad de tándem junto con MS, identificamos gránulos que contienen Staufen RNA-transporte y Ro Ribonucleoproteína complejos como componentes específicos de HMM A3G complejos. Análisis de RNAs en estos complejos reveló Alu y small RNAs Y, dos de los elementos genéticos móviles no autónomos más prominentes en las células humanas. Estos RNAs retroelement son reclutados en los gránulos que contienen Staufen RNA-transporte en presencia de A3G. Retrotransposition de aluminio y hY RNAs depende de la maquinaria de la transcriptasa inversa proporcionada por elementos de nucleótido esparcido largo 1 (L1). Mostramos ahora que A3G inhibe grandemente retrotransposition L1-dependiente de marcada Alu retroelementos no inhibiendo la función de la L1 sino por secuestro Alu RNAs en complejos HMM A3G citoplásmicos de la maquinaria enzimática de L1 nuclear. Estos resultados no autónomos retroelementos Alu y hY se identifican como dianas celulares naturales de A3G y resaltar cómo las diferentes formas de A3G únicamente proteger las células contra las amenazas planteadas por retrovirus exógenos (LMM A3G) y endógenos retroelementos (HMM A3G).

Poca Fiabilidad Inter-rater En Exámenes Orales Simulacros De La Anestesia

Canadian Journal of Anaesthesia = Journal Canadien D'anesthésie. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 17142667

Proteómica Y Immunoblot Análisis De Proteínas De La Membrana Total De Bartonella Quintana Identifican Antígenos Reconocidos Por Los Sueros De Pacientes Infectados

Infection and Immunity. May, 2007  |  Pubmed ID: 17307937

Bartonella quintana es una bacteria fastidiosa, bacterias Gram negativas, en forma de bastoncillos que produce bacteriemia prolongada en humanos inmunocompetentes y graves infecciones en individuos inmunocomprometidos. Intentamos definir la membrana externa subproteomas de B. quintana para obtener información sobre la biología y la patogenesia de este patógeno emergente e identificar los antígenos quintana B. predominante dirigidos por el sistema inmunológico humano durante la infección. Se aislaron las proteínas de membrana total de B. quintana y 60 proteínas identificadas por dos dimensiones sodio dodecil sulfato-poliacrilamida del gel de electroforesis y péptido masa huellas dactilares. Usando el mapa de proteoma recién construida, entonces utilizamos immunoblotting bidimensional con sueros de 21 B. quintana-pacientes infectados para identificar 24 reconocido constantemente, quintana B. immunoreactive antígenos que tienen potencial relevancia para el diagnóstico y patogenia. Entre las proteínas de membrana externa, la proteína de membrana externa variable expresado adhesinas (VompA y VompB), peptidyl-prolyl cis-trans-isomerasa (PpI) y hemina proteína E (HbpE) fueron reconocidos más frecuentemente por los sueros de pacientes, que concuerda con la expresión superficial de estos factores de virulencia durante la infección humana.

Apolipoproteína E * Dipalmitoilfosfatidilcolina Partículas Son Elipsoidales En Solución

Journal of Lipid Research. May, 2007  |  Pubmed ID: 17308333

Apolipoproteína E (apoE) es un componente de la proteína importante de partículas de lipoproteínas transporte de colesterol en el sistema nervioso central y en el plasma. Polimorfismos de la apoE se asocian con enfermedad cardiovascular y con una predisposición a la enfermedad de Alzheimer y otras formas de neurodegeneración. Para la actividad biológica completa, apoE debe someterse a una partícula de la lipoproteína. Complejos de apoE y fosfolípido imitan muchas de estas actividades. En contraste con un modelo ampliamente aceptado discoidales de apoA-limito a dimyristoylphosphatidylcholine, que se basa en estudios de la solución, un estudio de difracción de rayos x de apoE limitado a dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) indicó que apoE * DPPC partículas son quasi-spheroidal y que el embalaje de la base del fosfolípido es similar a una micela. Con la dispersión de rayos-x de ángulo pequeño, mostramos que apoE * DPPC partículas en solución son elipsoidales y que la forma de la base del fosfolípido es compatible con un modelo de bicapa torcido. El modelo propuesto es consistente con los resultados del análisis de espectrometría de masa de productos de proteólisis limitada. Estos revelaron que las regiones de nonlipid-limite de apoE en la partícula son consistentes con una horquilla alfa helicoidal.

Una Estrategia Para Detectar Y Caracterizar Las Actividades De La Proteinasa Endógena En Muestras Biológicas Complejas Basadas En Espectrometría De Masa

Proteomics. Feb, 2008  |  Pubmed ID: 18186022

Proteinasas endógenas en fluidos biológicos como la saliva humana producen un repertorio rico péptido que refleja una combinación única de enzimas, sustratos y los inhibidores/activadores. Por consiguiente, este subproteomas es una interesante fuente de biomarcadores para procesos de la enfermedad que directa o indirectamente involucran proteólisis. Sin embargo, las proteinasas pertinentes, moléculas típicamente muy baja abundancia, son difíciles de clasificar e identificar. Nuestra hipótesis es que una técnica sensible para monitoreo péptido acumulado productos de una manera imparcial, global sería muy útil para detectar y perfilar las actividades proteolíticas en muestras biológicas complejas. Basándose en el uso desde hace mucho tiempo de enfoques isótopo 18O para la clasificación de proteolítica y otros procesos enzimáticos ideamos un nuevo método para la evaluación de proteinasas endógenos. Específicamente, nos demostró que al ex vivo proteinasas endógena de incubación en humano saliva parótida introducido 18O de agua isotópicamente enriquecido en los grupos carboxílicos c-terminal de sus productos de péptido. Determinación de secuencia del péptido posterior y perfiles de inhibidor permitieron la detección de subconjuntos discretos de productos proteolíticos que fueron generados por diferentes enzimas. Como prueba-de-principio utilizamos uno de estas huellas dactilares para identificar la actividad relevante como tejido calicreína. Denomina esta técnica PALeO. Nuestros resultados sugieren que el PALeO es un método rápido y altamente sensible para evaluar globalmente las actividades proteinasa en muestras biológicas complejas.

Una Estrategia "Hanes" Para La Identificación De Los Complejos De La Proteína Estable Genoma Por Multidimensional Ortogonal Cromatográfico Separación E ITRAQ Reactivo De Seguimiento

Journal of Proteome Research. May, 2008  |  Pubmed ID: 18336004

Purificación de la afinidad del tándem es el principal método para purificar e identificar complejos de la proteína estable todo el sistema en células enteras. Aunque altamente eficaz, este método es laborioso y práctico en donde no es posible la manipulación genética de los organismos. Aquí, proponemos una nueva estrategia "Hanes" que combina separación multidimensional de complejos endógenos con la supervisión de espectrometría de masa de su composición. En este procedimiento, se identifican complejos de proteína supuesta basado en la comigration de colecciones de polipéptidos a través de múltiples pasos de separación ortogonal. Presentamos la evidencia de la prueba de principio para la viabilidad de los aspectos clave de esta estrategia. Una mayoría de proteínas de Escherichia coli se muestran a permanecer en complejos estables durante el fraccionamiento de un extracto crudo a través de tres pasos cromatográficos. También demostramos que iTRAQ reactivo basado en seguimiento puede cuantificar migración relativa de polipéptidos a través de los medios de separación cromatográfica. Análisis de LC MALDI MS y MS/MS de los péptidos marcados con iTRAQ dio confiable cuantificación relativa de 37 componentes de 13 complejos conocidos e. coli: 95% de componentes complejos conocidos cerca co-eluted y 57% fueron agrupado automáticamente por un prototipo computacional método de agrupamiento. Con más mejoras tecnológicas en cada paso, creemos que esta estrategia mejorará dramáticamente la eficiencia de la purificación e identificación de complejos de la proteína en las células.

Los Proteomas De Parótida Humana Y Salivas De Glándula Submaxilar/sublingual Recogieron Como Las Secreciones Ductales

Journal of Proteome Research. May, 2008  |  Pubmed ID: 18361515

La saliva es un líquido corporal con funciones importantes en la salud oral y general. Un consorcio de tres grupos de investigación catalogado las proteínas en la saliva humana como las secreciones ductales: 1166 identificaciones--914 en parótida y 917 en saliva submaxilar/sublingual--fueron hechos. Los resultados mostraron que una alta proporción de proteínas que se encuentran en el plasma y/o lágrimas también están presentes en la saliva junto con componentes únicos. Las proteínas identificadas están implicadas en numerosos procesos moleculares que van desde funciones estructurales a actividades enzimáticas/catalíticas. Como era de esperar, la mayoría asignada a los compartimentos extracelulares y secretores. Un enfoque de immunoblot se utilizó para validar la presencia en la saliva de un subconjunto de las proteínas identificadas por métodos de espectrometría de masa. Estos experimentos se centran en nuevos componentes y proteínas para que las pruebas de péptido eran relativamente débil. En definitiva, información derivada del trabajo divulgado aquí y estudios publicados relacionados pueden usarse para pruebas de laboratorio clínico basadas en sangre se traducen en un formato que utiliza la saliva. Además, un catálogo del proteoma salival de individuos sanos permite a futuros análisis de muestras de salivales de individuos con enfermedades orales y sistémicas, con el objetivo de identificar biomarcadores con valor diagnóstico y pronóstico de estas condiciones; otra posibilidad es el descubrimiento de dianas terapéuticas.

Rápida Alteraciones En Los Perfiles De Proteínas Cortical Subyacen Sueño Espontáneo Y Combates De Estela

Journal of Cellular Biochemistry. Dec, 2008  |  Pubmed ID: 19003977

Los datos existentes indican que sueño-vigilia es un comportamiento esencial. La función o funciones biológica de sueño, sin embargo, permanece desconocida, debido, en parte, a la falta de información disponible a nivel intracelular. Análisis de microarrays preliminares muestran que cambios en el estado de comportamiento influyen en perfiles de mRNA regional; sin embargo, el impacto del sueño en las firmas de la proteína es prácticamente inexplorado. En estos estudios, perfiles de la cortical de la proteína fueron examinados después tiempo episodios de sueño-vigilia espontánea. A minutos de cada comportamiento Estado examinado, se detectaron un pequeño número de puntos que muestra la expresión única. Análisis de espectrometría de masas de puntos relacionados con el sueño y el despertar identifican proteínas relacionadas con múltiples categorías funcionales. Dos proteínas asociadas a dormir más se validaron utilizando un paradigma de la privación de sueño. Se encontraron pruebas preliminares para dos diferentes postranscripcional mecanismos uno (GAPDH) en que se aumentó la cantidad de proteína en el sueño de recuperación tras despertar prolongado, mientras que los otra (actina) sugirió que las modificaciones post-traduccionales pueden subyacer el sueño. Las similitudes entre los efectos del sueño sobre perfiles tanto proteína como mRNA indican que cambios intracelulares dinámicos subyacen a Estados de sueño-vigilia y concuerdan con papeles para dormir en múltiples funciones biológicas.

Ácido-catalizado Oxígeno-18 Etiquetado De Péptidos

Analytical Chemistry. Apr, 2009  |  Pubmed ID: 19243188

En estrategias O etiquetas (18) enzimáticas para proteómica cuantitativa, el intercambio de oxígenos carboxilo en pH bajo es una reacción del lado común, no deseados. Preguntamos si cambio trasero ácido-catalizado pudiera interferir con cuantificación y si la reacción sí mismo podría ser utilizada como método para introducir la etiqueta de (18) O en péptidos. Varios péptidos sintéticos fueron disueltos en ácido diluido que contiene 50% h (18) O (v/v) y se incubaron a temperatura ambiente. Alícuotas fueron durante un período de 3 semanas y analizadas por espectrometría de masas en tándem (MS/MS). (18)Incorporación O cocientes se determinaron mediante análisis de regresión lineal que permitió varias incorporaciones de isótopos estables. En pH bajo, péptidos intercambian sus átomos de oxígeno del carboxilo con el solvente acuoso. Los patrones de isótopo desplazado gradualmente a masas más altas hasta llegar a la esperada distribución binomial en el equilibrio después de aproximadamente 11 días. Velocidades de reacción fueron específicos de residuos y secuencia. Debido a su naturaleza lento, se espera que el cambio trasero ácido-catalizado interferir mínimamente enzimáticos (18) etiquetado O estudios siempre que las condiciones de almacenamiento y análisis de minimizan los tiempos de exposición de pH bajo. Por su parte, ácido-catalizado (18) O etiquetado es una estrategia general de marcado que es una alternativa a la química, metabólica, y enzimático isótopo-etiquetado esquemas actualmente utilizado en proteómica cuantitativa.

Multi-sitio De Evaluación De La Precisión Y La Reproducibilidad De Los Múltiples De Reacción a Base De Monitoreo-Las Mediciones De Proteínas En El Plasma

Nature Biotechnology. Jul, 2009  |  Pubmed ID: 19561596

La verificación de biomarcadores candidatos se basa en los ensayos cuantitativos específicos optimizados para la detección selectiva de las proteínas diana, y está cada vez más como un paso crítico en el descubrimiento de nuevas que el descubrimiento de biomarcadores puentes imparcial para la validación preclínica. A pesar de los distintos laboratorios han demostrado que la monitorización de reacción múltiple (MRM) acoplada a espectrometría de masas por dilución isotópica puede cuantificar biomarcadores candidatos de proteínas en el plasma, la reproducibilidad y la transferibilidad de estas pruebas entre los laboratorios no han sido demostrados. Se describe un estudio de varios laboratorios para evaluar la reproducibilidad, la recuperación, rango dinámico lineal y los límites de detección y cuantificación de MRM multiplexadas, a base de ensayos, llevados a cabo por el NCI CPTAC. El uso de materiales comunes y protocolos estandarizados, se demuestra que estos ensayos pueden ser altamente reproducible dentro y fuera de los laboratorios y plataformas de instrumentos, y son sensibles a bajas concentraciones de proteína taza / ml en plasma no fraccionada. Se aportan datos y puntos de referencia contra el cual los distintos laboratorios pueden comparar su desempeño y evaluar nuevas tecnologías para la verificación de biomarcadores en el plasma.

Expresión De La Proteína Se Altera Durante Sueño Espontáneo En Edad Ratas Sprague Dawley

Brain Research. Nov, 2009  |  Pubmed ID: 19729003

Cambios relacionados con la edad en la función cerebral incluyen aquellos que afectan el aprendizaje, la memoria y sueño-vigilia. Sueño-vigilia es un comportamiento esencial que resulta de la interacción de múltiples regiones del cerebro, péptidos y neurotransmisores. La función o funciones biológica de sueño, sin embargo, se desconoce debido a la escasez de información disponible a nivel celular. Ratas envejecidas presentan alteraciones en las influencias circadianas y homeostáticas asociadas con regulación sueño-vigilia. Recientemente, hemos demostrado que alteraciones en perfiles corticales ocurren después de combates temporizados de espontáneo sueño en ratas jóvenes. Examinación de la respuesta celular a sueño-vigilia en ratas viejas así puede proporcionar insight(s) en las funciones biológicas del sueño. Para probar esta hipótesis, supervisamos perfiles corticales en la corteza frontal de chicos y grandes ratas Sprague-Dawley después tiempo episodios de comportamiento espontáneo del sueño-vigilia. Las proteínas se separaron por electroforesis bidimensional (2-DE), visualizado por la coloración fluorescente, fotografiada y analizada en función de la edad y estado de comportamiento. Ratas viejas se incrementó un seis en la expresión de la proteína total, independiente del estado conductual en sacrificio. Cuando se analizan según la edad y estado de comportamiento, hubo una disminución (aproximadamente un 46%) en el número de fosfo-manchas presentes durante SWS en animales de edad. SWS-asociados manchas presentes sólo en animales viejos se asociaron con múltiples funciones incluyendo transporte vesicular, señalización celular, estado de oxidación, apoyo del citoesqueleto y metabolismo energético. Estos datos sugieren que la respuesta intracelular a la señalización asociada con sueño espontáneo es afectada por la edad y es consistente con la idea de que la capacidad de sueño para cumplir sus funciones puede ser disminuida con la edad.

Un Flujo De Trabajo De Afinidad De Lectina Orientación Glycosite Específicos, Relacionados Con El Cáncer Estructuras De Carbohidratos En La Tripsina Digerido Con Plasma Humano

Analytical Biochemistry. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 20705048

Los glicanos son las células específicas del tipo de proteína, modificaciones postraduccionales que se modulan en los procesos de desarrollo y de la enfermedad. Como tal, glicoproteínas son candidatos atractivos biomarcadores. A continuación, describimos una espectrometría de masas basado en flujo de trabajo que incorpora la cromatografía de afinidad de lectina para enriquecer las proteínas que transportan determinadas estructuras de glicano. A medida que aumenta en sialilación y fucosilación destacan entre asociados al cáncer modificaciones, nos centramos en Sambucus nigra aglutinina (SNA) y la lectina Aleuria aurantia (AAL), lectinas que se unen con ácido siálico y las estructuras de fucosa que contienen, respectivamente. Glicopéptidos fucosilados y sialilada de lactoferrina humana sirvieron como controles positivos, y alto contenido en manosa estructuras de invertasa de levadura sirvieron como controles negativos. Las normas se disparó en múltiples sistemas de eliminación de afinidad (MARS) de 14 empobrecido, digerido con tripsina plasma humano de donantes sanos. Las muestras se cargaron en columnas de lectina, separados por HPLC en flujo continuo y fracciones enlazados, y tratados con el péptido N-glicosidasa F para eliminar N-glicanos ligados. Las fracciones peptídicas desglicosiladas fueron interrogados por HPLC-MS/MS ESI. Se identificaron un total de 122 glicoproteínas del plasma humano que contienen 247 glycosites únicas. Es importante destacar que varias de las glicoproteínas observados (por ejemplo, cadherina 5 y neutrófilos lipocalina gelatinasa asociada) normalmente circulan en el plasma a baja nanogramos por mililitro niveles. En conjunto, estos resultados proporcionan la espectrometría de masas basada en la evidencia de la utilidad de la incorporación de la separación lectina-plataformas en las tuberías descubrimiento de biomarcadores de cáncer.

Evaluación Prospectiva Del Aire-Q Automáticos Intubación Vía Aérea Laríngea En Niños

Paediatric Anaesthesia. Jun, 2011  |  Pubmed ID: 21518103

Evaluar la eficacia clínica del aire-Q automáticos ILA ™ (ILA-SP). Objetivo: El propósito de esta auditoría prospectiva fue evaluar la viabilidad de la ILA-SP en la práctica clínica y generar datos para ensayos de comparación futura.

Automatizado Iterativo Adquisición De MS/MS: Una Herramienta Para Mejorar La Eficiencia De La Identificación De Proteínas Mediante Un Flujo De Trabajo De MS LC-MALDI

Analytical Chemistry. Aug, 2011  |  Pubmed ID: 21761829

Hemos desarrollado una herramienta información dependiente, iterativa de adquisición (IMMA) MS/MS/MS/MS eficiencia, aumentar la cobertura del proteoma y acortar el tiempo de análisis para aplicaciones de la proteómica de alto rendimiento basado en la plataforma MALDI LC MS/MS. El principio subyacente de IMMA es limitar el análisis MS/MS a un subconjunto de iones moleculares que son capaces de identificar un número máximo de proteínas. IMMA reduce redundancia de análisis MS/MS mediante la exclusión de las listas de pico precursor ion proteotypic péptidos derivados de las proteínas ya identificadas y utiliza un algoritmo de predicción del tiempo de retención para limitar el grado de falsas exclusiones. También aumenta la tasa de utilización de espectros de MS/MS mediante la eliminación de objetivos no identificables "bajo valor" como nonpeptides y péptidos grandes cargas de modificaciones, que están marcados por sus relaciones de masa de exceso-a-nominal de "nonpeptide". Para algunas muestras, IMMA aumenta el número de proteínas identificadas por ∼20 - 40% en comparación con los métodos de datos dependientes. IMMA termina una MS/MS corren el punto definido por el operador cuando "costos" (p. ej., tiempo de análisis) comienzan a invadir "beneficios" (p. ej., número de proteínas identificadas), sin conocimiento previo de la muestra contenido y complejidad. Para facilitar el análisis de muestras estrechamente relacionadas, funcionalidad de lista de inclusión de IMMA está actualmente en desarrollo.

Romper El Cuello De Botella En La Tubería De Biomarcadores De Proteínas

Clinical Chemistry. Feb, 2012  |  Pubmed ID: 22140214

Un Flujo De Descubrimiento De Lectinas Cromatografía/masa Espectrometría Identifica Posibles Biomarcadores Del Cáncer De Mama Agresivo

Journal of Proteome Research. Feb, 2012  |  Pubmed ID: 22309216

Utilizamos un lectina cromatografía/MS-enfoque basado en pantalla acondicionado medio de un panel de luminal (menos agresivo) y triple negativo (más agresivas) líneas de células de cáncer de mama (n = 5/subtipo). Las muestras fueron fraccionadas utilizando las lectinas Aleuria aurantia (AAL) y Sambucus nigra aglutinina (SNA), que reconocen la fucosa y ácido siálico, respectivamente. Las fracciones consolidadas fueron enzimático N-deglycosylated y analizan por LC-MS/MS. En total, se identificaron 533 glicoproteínas, ~ 90% de los cuales eran los componentes de la célula matriz extracelular o superficial. Observamos 1011 único glycosites, 100 de los cuales fueron detectados únicamente en líneas negativas triple ≥ 3. Análisis estadístico indicaron que varios de estos glycosites fueron triple negativo específico y así potenciales biomarcadores para este subtipo de tumor. Un análisis de datos RNAseq reveló que aproximadamente la mitad de los mRNAs de codificación de los andamios de la proteína que lleva a glycosites de biomarcadores potenciales fueron alza en triple negativo frente a líneas celulares luminal, y que un número de genes que codifican Fucosil - o sialiltransferasas fueron expresado diferencialmente entre los dos subtipos, sugiriendo que alteraciones en la glicosilación pueden conducir también identificación de candidatos. En particular, las glicoproteínas de la que se derivan estos candidatos putativos biomarcador participan en procesos relacionados con el cáncer. Así, pueden representar nuevas dianas terapéuticas para este subtipo de tumor agresivo.