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Articles by Timothy L. Denning in JoVE
JoVE Immunology and Infection
L'isolement et la caractérisation des cellules dendritiques et les macrophages de l'intestin de souris
1Department of Pediatrics, Emory University, 2Department of Pathology & Laboratory Medicine, Emory University
Ici, nous détaillons une méthode pour l'isolement rapide des cellules dendritiques de souris intestinales (DCS) et les macrophages. Caractérisation phénotypique des CD intestinales et les macrophages est effectuée en utilisant plusieurs couleurs d'écoulement analyse cytométrique tandis magnétique enrichissement bourrelet suivie par tri cellulaire est utilisé pour donner des populations de grande pureté pour des études fonctionnelles.
Other articles by Timothy L. Denning on PubMed
Cutting Edge: CD4 + CD25 + Cellules T Régulatrices Douteux Pour Homing Intestinale Peut Prévenir La Colite
Transfert de CD4 (+) CD45RB (élevé) des cellules T dans RAG (- / -) des souris provoque une colite, qui peuvent être évitées par le CD4 (+) CD25 (+) des cellules T régulatrices (Treg). Induction de la colite par le CD4 (+) CD45RB (élevé) des cellules T nécessite bêta (7) de l'intégrine-dépendante localisation intestinale, mais l'importance de la bêta (7) pour la fonction des intégrines Treg est inconnue. Dans cette étude, nous montrons que le bêta (7) (- / -) Treg ont été efficaces dans la prévention de la colite. Treg élargi in vivo dans la même mesure que CD4 (+) CD45RB (élevé) des cellules T après le transfert et ils n'ont pas inhibent CD4 (+) CD45RB (haute) l'expansion des cellules T dans les tissus lymphoïdes, même si ils ont empêché l'accumulation des cellules Th1 effectrices dans l'intestin. bêta (7) (- / -) Treg ont été significativement réduites dans le gros intestin, toutefois, par rapport avec le type sauvage Treg, et de l'activité réglementaire n'a pas pu être récupéré à partir de l'intestin des bénéficiaires de la bêta (7) (- / -) Treg . Ces données démontrent que les Treg peuvent empêcher la colite en inhibant l'accumulation de tissu de recherche de cellules effectrices et que l'accumulation de Treg dans l'intestin n'est pas indispensable pour la suppression de la colite.
Zymosan Levure, Un Stimulus Pour TLR2 Et Dectin-1, Induit Des Cellules Présentatrices D'antigène Réglementaires Et La Tolérance Immunologique
Des preuves nouvelles suggèrent un rôle crucial pour TTB pour supprimer la réponse immunitaire. Ici, nous montrons que zymosan, un stimulus pour TLR2 et dectin-1, régule la sécrétion de cytokines dans les PED et les macrophages pour induire la tolérance immunologique. Tout d'abord, le zymosan induit DCs sécrètent abondante IL-10, mais peu IL-6 et IL-12(p70). Induction d'IL-10 dépend de l'activation de TLR2 - et dectin-1-mediated de ERK MAPK via un mécanisme indépendant de la protéine d'activation 1 facteur de transcription (AP-1) c-Fos. Ces contrôleurs de domaine stimulent les cellules CD4 + T antigène-spécifiques mal à cause d'IL-10 et l'absence d'IL-6. Deuxièmement, le zymosan induit F4-80 + macrophages dans la pulpe splénique rouge à sécréter des TGF-bêta. Conformément à ces effets sur TTB, injection de zymosan plus d'ovules chez la souris se traduit par des cellules T spécifiques ovules qui sécrètent des cytokines Th1 ou Th2 peu ou pas, mais qui sécrètent des niveaux robustes d'IL-10 et ne répondent pas au défi avec ovules plus adjuvant. Enfin, la coinjection de zymosan avec ovules plus LPS supprime la réponse aux ovules par un mécanisme dépendant de l'IL-10, TGF-bêta et manque d'IL-6. Ensemble, nos résultats démontrent que zymosan stimule IL-10 + IL-12(p70)-IL-6low DCs réglementaires et TGF-bêta + macrophages pour induire la tolérance immunologique. Ces données suggèrent plusieurs objectifs pour la modulation pharmacologique des réponses immunitaires dans divers contextes cliniques.
Souris TCRalphabeta + De Lymphocytes Intra-épithéliales CD8alphaalpha Exprimer Des Gènes Ce Réguler à La Baisse Leur Réactivité De L'antigène Et De Supprimer Les Réponses Immunitaires
Lymphocytes de souris intra-épithéliales de l'intestin grêle (IEL) qui expriment alphabetaTCR et homodimères CD8alphaalpha sont un sous-ensemble T énigmatique cellule, comme leur spécificité et leur fonction in vivo restent à définir. Pour mieux comprendre la nature de ces cellules, nous avons effectué mondiale profilage de l'expression des gènes en utilisant l'analyse des microréseaux combinées en temps réel de PCR quantitative et cytométrie de flux. L'utilisation de ces méthodes, TCRalphabeta (+) CD8alphaalpha IEL ont été comparés avec leur TCRalphabeta (+) CD8beta (+) et TCRgammadelta (+) homologues. Fait intéressant, TCRalphabeta (+) CD8alphaalpha IEL ont été trouvés à exprimer des gènes préférentiellement qui seraient attendus à bas moduler leur réactivité. Ils ont un profil d'expression unique de membres de la famille des récepteurs NK Ly49 et ont tendance à exprimer des récepteurs inhibiteurs, ainsi que certains récepteurs activateurs. Le mécanisme de signalisation des deux TCRalphabeta (+) CD8alphaalpha et TCRgammadelta (+) IEL est construit différemment que les autres et IEL cellules T périphériques, comme en témoigne leur faible niveau d'expression de l'éditeur de liens pour l'activation des cellules T et la haute expression de la non- lieur l'activation des cellules T, qui inhibe l'activation des cellules T. Le TCRalphabeta (+) CD8alphaalpha IEL sous-ensemble a également augmenté l'expression de gènes qui pourraient être impliqués dans la régulation immunitaire, y compris le TGF-beta (3) et l'activation des lymphocytes gène-3. Collectivement, ces données soulignent le fait que, tandis que TCRalphabeta (+) CD8alphaalpha IEL ressemblent TCRgammadelta (+) IEL, ils constituent une population unique de cellules avec Ag réactivité réglementé qui pourraient avoir la fonction de réglementation.
