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Articles by Tom Le in JoVE
JoVE Clinical and Translational Medicine
의 마우스 모델 Utero에 이식
1Department of Surgery, University of California, 2Eli and Edythe Broad Center of Regeneration Medicine and Stem Cell Research, University of California, 3Biomedical Sciences Program, University of California
의 마우스 모델
Other articles by Tom Le on PubMed
혈관 내 피 성장 인자 종속성 및 Angiopoietin-1-유도 소성 성인 혈관의 나이 관련 변경
혈관 내 피 성장 인자 (VEGF)와 angiopoietin-1 (Ang1) 혈관 개발에 대 한 중요 하지만이 종속성 성인 생활에 유지를 하지 생각 되었습니다. 이 연구에서 우리는 4, 8 및 16 주 된 쥐, VEGF의 억제제 VEGF 트랩으로의 체계적 치료 10 일 후 tracheal 점 막 모세 혈관의 수는 감소 39%, 28%, 14%로 각각 보고 합니다. 나 이와 함께 감소 크기 감소 (r2 = 0.6, P < 0.001), 16 주 여전히 상당한 했다. 혈관 내 피 성장 인자 수용 체-2 (VEGFR-2) immunoreactivity에서 해당 연령 관련 감소가 나왔다 감소 VEGFR 2 식 억제 신호 VEGF에 대 한 저항에 기여할 수 있습니다. VEGF 트랩 추가 감소 tracheal 모세 혈관에 VEGFR 2 식. 비교 함으로써, 아 데 노 바이러스 Ang1 인코딩 체계 치료 tracheal venules 작은 나이 효과 (64%, 56%, 49% 증가 10 일 내에 직경에서)의 중대 한 확대를 이끌었다. Ang1 함께 VEGF 트랩 주어졌다, tracheal 선박 Ang1 효력은 VEGF 중재 아직 ang1의 가장 오래 된 그룹 tracheal 모세 혈관에서 VEGF 트랩 유발 감소 예방에 의해 심판을 보호 효과를 보인다 페이지 각 요인의 일반적인 응답 표시. 함께, 이러한 연구 결과 VEGF와 Ang1 혈관 생존과 성인 생활에서가 소성에 참여를 나타냅니다.
Angiopoietin-1 Venules 내 피 간격의 수와 크기를 줄임으로써 플라즈마 누설을 감소 시킵니다
Angiopoietin-1 (중앙-1) 기본 혈관 신경 총의 모집 벽 세포의 배아 발달 동안 개장을 위해 필수적 이다. 성인 혈관 중앙 1 염증, 플라즈마 누설을 줄일 수 있습니다 하지만이 작업을이 수행 하는 메커니즘은 잘 이해 되지 않습니다. 현재의 연구에서 우리는 규모와 생쥐의 기도에 중앙-1 antileak 효과의 셀룰러 메커니즘 결정. 주사 bradykinin 형광 microspheres (지름 25-1000 nm)의 누설 tracheal venules에서 결과. 누설 3-4 분에 만족 하 고 10 분 여 해결 고해상도 confocal 현미경 검사 법 공개 새는 venules의 세포 접합부에 초점 간격의 존재. 유전자 조작 중앙 1 *, 간 adenoviral 변환에 의해 체계적으로 전달, 69 %bradykinin 후 500 nm microspheres의 누설을 감소. 내 피 간격의 수와 크기의 감소와 동시에 누출의 감소. Venular 표면 내 피 격차에 의해 점령의 비율이 61% 감소 했다. Microsphere 누설 갭 번호와 크기와 강하게 상관 (r2 = 0.89). 함께 결과 중앙 1 수를 제한 하 여 염증이 venules에서 누설을 줄일 수 및 크기의 간격 그 양식을 통해 세포내 신호, cytoskeleton, 및 접합 관련 분자에 대 한 효과 접합부 내 피 세포에서 것이 좋습니다.
회귀 후에 VEGF 시그널링의 저해를 받고 정상적인 혈액 모 세관의 세포 변화
태아의 혈관 개발 하는 동안 혈관 내 피 성장 인자 (VEGF)를 필요로 하지만 가장 성인 혈관 VEGF 의존도 잃게됩니다. 그러나, 일부 모세 혈관 호흡 기관에 VEGF 저해 후 성인 쥐 되 돌아감의 다른 장기를 선택 하 고. 현재의 연구 VEGF 수용 체 티로신 키 니 아 제 억제제 AG 013736와 차단 된 VEGF 신호 또는 수용 성 수용 체 (VEGF 트랩 또는 수용 성 adenoviral VEGFR 1)을 생성 한 후 마우스 tracheas 모 세관 회귀 하는 동안 이벤트의 시퀀스 및 내 피 세포, pericytes, 및 혈관 지 막 운명 식별 하고자 했다. 1 일 이내 patency 손실 되었고 일부 tracheal 모세 혈관에 축적 된 섬유 소. Apoptotic 내 피 세포에 의해 활성화 된 caspase 3 표시 혈 없이 모세 혈관에 존재 했다. VEGF 저해 19% 감소 tracheal 모세 혈관에서 7 일 및 30% 이상 21 일 동안 함께 했다. 이 기간 동안 desmin/NG2 immunoreactive pericytes에서 살아남은 혈관에 역행 모세 혈관으로 이동. 내 피 역행에 의해 남겨진 지하실 막의 빈 소매 셀, 약 2 주 지속 하 고 혈관 자라나는 치료 종료 후에 대 한 비 계로 제공. 자라나는 금액 수에 의해 제한 되었다 지하실 막 소매를 살아 나 기의. 이러한 연구 결과 보여줍니다, 자라나는 모 세관을 용이 하 게 수 억제 VEGF 시그널링, 일부 정상적인 모세 혈관 혈액 흐름의 중단에 의해 시작 하 고 마이그레이션 역행 혈관에서 pericytes의 내 피 세포의 apoptosis를 이어서 사건의 체계적인 순서로 순환 및 빈 지하실 막의 형성 슬리브의 후.
종양 혈관 Pericytes 및 혈소판 유래 성장 인자 B 선택적 Aptamer Ax102에 의해 억제 후 내 피 세포의 순차 손실
파생 된 혈소판 성장 인자 (PDGF)의 저해 다른 암 치료제의 효능을 높일 수 있습니다 하지만 셀룰러 메커니즘은 불완전 하 게 이해. 우리는 새로운 DNA oligonucleotide aptamer (AX102)는 선택적으로 PDGF B.의 종양 혈관에 세포 효과 검사 치료 ax102와 pericytes, PDGF 수용 체 베타, NG2, desmin, 또는 알파-부드러운 근육 말라 immunoreactivity 루이스 폐 carcinomas에서 식별의 진보적인 감소를 이끌었다. 28 일 85% 35%에서 2 일, 7 일에 63%에서 원거리 감소. 대부분의 종양 혈관을 7 일 후에 pericytes 부족 되돌아간. 전반적으로 종양 vascularity 종양 크기에 해당 감소 없이 28 일 동안 79% 감소. Pericytes 및 내 피 세포의 회귀 빈 지하실 막 소매, 7 일에 볼 수 있었던, 아니라 54%만 28 일이 남아 있었다. PDGF B 저해 RIP Tag2 유전자 변형 생쥐, 어디 pericytes 47% 감소, vascularity 38% 감소 및 지하실 막 소매 28 일 동안 21% 감소에서 췌 장 섬 종양에 덜 뚜렷한 영향을 미쳤다. 함께 찍은, 이러한 연구 결과 보여 PDGF B 신호 억제 종양 혈관의 회귀를 끌 수 있지만 진도 특정 종양 이며 반드시 종양의 성장을 지체 하지 않습니다. 종양에 pericytes의 손실 PDGF B 봉쇄의 예상된 직접적인 결과 이지만 종양 감소 vascularity pericyte 회귀 보조 될 가능성이 높습니다.
모성 T 셀 제한 마우스에 Utero에서 조 혈 세포 이식 후 Engraftment
임신 초기 태아에 allogeneic 줄기 세포 이식 치료 utero에서 조 혈 세포 이식 (IUHCTx) 되 나, 잠재적으로 골 수 이식, 이식 거부 및 거부를 방지 하는 데 필요한 만성 면역 억제 등의 한계를 극복할 수 있습니다. 그러나, Iuhctx의 임상 사용은 이식에 대 한 호스트 면역 반응으로 인해 가난한 engraftment에 의해 방해 되어 있다. 태아 면역 체계가 상대적으로 중 년 이후, 우리는 모성 세포 태아에 밀매 효과적인 Iuhctx을 진정한 배리어를 포즈 수 있습니다 가설. 여기, 우리 IUHCTx 후 인신 매매 T 세포에 상당한 증가와 unmanipulated 마우스 태아의 혈액에서 모성 백혈구의 macrochimerism는 설명 했다. IUHCTx 후 거절이 모성 세포의 기여를 확인 하려면 자란 야생-타입 아버지 T 및 B 세포 불충분 한 어머니 하 고 immunocompetent 태아에 allogeneic Iuhctx를 수행. 어머니 부족 T 세포만 아니라 B 세포, 모성 T 세포는 engraftment에 대 한 주요 장벽 나타내는 경우 engraftment에 표시 되어 있는 개선이 했다. 또한, 어머니는 이식 일치는 engraftment syngeneic 및 allogeneic 태아 받는 사람 사이에서 차이가 있었다. 우리의 연구는 Iuhctx의 임상 성공 어머니와 일치 하는 세포를 이식 하 여 향상 시킬 수 있습니다 나왔다.
Pericyte 요구 사항 Angiopoietin-1 및 혈관에 개장 Anti-leak 행동에 대 한 지속적인 염증
혈관 시키는 급성 염증 조기, 일시적인 이벤트 이지만 혈관 수술 지속적인된 염증에 리 모델링으로 유지할 수 있습니다. Angiopoietin/Tie2 신호 시키는 내 피 세포의 변화를 통해 줄일 수 있습니다. 이 작업에서 pericytes 역할의 알 수 있다. 선택적 PDGF B 차단 oligonucleotide aptamer pericyte 내 피 크로스 토크의 중단 혈관 시키는 또는 개장 하는 생쥐의 기도에 아래 4 가지 조건 변경 여부를 확인 하려면 ax102을 사용 했습니다: i) 초기, ii) 급성 염증 bradykinin, Mycoplasma pulmonis 호흡기 병원 체에 의해 감염 7 일 후 3) 지속적인된 염증 또는 iv) angiopoietin-1 (Ang1)에 의해 혈관 안정화 존재 bradykinin 도전 후 누설에 의해 유도 된 모방 7 일에 대 한 보상-Ang1. AX102 pericyte 범위 감소 하지만 microspheres tracheal 혈관 기준선 또는 bradykinin; 후의 누설을 변경 하지 않았다 그러나, AX102 M. pulmonis 감염 후 7 일 내에 누설을 과장 하 고 14 일 내에 혈관을 개장 하 고 질병의 심각도 증가. Ax102는 또한 7 일에 완 Ang1 antileakage 효과 폐지. 함께, 이러한 연구 결과 pericyte 역학 관 리 모델링을 동반 하는 경우 내 피 안정성을 pericyte 기여는 지속적인된 염증, 개발 하는 동안 큰 의존도 PDGF B 표시 보다 초기 조건 하에서 또는 급성 염증. 연구 결과 또한 ang1의 antileakage 작업 해야 내 피 안정성을 유지 하는 pericytes의 PDGF 종속 작업 보여 줍니다.
모성 면역 반응 억제 Utero에서 조 혈 세포 이식 성공
Utero에서 조 혈 세포 이식 (IUHCTx)은 선 천 성 줄기 세포 장애의 치료에 대 한 유망 전략 이다. 태아의 면역 시스템의 의도적인된 미 숙에도 불구 하 고이 전략의 임상 성공 이식된 세포의 빈약한 engraftment에 의해 제한 되었습니다. 태아 숙주 면역 체계 성공적인 Iuhctx를 달성 하는 데 주요 장벽 생각 된다. 그러나 태아의 면역 체계가 성숙 이후,, 우리가 가설는 모성 면역 반응 대신 IUHCTx 진정한 장벽 포즈 수 있습니다. 우리는 모자 T allogeneic utero에서 이식 후 태아에 트래픽을 세포는 고 이러한 lymphocytes engraftment 제한에 중요 한 역할을 증명 하고있다. 또한, 우리 어머니 기증자 세포와 일치 하는 MHC 향상 engraftment 일치 하지 않는 태아에 나타났습니다. 이러한 결과 태아 환경을 사용 하 여 선 천 성 줄기 세포 장애를 가진 환자 치료에 관심을 갱신 하는 데 도움이.
