また、EGFR遺伝子の増幅を含む細胞内で発現EGFRを認識DE2-7上皮成長因子受容体（EGFR）のための特定の新規モノクローナル抗体

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. Mar, 2002  |  Pubmed ID: 11920591

いくつかの点で、EGFRは腫瘍標的抗体療法のための魅力的な標的であることが表示されます：それは、多くの場合、抗腫瘍効果を誘導する上皮性腫瘍とシグナル伝達の阻害は多くの種類で過剰発現している。 EGFRに特異的な抗体の使用は、しかし、肝臓などの野生型EGFRの高い内因性レベルを持つ臓器での取り込みによって制限される場合があります。 DE2-7 EGFR（またはEGFRvIII）は神経膠腫、乳癌、肺癌、前立腺癌を含む腫瘍の種類の数だけ存在し、EGFRの天然の細胞外切り捨てです。 DE2-7 EGFRを発現する腫瘍の低い割合がこのアプローチを制限するものの、EGFRのこの腫瘍特異的変異体に対する抗体は、戦略を標的に代替手段を提供しています。我々は潜在的に腫瘍細胞の表面上に発現EGFRを標的に伴う困難を克服する新たなモノクローナル抗体（MAb 806）について説明します。モノクローナル抗体806は、高親和性（約1×10（9）M（-1））と神経膠腫細胞（U87MG.Delta 2-7）U87MGトランスフェDE2-7 EGFRに結合したが、野生型EGFRを発現する親細胞を結合しなかった。この観察結果と一致し、モノクローナル抗体806は細胞外ドメインを含む野生型EGFRの可溶性バージョンをバインドすることができませんでした。対照的に、ELISAプレートにこの細胞外ドメインの固定化は、MAb 806は特定の条件下で野生型EGFRをバインドすることができますことを示唆し、モノクローナル抗体806の結合が飽和状態と用量反応を誘発した。のMAb 806はまた、EGFR遺伝子急行EGFR大量の増幅に起因したA431細胞の表面にバインドされています。興味深いことに、モノクローナル抗体806は唯一のA431細胞によって発現される総EGFR分子の10％を認識し、結合親和性は、DE2-7 EGFRのために決定されたよりも低かった。 U87MG.Delta 2月7日移植のピークレベルとヌードマウスで成長したMAb 806特異的に標的U87MG.Delta 2-7とA431異種移植片は、注射後8時間を検出しました。親のU87MG異種移植片の特定の標的は認められなかった。 U87MG.Delta 2月7日細胞への結合に続いて、モノクローナル抗体806が急速にマクロピノサイトーシスにより内在化し、続いてリソソーム、おそらく異種移植片で観察された初期の標的ピークに寄与するプロセスに運ばれた。したがって、モノクローナル抗体806 EGFR遺伝子またはDE2-7 EGFRの増幅を含む腫瘍細胞を標的とするために使用することができますが、細胞表面に発現したときに、野生型EGFRに結合しない。

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質の結晶構造、多発性硬化症の主要自己抗原

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Sep, 2003  |  Pubmed ID: 12960396

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG）は、多発性硬化症の主な脱髄の主要CNS固有の自己抗原である。 MOGの疾患を誘発する役割が確立されているが、中枢神経系におけるその正確な機能は不明のままです。 MOGの生理的および免疫病理学的役割に新たな洞察を得るために、我々はMOG細胞外ドメイン（MOGED）の1.8型結晶構造を決定した。 MOGEDは平行頭 - 尾二量体を形成するために観察された古典的な免疫グロブリン（Ig可変ドメイン）倍を採用しています。ネイティブMOGの二量体形態が観察され、また、同種の接着受容体として機能しているモグのビューと一致して、溶液中で二量体化することが示されたMOGEDされました。 MOG35-55ペプチド、T細胞と脱髄性自己抗体の両方で認識される主要な脳炎誘発性決定因子は、部分的に二量体のインターフェイス内に吸蔵される。このキーは自己抗原の構造は、ミエリン鞘の中にモグの二量体形態と多発性硬化症で観察されるMOGの免疫寛容の破壊との関係を示唆している。

臨床免疫研究所の分析でのアプリケーションのための抗イディオタイプ抗体の生成

Hybridoma and Hybridomics. Aug, 2003  |  Pubmed ID: 14511567

キメラモノクローナル抗体ch806は、特に腫瘍関連変異体上皮成長因子受容体（デ2 7EGFRまたはEGFRVIII）を対象とし、癌治療におけるその潜在的な使用のために現在調査中です。ヒト化モノクローナル抗体hu3S193は、特にルイスY上皮抗原を標的とし、フェーズで現在進行乳癌、結腸癌、および卵巣癌患者における臨床試験Iです。 ch806とhu3S193の臨床評価を支援するために、実験室でのアッセイは、それらの血清動態を監視し、抗体への免疫応答を定量化する必要があります。 ch806またはhu3S193で免疫したマウスは、特定のch806またはhu3S193に結合し、抗原結合のために競争して抗体を産生するハイブリドーマを生成するために使用された。これらの抗イディオタイプ抗体（指定されたルートヴィヒメルボルンハイブリドーマ、LMH）がHAHAやHACA分析およびヒト血清中のhu3S193またはch806を測定するためのポジティブコントロールとして使用するのに適した試薬として検討した。同時に2標的抗体分子がLMH-3を使用して、定量の3 ng / mLの制限でhu3S193とch806の血清濃度を決定するための高い再現性、感度、特異的ELISAアッセイの開発を可能にされ、同定された結合する能力を有する抗イディオタイプそれぞれLMH-12、。 BIAコアは、両方のイディオタイプのために決定高い見かけの結合親和性を分析します。LMH-3結合では、hu3S193を固定化し、カー= 4.76×10（8）M（-1）; LMH-12結合固定化したch806、嘉= 1.74×10（9）M（ - 1）。 BIAコアを使用した血清サンプルのHAHAやHACA分析の確立は、患者血清中のhu3S193またはch806に対する免疫応答の定量のための陽性対照としてLMH-3およびLMH-12を使用して可能であった。これらの抗イディオタイプはまた、腫瘍生検の免疫組織化学的解析により、腫瘍細胞にch806またはhu3S193の浸透率との結合を研究するために使用することができます。同時に各可変ドメインのターゲット抗体を結合することができる抗イディオタイプ抗体の産生は、安全性と臨床的に投与した標的抗体の薬物動態プロファイルを評価するための高感度試薬を提供する。

細胞毒性薬、モノクローナル抗体806の抗腫瘍効果は、EGF受容体阻害剤AG1478によって強化されています

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Dec, 2003  |  Pubmed ID: 14676326

EGFRチロシンキナーゼを遅らせる細胞増殖と逮捕の特異的阻害剤で腫瘍異種移植片の成長をシグナリング上皮成長因子受容体（EGFR）の封鎖。 AG1478、EGFRチロシンキナーゼの阻害剤は、実験室での研究で使用されているが、その治療の可能性は解明されていません。したがって、我々はWTのEGFRまたはEGFR [delta2-7（DE2-7）EGFRまたはEGFRvIII]の天然のリガンド非依存性の切り捨てを発現するヒト異種移植片を有するマウスにおける抗腫瘍活性のためにAG1478の水性フォームを評価した。水溶性AG1478の非経口投与は、腫瘍部位でEGFRのリン酸化を遮断し、過剰発現WT EGFRおよび神経膠腫異種移植片は、DE2-7 EGFRを発現しているA431異種移植片の増殖を抑制した。驚くべきことに、AG1478のも治療量以下の用量では有意にヒト神経膠腫異種移植片に対して相乗的な抗腫瘍活性を表示するAG1478およびテモゾロミドの組み合わせで、細胞毒性薬の有効性を強化しました。 AG1478はまた、モノクローナル抗体806、DE2-7 EGFRに対して発生が予想外にも、EGFR遺伝子の増幅を示す細胞で発現されるEGFRのサブセットにバインドされた抗EGFR抗体との組み合わせで検討した。 AG1478及びmAb 806表示された添加剤の組み合わせ、および腫瘍異種移植片を過剰発現するEGFRに対するいくつかのケースでは相乗効果、抗腫瘍活性。ここでは、EGFRの阻害剤の異なるクラスがin vivoで相乗的な抗腫瘍活性を持つことができることを示している。これらの結果から、EGFR阻害剤AG1478の抗腫瘍効果を確立し、化学療法や他のEGFR治療の両方との組み合わせで、その臨床的評価の理論的根拠を提供しています。

CR1/CR2相互作用は、細胞表面上皮成長因子受容体の機能を調節

The Journal of Biological Chemistry. May, 2004  |  Pubmed ID: 15016810

上皮成長因子受容体（EGFR）の単離された細胞外ドメインの結晶に関する最近のデータは、リガンドによってその活性化のためのモデルを示唆している。我々は受容体活性化の調節に重要であると考えられて細胞​​外ドメインの二つの領域（CR1とCR2）に変異を導入することにより、細胞表面に表示されるフルレングスEGFRのコンテキスト内でこのモデルをテストしている。 CR1とCR2のドメイン内の変異はリガンド結合親和性、受容体の二量体、チロシンキナーゼの活性化、シグナル伝達能力への影響に反対しています。チロシン（246）は、リガンド結合後の受容体の二量体インターフェースの位置決めと安定化に関与しているCR1ループ内の重要な残基であり; Tyrの変異（246）は、受容体の機能を損なう又は廃止しなければならない。テザー（非アクティブ）状態に受容体を制限する作用を弱めるCR2の突然変異は、リガンドに対する親和性を増加させることによりEGFに応答性を向上させる。しかし、CR1/CR2相互作用の弱体化は、受容体 "キナーゼの自発的な活性化にはなりません。我々は、野生型と変異型EGFの立体構造変化を追跡する、否定的な制約、つながれた状態と完全にアクティブなバックツーバックの二量体の立体配座の間にEGF受容体の遷移状態を認識する抗体（mAb 806）、使用しているリガンド結合後の受容体である。我々の結果は、細胞表面上のEGFRが命綱をつけてすることができることを示唆しているが、このフォームがアクティブでない、したがって、受容体のuntetheringすると、アクティベーションのために十分ではありませんし、リガンド結合には、キナーゼの活性化を達成するために2つの受容体サブユニットの正確な位置決めのために不可欠です。

上皮成長因子受容体に特異的なモノクローナル抗体806のエピトープの同定は、それは優先的に受容体の無拘束フォームを認識していることを明らかに

The Journal of Biological Chemistry. Jul, 2004  |  Pubmed ID: 15075331

上皮成長因子受容体（EGFR）は多くの上皮癌で過剰発現され、観測がしばしば予後不良と相関していた。 EGFRの過剰発現は、一般的にEGFR遺伝子の増幅によって引き起こされ、時には、その細胞外ドメインの内部欠失を有する変異型EGFR（DE2-7 EGFRまたはEGFRvIII）の発現に関連付けられています。モノクローナル抗体（mAb）806は、過剰発現が、正常組織で発現重量EGFRに結合しないときにDE2-7 EGFRと野生型（wt）、EGFRのサブセットの両方を認識する重要な抗腫瘍活性を有する新規EGFR抗体である。 A431腫瘍細胞（約10％）で表される重量EGFRの低い割合にのみ結合するにもかかわらず、mAbは806はヌードマウスで栽培A431異種移植片に対して堅牢な抗腫瘍活性を表示します。独自の特異性と抗腫瘍活性のモードに至るメカニズムを解明するために、我々は、mAb 806のEGFR結合エピトープを決定した。 EGFRの断片に結合するモノクローナル抗体806の分析は、酵母の表面上またはmAb 806エピトープを含むジスルフィド結合ループ（アミノ酸287から302）を同定したイムノブロット形式のいずれかで表される。確かに、モノクローナル抗体806は、これらのアミノ酸に相当する合成ペプチドのEGFRには明らかに高い親和性（約30 nm）と結合する。 EGFRの構造の分析は、エピトープが完全にのみ発生し、受容体の過渡的な形で公開されていることを示しますので、非アクティブな係留構造からリガンドが結合したアクティブなフォームへのEGFRに変更されます。それは、mAb 806が順番に強力な抗腫瘍効果を生成し、その活性化を予防する、一時的な受容体のこの小さな割合をバインドするように思われます。最後に、我々の観察は、成長因子受容体の過渡的な形態に対する抗体の生成は抗腫瘍活性を標的とまだ維持し、正常組織を減少させる新しい方法を表すことができることを示唆している。

腫瘍特異的DE2-7上皮成長因子受容体（EGFR）は、野生型EGFRと細胞の生存を促進するとHeterodimerizes

Oncogene. Aug, 2004  |  Pubmed ID: 15221011

上皮成長因子受容体（EGFR）遺伝子の突然変異は、DE2-7 EGFR（またはEGFRvIII）最も一般的なもので、神経膠腫では比較的高頻度で発見された。この変異は、受容体の細胞外ドメインから267アミノ酸を削除しエクソン2-7のインフレーム欠失に起因しています。リガンドと結合することができないにもかかわらず、DE2-7 EGFRが恒常的に活性であり、神経膠腫細胞へのin vivo増殖の優位性に重要なを与える。 DE2-7 EGFRおよびin vitroの系での生物学的作用によって活性化シグナル伝達経路を調べるために、DE2-7 EGFR遺伝子は、マウスIL-3依存性プロ-B細胞株BAF / 3にトランスフェクトした。 DE2-7 EGFRの発現は、ホスファチジルイノシトール3 - キナーゼのアポトーシス（PI3-K）に依存した方法を減らすことにより、IL-3の非存在下でBAF / 3細胞の生存を増強した。興味深いことに、IL-3の低レベルのBAF / 3細胞のDE2-7 EGFRも強化された増殖しながら、この効果はPI3-Kとは無関係であった。 BAF / 3細胞は、DE2-7と重量EGFRをトランスフェクトされたときの生存と増殖がさらに強化されました。これは重量EGFRのトランスリン酸化につながるDE2-7と重量EGFRの間でヘテロ二量によるものであった。この観察は、DE2-7神経膠腫および重量EGFRに直接関連している共発現しているように見えます。したがって、BAF / 3細胞内DE2-7 EGFRの発現は、この受容体によって活性化シグナル伝達経路を評価するためのin vitroモデルを提供します。

転移性メラノーマ患者におけるキメラ抗GD3モノクローナル抗体KM871の免疫学的効果

Cancer Immunity : a Journal of the Academy of Cancer Immunology. Feb, 2005  |  Pubmed ID: 15723450

我々は、転移性メラノーマ患者において、キメラ抗GD3モノクローナル抗体KM871の私はトライアルオープンラベル用量漸増段階を実施しました。患者は5用量レベル（1、5、10、20、40 mg/m2を）を締結し、2週間隔でKM871の三点滴を受けた。転移性悪性黒色腫のサイトは日7月10日に生検されました。薬物動態、免疫機能、およびKM871の作用機​​序を解析した。 17人の患者の合計は、裁判に入力された15は、評価可能であった。 KM871は、10.39のELISAに基づいて、半減期（T1/2-beta）血清を持っていた+ / - 1.12 D（+ /意味 - SD）を。トラフ値> 2週のpostinfusionで1.0マイクログラム/ mLのKM871は10 mg/m2を、高用量レベルで見られた。白血球サブセットまたは血清補体レベルの有意な変化はKM871治療中にありませんでした。 KM871は、生体内で安定していた、最大2週間のpostinfusionへの結合親和性と補体依存性細胞傷害（CDC）機能を維持しています。 CDCまたは抗体依存性細胞 - 細胞傷害（ADCC）の患者における活性の有意な傾向は治療中に観察されなかった。腫瘍生検の分析は、患者の腫瘍（P = 0.010）、対照と比較して+ T細胞の浸潤CD4の有意な増加を示し、安定した疾患（2例）、またはrestagingの臨床部分寛解（1例）、有意な増加がどちらの患者にCD3とCD4に非応答以上の患者の腫瘍の浸潤が観察された。この予備的な臨床データと組み合わせるKM871の良好な免疫のプロパティは、KM871は、転移性悪性黒色腫の治療のための可能性があることを示しています。

抗腫瘍モノクローナル抗体806-過剰発現細胞受容体の細胞表面に到達するEGF受容体の高マンノースフォームを認識

FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. May, 2005  |  Pubmed ID: 15774576

EGFRの過剰発現は、一般的にEGFR遺伝子の増幅によって引き起こされ、時には、その細胞外ドメインの内部欠失を有する変異型EGFR（DE2-7 EGFRまたはEGFRvIII）の発現に関連付けられています。モノクローナル抗体806 DE2-7 EGFR過剰発現と野生型（WT）、EGFRのサブセットの両方を認識する重要な抗腫瘍活性を有する新規EGFR抗体であるが、通常の組織で発現EGFRに結合しない。最近、我々は、mAb 806エピトープは、その非アクティブから受容体の変化に応じて発生した受容体の過渡的な形式で、抗体の結合のためにのみ使用可能ですEGFRの短いシステインループ（アミノ酸287から302）に制限されていることが明らかに二量体の命綱をつけてフォームにつながれたコンフォメーション。 DE2-7 EGFR遺伝子変異に関連付けられている切り捨ては、mAb 806の増加した結合につながる、恒常的に命綱をつけ、この受容体をレンダリングします。我々は今のmAb 806が優先的に重量EGFRこの形式のも恒常的に命綱をつけていることを示す、未熟な高マンノ​​ース重量、通常は小胞体に位置DE2-7 EGFR前駆体を結合することを示しています。モノクローナル抗体806のユニークな特異性を使用して、我々は明らかに細胞表面上にこれらの高マンノース型EGFR前駆体の存在を実証した。重量EGFRの高マンノース型のフォームが命綱をつけなければならないことを考えると、彼らは細胞が過剰発現する受容体で報告されたシグナリング自発的EGFRに貢献するかもしれない。 EGFRのこれらの前駆体の形態は、このように新規な腫瘍ターゲットを表しており、癌細胞で過剰発現時にEGFRのモノクローナル抗体806の優れた選択性に貢献しています。我々の観察は、がんで過剰発現し、他の受容体に適用する可能性があるとして、彼らはターゲット受容体が正常組織に発現している場合でも、抗腫瘍抗体を開発するための戦略を示唆している。

原型上皮成長因子受容体に特異的な抗体とモノクローナル抗体の組み合わせで806のヒト腫瘍異種移植片の治療は、強化された抗腫瘍活性を生成します。

Clinical Cancer Research : an Official Journal of the American Association for Cancer Research. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16144944

モノクローナル抗体（mAb）806は、一般的にdelta2-7 EGFR（DE2-7 EGFRまたはEGFRvIII）と野生のサブセットとして知られている神経膠腫に発現した変異EGFRを認識する重要な抗腫瘍活性を有する新規な上皮成長因子受容体（EGFR）抗体である型（WT）EGFRが過剰発現する受容体の細胞に見られる。我々は、mAb 528、セツキシマブに似て特異性を有する典型的抗EGFR抗体との組み合わせでモノクローナル抗体806の有効性を調べるために2つの人間の異種移植マウスモデルを使用しています。 SCまたはモノクローナル抗体806との組み合わせで528で、重量またはDE2-7 EGFRを発現しているICの腫瘍人間の異種移植片をヌードマウスの治療は、相乗作用、抗腫瘍活性添加剤で、いくつかのケースでの結果。興味深いことに、モノクローナル抗体528は、その抗腫瘍活性が単にリガンド結合の阻害を介して媒介されていないことを示し、また、単剤として使用される場合、リガンド非依存DE2-7 EGFRを発現している移植に対して有効であった。単剤として使用する場合は、モノクローナル抗体806または528のいずれも、インビトロまたはインビボのいずれかDE2-7 EGFRのダウンレギュレーションを誘発した。対照的に、抗体の組み合わせは、in vitroおよび移植の両方DE2-7 EGFR総細胞表面に迅速かつ劇的な減少を生じた。 Ki-67の免疫染色によって測定される抗体は、in vivoでの組み合わせで使用した場合の総細胞表面におけるこの減少DE2-7 EGFRと一致し、我々は、細胞周期阻害剤P27（KIP1）と腫瘍細胞増殖の減少のアップレギュレーションが観察さ。したがって、モノクローナル抗体806他のEGFR特異的抗体は、それによって病院にその翻訳の理論的根拠を提供すると相乗作用することができます。

EGFRチロシンキナーゼ阻害剤AG1478でシグナリング上皮成長因子受容体（EGFR）の阻害により90Y-CHX-''-DTPA-hu3S193と放射免疫の増強効果

Clinical Cancer Research : an Official Journal of the American Association for Cancer Research. Oct, 2005  |  Pubmed ID: 16203806

上皮成長因子受容体（EGFR）に特異的なモノクローナル抗体とチロシンキナーゼ阻害剤は、EGFR陽性腫瘍に対する外照射の効果を高めることが示されている。放射免疫療法の有効性に関するEGFRチロシンキナーゼ阻害剤によるEGFRシグナル伝達廃止の効果は以前に報告されていない。本研究ではヒト癌異種移植モデルにおける放射免疫療法の有効性にEGFRチロシンキナーゼ阻害剤の効果を調べた。

上皮成長因子受容体のAsn-579でのグリコシル化の機能に及ぼす影響

Biochemistry. Nov, 2005  |  Pubmed ID: 16274239

我々は、上皮成長因子受容体（EGFR）のN（579）でグリコシル化の機能的効果を検討した。我々の以前の研究では、細胞表面の人口はA431細胞、ヒト類表皮癌細胞株におけるEGFRsを発現することを示したN（579）[ジェンらにグリコシル化が異なる2つの集団で構成されています。 （2003）生化学42、5478から5492]。 N（579）でグリコシル化しない受容体の集団を特徴づけるために、我々はこの位置でグリコシル化することはできませんEGFR（N579Q）の点変異体を発現32D細胞株を確立した。エピトープのアクセシビリティの分析は、N末端グリコシル化の欠如（579）は、自動抑制テザーの相互作用を弱めると、架橋実験では、野生型EGFR（相対的リガンドの不在下で予備成形N579Q-EGFRの二量体のやや高いレベルを示唆していることを示唆しているWT-EGFR）。しかし、リガンドがそのuntetheringを示唆し、N579Q-EGFRの二量体化の大部分を駆動し、必要な一方で、二量化を駆動するのに十分ではありません。リガンド結合実験は、高親和性状態のWT-EGFRsの割合に比べて高親和性状態のN579Q-EGFRsのはるかに大きな割合を明らかにした。しかし、運動団体と解離速度の違いは、WTとN579Q受容体の高親和性状態が異なっていることを示しています。 WT-EGFRsを発現する細胞で得られたものと比較してチロシンリン酸化タンパク質のパターンの顕著な違いでN579Q-EGFRs結果を発現する細胞のEGF刺激によるリン酸化。また、インターロイキン-3およびEGFの存在下で32D細胞におけるWT-EGFRs与える細胞の生存が、我々は、N（579）でグリコシル化を欠いている受容体がないことがわかった。これは、特定のN-グリコシル化部位の選択的なグリコシル化は2つの機能の​​異なる受容体を生成することができることを示すために知っているそのうちの最初の研究である。

ユニークなN末端の向きを与えるバイオセンサー固定のための自動化されたペプチドおよびタンパク質チアゾリジンカップリング·化学

Analytical Biochemistry. Jan, 2006  |  Pubmed ID: 16310754

上皮成長因子受容体の活性化：神経損傷後の反応性アストロサイトに静止アストロサイトの移行のためのアップストリーム信号

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Jul, 2006  |  Pubmed ID: 16837601

変調反応性アストロサイトの動作は、神経変性疾患のための潜在的な治療戦略である。我々は上方と上皮成長因子受容体の活性化（EGFR）は、in vivoでの視神経内の別の傷害後のアストロサイトで発生することがわかった。 EGFRの活性化は、緑内障性視神経症と他の神経疾患に関連した反応性アストロサイトとの遺伝子のほとんどの主要なマーカーを表す遺伝子と細胞プロセスを調節する。これらの結果は、EGFRの活性化は、視神経の神経傷害に応答して、反応性アストロサイトに静止アストロサイトをトリガする一般的な、調節経路、中枢神経系の、おそらく他の部分であることを示唆している。 EGFRチロシンキナーゼ阻害剤を使用して、EGFRの活性化を標的とする緑内障性視神経症のモデルにおける網膜神経節細胞の消失を防ぐことができます。これらの阻害剤が現在臨床的に使用されているため、我々の結果はneurodegenerationsの治療のための潜在的な新しいターゲットとして反応性アストロサイトへのアプローチを提示します。

上皮成長因子受容体（EGFR）チロシンキナーゼ阻害剤AG1478はInactive無拘束EGFRの二量体の形成を増加させます。モノクローナル抗体806との併用療法の影響

The Journal of Biological Chemistry. Feb, 2007  |  Pubmed ID: 17092939

アクティブでつながれたコンフォメーションとオリゴマー複合体の一部であるかもしれませんアクティブな命綱をつけて、リガンドと結合した "バック·トゥ·バック"ダイマー：上皮成長因子受容体（EGFR）は、少なくとも2つの基本的なコンフォメーションを持っています。モノクローナル抗体（mAb）806は、それだけuntethersの後、バックツーバック、連結、アクティブなオリゴマーを形成する前に、受容体の移行形態を結合するEGFR-特異的な抗体である。我々は、AG1478モノクローナル抗体806との組み合わせで使用する場合は、EGFRのチロシンキナーゼ阻害剤が、相乗的に腫瘍の過剰発現、EGFRの成長を阻害するが、このためのメカニズムは（ジョーンズ、TG、Luwor、RB、Murone、C.明らかにされていないことが示されている、ウォーカー、F.、ウェーンストック、J.、ヴィターリ、AA、ペレラ、RM、ユングブルート、AA、Stockert、E.、オールド、LJ、ニース、EC、バージェス、AW、スコット、AM（2003）論文集NATL 。ACAD。科学。アメリカ100、15871から15876）。 EGFRのコンフォメーションの即時効果とEGFR、モノクローナル抗体806の反応性を増加させることが知られているイベント-グリコシル化の下で細胞表面に、長期的増加：我々は今、2つの異なるメカニズムを介して細胞表面へのモノクローナル抗体806の結合そのAG1478の増加を示しています。架橋の研究では、自発的に急速にAG1478増加している細胞を過剰発現するEGFRの表面にモノクローナル抗体806-反応性二量体を発生の存在を実証した。彼らはモノクローナル抗体806と反応するので、これらの二量体が連結したバックツーバックの二量体とは異なるコンフォメーションに存在する必要があります。実際、我々はバックツーバックの二量体の形成に不可欠な小規模な二量体化/活性化の腕を欠いているEGFRを発現する293T細胞に類似したダイマーを検出しました。したがって、癌細胞の細胞表面上のEGFRの一部が不活性である以前に報告されていないコンフォメーションを採用して命綱をつけて二量体として存在する必要があります。この情報は、異種移植モデルではモノクローナル抗体806とAG1478の間に治療相乗効果を最適化するために使用されていました。

モノクローナル抗体Ch806ターゲティングに移行するステートと変異上皮成長因子受容体との第I相臨床試験

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Mar, 2007  |  Pubmed ID: 17360479

ヒトの癌で発現して細胞表面抗原の配列は、抗体ベースの治療の標的として同定されている。これらの抗体の大多数は、がんに対する特異性を持っていますが、正常な細胞の種類（分化抗原）の範囲に発現する抗原を認識しません。過去20年間、我々のグループは、癌特異性のマウスモノクローナル抗体の数千を分析しており、正常なヒト細胞上の限られた表現で抗体のバッテリーを同定した。これらの抗体は、ほとんどの腫瘍特異的に806だけ癌における受容体の過剰発現、変異体、またはリガンド活性化フォームにさらされている上皮成長因子受容体（EGFR）のユニークなエピトープを検出する抗体である。 in vitroでの免疫組織化学的特異性の解析でも、正常組織、野生型（WT）EGFR発現レベルの高いものとほとんど、あるいは全く検出可能な806の反応性を示しています。前臨床試験では、806が具体的に腫瘍細胞に発現し、EGFRのサブセットをターゲットとし、主にシグナル伝達経路の廃止によって、ヒト腫瘍異種移植片に有意な抗腫瘍効果を有することを実証した。現在の臨床研究は、多様な腫瘍タイプの患者では生体内分布/薬物動態解析/標的腫瘍内のmAb 806（ch806）のキメラ形態のin vivoでの特異性を調べるために設計されました。 ch806は、優れた全ての患者で腫瘍部位のターゲティング、正常組織の取り込みの証拠と、有意な毒性を示した。 in vitroおよびin ch806のin vivo特性のこれらは、EGFRを標的とすべての他の抗体からそれを区別します。

神経膠腫異種移植片に対する上皮成長因子受容体に特異的な抗体の有効性は、受容体レベル、アクティベーション状況、およびヘテロによって影響される

Clinical Cancer Research : an Official Journal of the American Association for Cancer Research. Mar, 2007  |  Pubmed ID: 17363548

上皮成長因子受容体（EGFR）に向け治療用モノクローナル抗体（mAb）の有効性に影響を与える要因は、特に神経膠腫は、比較的未知のままである。

ライゲーション上皮成長因子受容体はチロシンキナーゼ阻害剤の結合に敏感であるA431細胞におけるマイクロクラスターの中ではより高次のオリゴマーフォーム

Biochemistry. Apr, 2007  |  Pubmed ID: 17381163

ライゲーション上皮成長因子受容体（EGFR）の関連状態のキャラクタリゼーションは、腫瘍細胞の環境ではEGFRチロシンキナーゼ活性化のメカニズムを理解する上で重要である。我々は、プローブとして、AlexaFluor488とAlexaFluor546抗EGFR抗体を用いて、無傷の類表皮癌A431細胞の表面にライゲーション、immunotagged EGFRの会合状態を、詳細に、mAb528を分析した。画像相関顕微鏡は、10から30の受容体の平均を含むサブミクロンスケールのクラスタでのライゲーションEGFR（ - 平方ミクロン当たり9クラスタをクラスタの密度を意味する= 32 + / - ）の存在を明らかにした。アクセプターの関数としての生涯をベースフェルスター共鳴エネルギー移動（FRET）技術は：ドナー標識率は、ナノメートル（<10 nm）のスケール上の4つの受容体の平均を含むクラスタ内のライゲーションEGFRのクラスタリングを開示している。ナノスケールおよびサブミクロン規模の団体との関係から、ナノスケールの情報を組み合わせた新しい分析を用いて測定した寿命を検出し、画像の相関顕微鏡で得られたサブミクロンスケールの情報を使用してイメージングをFRET。この分析は、部分的に、サブ10nmのスケールに関連していた15から30の受容体を含有するモノマー（または小さなオリゴマー）と大規模なクラスタの存在を明らかにした。チロシンキナーゼ阻害剤AG1478で細胞を前処理は、サブミクロンクラスタの部分的な飛散の原因となった（クラスタの密度を意味する= 85 + / - 平方ミクロン当たり15のクラスタを、クラスタごとに協会= 4月10日受容の程度を意味する）とのレベルを減少させ検出の我々の限界までFRETが。これらの結果は部分的にキナーゼドメインによって制御されライゲーション受容体の人口の高次ナノスケール受容体の組織と一致している。腫瘍細胞環境におけるEGFR活性化のメカニズムへの結果の影響が議論されています。

ナリ、細胞内輸送、及びモノクローナル抗体806の生体内分布：新規抗上皮成長因子受容体抗体

Neoplasia (New York, N.Y.). Dec, 2007  |  Pubmed ID: 18084617

上皮性腫瘍における上皮成長因子受容体（EGFR）の過剰発現は予後不良に関連付けられており、癌治療薬の数のターゲットです。モノクローナル抗体（mAb）806は、単剤として使用される腫瘍モデルの重要な治療効果を有する新規抗EGFR抗体であり、他のEGFR治療との組み合わせで相乗的な抗腫瘍活性を表示します。他のEGFR抗体とは異なり、mAbは806は腫瘍細胞に選択的であると正常組織には結合しない、それは放射性同位体または毒素複合体の生成のための理想的な候補となっています。理想的には、これらの治療への応用に適した抗体はにバインドする必要があり、積極的にそれらの同族体を内部。我々は生きた細胞で蛍光標識モノクローナル抗体806の細胞内輸送を調査し、腫瘍の異種移植ヌードマウスモデルにおける生体内分布を解析した。 EGFRに結合した後、モノクローナル抗体806ダイナミン依存、クラスリン依存性エンドサイトーシスを介して内在化されました。内在化モノクローナル抗体806の初期エンドソームに局在し、その後、リソソーム区画と蓄積に人身売買。さらに、ヌードマウスにおける生体内分布の解析は、ヒト腫瘍異種移植片に放射標識したモノクローナル抗体806の特異的取り込みと保持を示した。これらの結果は、EGFR陽性腫瘍患​​者の診断および治療の使用に適した複合体の生成のためのモノクローナル抗体806の潜在的な使用を強調表示します。

流動誘起動脈リモデリングにシグナリングヘパリン結合性上皮増殖因子様成長因子

Circulation Research. May, 2008  |  Pubmed ID: 18436796

ヘパリン結合性上皮成長因子（EGF）様増殖因子（HB-EGF）は減少し、内皮せん断応力によって活性化とin vitroで平滑筋細胞の増殖を刺激されています。また、HB-EGFは、内膜肥厚とアテ​​ローム性動脈硬化症、低/撹乱せん断応力によって支持条件のサイトで強化されています。そこで我々は、HB-EGFはマウス頸動脈の低流動誘起負の肥大改造（FINR）に寄与するかどうかをテストされています。血流は、外科的に左に減少し、右総頸動脈に増加し​​た。 21日後、左頸動脈内膜は、メディアと外膜の肥厚、内腔狭窄を示し、HB-EGFの約50％（+ / - ）により阻害された増加円周とHB-EGFの約90％（ - / - ）マウス。 FINRまた、EGF受容体阻害剤AG1478により抑制された。 （+ / - ）およびHB-EGF（ - / - ）マウス、またAG1478によってこれとは対照的に、右頸動脈の外側に富栄養化改造は、HB-EGFの影響を受けなかった。 （ - / - ）FINR誘導増殖と白血球蓄積がHB-EGFに減少した。 FINRは増加し活性酸素種、プロHB-EGFの発現の増加と腫瘍壊死因子α変換酵素（プロ-HB-EGF sheddase）、EGF受容体のリン酸化の増加と細胞外シグナル制御キナーゼ1/2、関連付けられていたと核因子κBの活性を増加させた。 HB-EGFの削除は平滑筋細胞における核因子κBの活性化​​を廃止したのに対し、P47のアポシニンと削除（phoxの）は、FINRを阻害した。これらの知見は、HB-EGFシグナリングは低流量によって誘導される肥大改造のために必要とされ、血管壁の病気や改造に参加することが示唆された。

具体的には腫瘍関連EGFRのローカルフォールド領域を標的とする抗体

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Mar, 2009  |  Pubmed ID: 19289842

上皮成長因子受容体（EGFR）は多くのヒト腫瘍の成長を刺激に関与しているが、治療薬の成功は、正常組織におけるEGFRからの干渉によって部分的に制限されていました。以前、我々は神経膠腫によく見られるEGFRの切り捨てられた形に対する抗体（mab806）を報告しました。驚くべきことに、それはまた、腫瘍細胞上ではなく正常な細胞に完全長のEGFRを認識しています。しかし、この活動のためのメカニズムは不明であった。ファブの結晶構造：EGFR（287から302）mAb806の複合体（第二に、関連する抗体、mAb175）は、このペプチドエピトープはwtEGFRに見られるものと同様のコンフォメーションを採用することを示しています。しかし、wtEGFRについて観察された両方のコンフォメーションでは、テザーと命綱をつけ、抗体の結合は、CR1ドメインとの有意な立体的な衝突によって禁止されるでしょう。したがって、これらの抗体は、EGFRの不可解なエピトープを認識する必要があります。構造的には、エピトープの前にジスルフィド結合を破壊すると、CR1ドメインは、抗体結合のために十分に開くことができかもしれないと登場しました。 EGFR（C271A/C283A）変異体は、mAb806を結合するが、wtEGFR結合よりも有意に大きいは1:1化学量論、と結合するだけでなく。 、変異体、過剰発現、または自己分泌刺激EGFRを表示して移植でmAb806とmAb175減少し、腫瘍の成長が、どちらの抗体はwtEGFRを発現する細胞のin vitroでの増殖を阻害する。対照的に、mAb806は完全にEGFR（C271A/C283A）を発現する細胞のリガンド関連した刺激を阻害する。明らかに、wtEGFRにmAb806及びmAb175の結合エピトープはレセプターの活性化、突然変異、または過剰発現時または公開する必要があります。このメカニズムは、腫瘍細胞上の他の野生型受容体を標的とする抗体を生成する可能性を示唆している。

切り捨てられた水溶性上皮成長因子受容体-Fc融合リガンドトラップは、in Vivoで抗腫瘍活性を表示します。

Growth Factors (Chur, Switzerland). Jun, 2009  |  Pubmed ID: 19333814

小分子チロシンキナーゼ阻害剤およびモノクローナル抗体を含む治療戦略の数は、癌の治療のために軸をシグナリング上皮成長因子受容体（EGFR）をターゲットに開発されている。現在までに、治療的介入の焦点は、EGFR自体がされています。現在の研究では、哺乳動物細胞でヒトIgGのFcドメインとインフレームで融合した成熟したEGFR配列の最初の501アミノ酸を含む水溶性、EGFRリガンドトラップを組み立て、表明している。 sEGFR501.Fc指定された融合タンパク質は、EGFおよびトランスフォーミング成長因子-α（TGF-αを含むEGFRリガンドの数を競合アッセイに高い親和性を（0.4から8 nM）を示した220 kDaのジスルフィド架橋ホモ二量体として分泌された。） sEGFR501.Fcは、肺癌細胞株A549とH1437のEGFRのEGF刺激によるチロシンリン酸化を阻害し、阻害し、H1437細胞の増殖をブロックされています。 A431（類表皮癌）に由来するヒト腫瘍異種移植片を有するマウスにsEGFR501.FcとDU145（アンドロゲン非依存性前立腺癌）腫瘍細胞の投与は、腫瘍の成長の緩やかな遅延をもたらした。これらの結果は、高親和性可溶性受容体を使用することを阻害するマルチリガンドシステムの実行可能なメソッドと、このアプローチを最適化し、高い親和性と広範な特異性を有する試薬を開発するための原動力であることを証明の原理を提供しています。

癌遺伝子中毒の可塑性：受容体チロシンキナーゼに監督標的治療への示唆

Neoplasia (New York, N.Y.). May, 2009  |  Pubmed ID: 19412429

多形性膠芽腫における上皮成長因子受容体（EGFR）（GBM）の一般的な変異はDE2-7 EGFR（またはEGFRvIII）と呼ばれる細胞外の切り捨てです。肝細胞増殖因子（HGF）の受容体チロシンキナーゼ（RTK）はc-Metのリガンドであり、このシグナル伝達軸はしばしばGBMでアクティブになっています。 HGF / c-Metの軸またはDE2-7 EGFRの発現は独立して、特にホスファチジルイノシトール3キナーゼ/ pAkt経路を介して、GBMの成長と侵襲性を向上させます。 RTKアレイを使用して、我々はGBM細胞をU87MGにDE2-7 EGFRの発現を示し、血小板由来増殖因子受容体βとc-Metを含むいくつかの増殖因子受容体の同時活性化につながる。 HGF（AMG102）に対する中和抗体は、リガンド非依存であることを実証し、c-MetのDE2-7 EGFR媒介活性化を阻害しなかった。 U87MG.Delta 2月7日異種移植片は深く耐性であったのに対し、AMG 102と親のU87MG異種移植の治療は、腫瘍増殖の有意な阻害をもたらした。異種移植が急速にHGF / c-Metのシグナル伝達経路に戻ったとしてパニツムマブ、抗EGFR抗体とU87MG.Delta 2月7日移植の治療は、部分的にしか腫瘍の増殖を抑制した。パニツムマブおよびAMG 102とCotreatmentは、発癌性ショックの誘導と一致して、アポトーシス機構を介して重要な腫瘍抑制につながる、このエスケープを防止した。この観察は、GBM患者の治療のための組み合わせでパニツムマブおよびAMG 102を使用するための理論的根拠を提供します。これらの結果は、GBM細胞は急速に同じ下流の経路を介して別のRTKシグナルの場合、その癌遺伝子中毒を駆動するRTKを変更することができますことを示しています。その結果、標的療法によって支配的な癌遺伝子の阻害は、急速な治療抵抗性の結果RTKの階層を変更することができます。

モノクローナル抗体806アクティブのNF-κBと新入会の腫瘍血管の正規化したユニークなEGFRエピトープを標的と

Journal of Cellular and Molecular Medicine. Sep, 2009  |  Pubmed ID: 19432811

しばしばpathogenetically過剰発現または上皮性悪性腫瘍と神経膠腫で変異しているモノクローナル抗体（mAb）と上皮成長因子受容体（EGFR）を標的とするチロシンキナーゼ阻害剤は、ヒトでの使用が承認いくつかを、控えめに成功しています。モノクローナル抗体806 DE2-7EGFR（またはEGFRvIII）、神経膠腫に発現し、構成的に活性な変異に対して発生だけでなく、それはオートクラインループ、過剰発現または突然変異によって活性化される野生型（WT）EGFRのサブセット（<10％）を認識しました。それは、肝臓のような正常組織で不活性なEGFRに結合しない。モノクローナル抗体806のショー減少受容体の自己リン酸化で処理DE2-7EGFRを発現する神経膠腫異種移植片は、P27（KIP1）と減少し、細胞増殖を増加させた。過剰発現または分泌リガンドによって活性化さwtEGFRを発現している異種移植片は、モノクローナル抗体806によって阻害されていますが、阻害のメカニズムは、mAb 806はin vitroでリン酸化wtEGFRまたは下流のシグナル伝達を妨げることはありません特にないため、解明することは困難であった。したがって、我々は、A431異種移植片の血管新生にモノクローナル抗体806の影響を調べた。モノクローナル抗体806のNF-κBを活性化することにより、血管内皮増殖因子（VEGF）とインターロイキン8産生を増加し、腫瘍血管系を正規化します。 NF-κBの薬理学的阻害は完全にNF-κBの活性化​​は、移植での抗腫瘍機能のために必要であることを実証し、モノクローナル抗体806の活性を廃止。 VEGFの増加を考えると、我々は、添加剤の活動、その結果、in vivoでベバシズマブとモノクローナル抗体806を組み合わせた。

フュンSRCが神経膠芽腫患者における発癌性上皮成長因子受容体シグナリングのエフェクターである

Cancer Research. Sep, 2009  |  Pubmed ID: 19690143

活性化上皮成長因子受容体（EGFR）の変異は、神経膠芽腫を含む多くの癌では一般的である。しかし、EGFR阻害剤に対する臨床反応はまれであり、短命である。私たちは、Srcファミリーキナーゼ（SFK）フュンSrcは侵略およびin vivoで腫瘍細胞の生存率を高め、発がん性EGFRシグナル伝達のエフェクターであることを示している。構成的に活性なEGFR変異、EGFRvIIIの発現は、腫瘍の成長と運動性を促進し、リン酸化およびSrcおよびFynとの物理的会合を活性化をもたらした。フュンSrcの限られたEGFRおよびEGFRvIII依存性腫瘍細胞の運動性の遺伝子サイレンシング。 SFK阻害剤ダサチニブが大幅に内因性のEGFRvIIIを発現している同所性神経膠芽腫モデルの生存期間を延長する、浸潤、腫瘍退縮を促進し、in vivoでアポトーシスを誘導を阻害した。ダサチニブは、さらに腫瘍の成長を制限し、生存を延長する、生体内で抗EGFRモノクローナル抗体（mAb 806）の有効性を強化しました。臨床サンプルの大規模コホートの検査は、神経膠芽腫患者におけるEGFRとSFKs頻繁に同時活性化を示した。 EGFRは、in vivoで腫瘍の進行、浸潤を促進し、結合された抗EGFRと抗SFK標的療法の理論的根拠を提供するために、FynおよびSrcの活性化とシグナル伝達リンク機構を確立し、これらの結果。

124I-IMP-R4-標識抗体Ch806を使用した神経膠腫におけるDE2-7上皮成長因子受容体発現の免疫-PET定量

Journal of Nuclear Medicine : Official Publication, Society of Nuclear Medicine. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 20484439

過剰発現、活性化し、上皮成長因子受容体（EGFR）の変異は、一般的に固形腫瘍で発見されています。本研究の目的は、疾患の進行および神経膠腫における化学療法と放射線療法に抵抗性に関連付けられている構成的に活性な変異体DE2-7 EGFRを検出するためのPETベースの方法を開発することでした。

モノクローナル抗体806 DE2-7上皮成長因子受容体を発現する神経膠腫異種移植片の電離放射線の有効性を強化

International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. Oct, 2010  |  Pubmed ID: 20638193

上皮成長因子受容体（EGFR）の変異は、神経膠腫では一般的である。最も頻繁に突然変異、DE2-7 EGFR / EGFRvIIIは、高悪性度神経膠腫の約40％に発生し、電離放射線（IR）に対する耐性を付与する。我々は以前のmAb 806、小説EGFR特異的抗体は、DE2-7 EGFRを発現U87MG.Δ2-7神経膠腫異種移植片の増殖を阻害するために、治療としての可能性を持つことが可能であることが示されている。

腫瘍の不均一性は、神経膠芽腫における変異EGFR誘発性サイトカイン回路によって維持されアクティブなプロセスです。

Genes & Development. Aug, 2010  |  Pubmed ID: 20713517

ヒト固形腫瘍は、しばしば組織学的、遺伝、遺伝子発現レベルの両方の腫瘍細胞と正常細胞の顕著な不均一性を持っています。現在の努力がはるかに少ない、腫瘍細胞と周囲の正常細胞との間のヘテロタイプ相互作用を理解することに焦点を当てている間に腫瘍内で異種の腫瘍細胞間の相互作用について知られている。神経膠芽腫多形（GBM）、上皮成長因子受容体遺伝子（EGFR）の増幅および変異（EGFRvIII / DeltaEGFR）で常に異種の方法で表現された署名病原イベントです。驚くべきことに、野生型EGFR（wtEGFR）よりも、その大きな生物学的活性にもかかわらず、両方の増幅した受容体を発現する個々のGBM腫瘍は一般的にDeltaEGFR病変よりもはるかに豊富でwtEGFRを表現しています。我々はマイナーDeltaEGFR発現集団が腫瘍全体の細胞集団の腫瘍原性を高めるという仮説を立て、それによって別の細胞内で2つの受容体の形態の発現の不均一性を維持しています。だけでなく、不死化マウスのアストロサイトと神経膠腫細胞の混合物を使用して、我々はDeltaEGFRによって駆動されるパラクリン機構が募集wtEGFR発現in vivoでの加速増殖への細胞の主要な手段であることを示している。急行IL-6および/または白血病阻害因子（LIF）サイトカインは、各急行DeltaEGFRているアストロサイト（ - / - ）我々はヒト神経膠腫組織、神経膠腫細胞株、グリオーマ幹細胞、不死化マウスInk4a/Arfを決定した。順番に腫瘍増殖の増強率につながる、隣接セルでwtEGFRを活性化するこれらのサイトカインは、gp130をアクティブにします。 IL-6、LIF、またはgp130とuncouplesこの細胞のクロストークを切除し、強力に腫瘍の成長の強化を減衰させます。これらの知見は、マイナーの腫瘍細胞集団が強力に腫瘍全体の質量の加速成長を促進し、それによって積極的に腫瘍塊内の腫瘍細胞の不均一性を維持することができるビューをサポートしています。遺伝的に異なる癌細胞の間にこのような相互作用は、治療介入の新たなポイントを提供することができます。

Srcの活性化は神経膠腫細胞のDE2-7EGFR（EGFRvIII）のミトコンドリア局在を誘導：糖代謝に対する影響

Journal of Cell Science. Sep, 2011  |  Pubmed ID: 21878501

神経膠腫における上皮成長因子受容体の共通の変異はDE2-7EGFR（またはEGFRvIII）です。 DE2-7EGFRを発現する神経膠腫細胞は、遅延処理と一貫性のあるマンノース糖鎖の高レベルの受容体の細胞内プールが含まれています。我々は今、この遅延がゴルジ体で起こることを示しています。 DE2-7EGFRの低レベルはまた、ミトコンドリア内で見られた。その薬理学的阻害は、有意な減少を引き起こしたのに対し、Srcの活性化が劇的に、ミトコンドリアのDE2-7EGFR量を増加させた。 DE2-7EGFRはY845でのSrcによりリン酸化されているので、我々はY845F修飾DE2-7EGFRを発現する神経膠腫細胞を生成します。 DE2-7EGFR（845F）変異体は、恒常的活性はSrcと共発現する場合でも、ミトコンドリア局在を示すことに失敗しました。受容体を発現するDE2-7EGFRのグルコース強化されたミトコンドリア局在し、神経膠腫細胞の低レベルは、これらの条件下で増加した生存と増殖を示した。これと一致して、DE2-7EGFRは、ミトコンドリアの酸化的代謝を刺激することにより、グルコース依存性を減少させた。したがって、DE2-7EGFRのミトコンドリア局在は、その腫瘍形成に寄与し、いくつかのEGFR標的治療薬への抵抗を説明するのに役立つかもしれません。

Srcファミリーキナーゼ仲介EGFRvIII駆動型膠芽腫の腫瘍形成によってチロシン残基のY722における細胞質分裂1（DOCK180）の献上のリン酸化

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Feb, 2012  |  Pubmed ID: 22323579

神経膠芽腫は、脳の最も一般的な原発性悪性癌は、脳全体の急速な腫瘍の増殖と腫瘍細胞の浸潤によって特徴付けられる。これらの特性は、神経膠芽腫は、得られた予後不良と現在の治療に非常に耐性があることが原因となります。そのようなEGF受容体（EGFR）遺伝子増幅と変異として署名の遺伝的変化によって駆動される異常な発癌性のシグナル伝達が、神経膠芽腫の発症に大きな役割を果たし、責任下流のメカニズムはあまりはっきり残っています。ここで、我々はEGFRvIII（またΔEGFRとDE2-7EGFRとして知られている）、頻繁にヒト神経膠芽腫におけるEGFRと共過剰発現している構成的に活性なEGFRの変異体は、Srcのファミリーキナーゼ（SFK）依存DOCK180のリン酸化を介して腫瘍形成を促進することを報告するRac1のためのヌクレオチド交換因子のグアニン。 EGFRvIIIは、チロシン残基722（DOCK180（Y722））でDOCK180のリン酸化を誘導し、Rac1のシグナリング、神経膠芽腫細胞の生存と遊走を刺激する。これは因果関係であると一貫し、DOCK180（Y722F）変異体のDOCK180または式のsiRNAのノックダウンは、これらのEGFRvIII刺激の活動のそれぞれを阻害する。 SFKsは、src、フュン島と、Lynは、DOCK180（Y722）のリン酸化および薬理学的阻害またはshRNAの枯渇によって、これらのSFKsの阻害を誘発する著しくEGFRvIIIによって誘発されるDOCK180（Y722）のリン酸化、Rac1の活性、および神経膠芽腫細胞の遊走を減衰させます。最後に、リン酸化されたDOCK180（Y722）は、臨床検体でEGFRvIIIとリン酸化SRC（Y418）と共発現させ、そのような共発現は、神経膠芽腫患者の非常に貧しい人々の生存と相関しています。これらの結果は、SFK-P-DOCK180（Y722）を標的にすること、Rac1のシグナル伝達経路は、EGFRvIIIの過剰発現と神経膠芽腫のための新たな治療戦略を提供することを示唆している。