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Articles by Toni G. Patton in JoVE

 JoVE Immunology and Infection

Speichel, Speicheldrüse, und Hämolymphe Abholung Ixodes scapularis Zecken


JoVE 3894 2/21/2012

1Microbiology and Pathogenesis Activity, Bacterial Diseases Branch, Division of Vector-Borne Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention, 2Tick-Borne Diseases Activity, Bacterial Diseases Branch, Division of Vector-Borne Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention

Die Sammlung von infizierten Zecke Hämolymphe, Speicheldrüsen, und Speichel ist wichtig, zu untersuchen, wie durch Zecken übertragene Erreger eine Krankheit verursachen. In diesem Protokoll haben wir demonstrieren, wie man Hämolymphe und Speicheldrüsen von der Fütterung sammeln

Other articles by Toni G. Patton on PubMed

Der Staphylococcus Aureus CidAB Operon: Bewertung Seiner Rolle in Der Regulation Der Murein Hydrolase-Aktivität Und Penicillin Toleranz

Essigsäure Induziert Die Expression Von Staphylococcus Aureus Und CidABC LrgAB Murein Hydrolase Regler Operons

Der Staphylococcus Aureus CIDC Gen Kodiert Für Ein Pyruvat-Oxidase, Die Acetat-Stoffwechsel Und Den Zelltod in Der Stationären Phase Beeinflusst

Ein LysR-Typ Regulator, CIDR, Ist Für Die Induktion Des Staphylococcus Aureus CidABC Operon Erforderlich

Die Rolle Der Proton Motiv Kraft Im Ausdruck Von Staphylococcus Aureus Cid Und Lrg Operonen

Die Staphylococcus-Aureus-CidABC und LrgAB-Operone haben eine Schlüsselrolle bei der Regulation des Murein Hydrolase-Aktivität und Zelle Tod in einer Weise angenommen, dass analog zu Bakteriophage-codierte Holins und Anti-Holins bzw. erwiesen. Aufgrund dieser Funktionen wurde vorgeschlagen, dass die Verordnung von diese Operonen streng kontrollierten und auf wichtigen metabolischen Signale reagieren. Die aktuelle Studie ergab das Vorhandensein von zwei überlappende Regulationsmechanismen, die Steuerung von CidABC und LrgAB Ausdruck, eine Essigsäure abhängig und die anderen abhängig vom Proton Motor (PMF). Der letztere Weg wurde analysiert mit Agenten, die verschiedenen Aspekte der PMF berühren. Gramicidin und Carbonyl-Cyanid-m-Chlorophenylhydrazone (CCCP), antimikrobielle Wirkstoffe, die die DeltapH und potenziellen Membrane (DeltaPsi), zerstreuen beide verbessert LrgAB Ausdruck. Restaurierung von PMF durch Inkubation der Bakterien in Anwesenheit von Glukose wiederhergestellt LrgAB Ausdruck in den uninduced Zustand. Darüber hinaus induzierte Valinomycin, die speziell die DeltaPsi reduziert, auch LrgAB Ausdruck. Im Gegensatz dazu war Nigericin, die die DeltapH-Komponente von der PMF abführt, gefunden, die eine nur minimale Auswirkungen auf DeltaPsi und LrgAB Transkription. Schließlich wurde der DeltaPsi-inducible Ausdruck des LrgAB gezeigt, die zuvor gekennzeichneten LytSR Zweikomponenten-Regulierungssystem abhängig sein, die bei der Regulierung der Autolyse beteiligt ist. Die Ergebnisse dieser Studie unterstützen ein Modell, in dem das LytSR-Regulierungssystem auf einen Einbruch der DeltaPsi reagiert durch induzieren die Transkription von der LrgAB-Operon.

Vergleich Der Cecal Microbiota Von Inlands- Und Wilde Truthähne

Soweit die Produktion Methoden intestinale mikrobielle Gemeinschaften der Tiere verändern ist derzeit nicht bekannt. Wie der Darm Microbiota Tiergesundheit, Ernährung und Lebensmittelsicherheit auswirken kann, wurde ein Grundlinie Vergleich der cecal Gemeinschaften von Haus- und Wildtieren Puten durchgeführt. Oligonukleotid-Fingerabdruck Ribosomale RNA (rRNA) Gene (OFRG) von 2.990 16S rRNA klont und Punkt Fleck Quantifizierung der dominanten Populationen wurden verwendet, um die dominanten bakteriellen Taxa zu identifizieren. Dreiundsiebzig Prozent alle Klone gehörte noch ungebildeten Gattungen. Jedoch auf einer höheren phylogenetische, wurde die OFRG-Bibliothek von 54 % Bacteroides Klone (52 % der heimischen Bibliothek Klone, 56 % der Klonkrieger wild-Bibliothek), 30 % Firmicutes Klone (33 % der heimischen Bibliothek Klone, 32 % der Klonkrieger wild-Bibliothek), 3 % Proteobacteria Klone (5 % Inland, 2 % wild) und 3 % Deferribacteres Klone (4 % Inland, 1 % wild) komponiert. Sieben Prozent der Klonkrieger wurden nicht identifizierbare (inländische 6 %, 9 % wild). Bacteroides Klone enthalten die Gattungen Alistipes, Prevotella, Megamonas und Bacteroides. Der Clostridiales Klone waren Gruppen IV, IX und XIV Gattungen Faecalibacterium, Megasphaera, Phascolarctobacterium und Papillibacter einschließlich vorherrschende. Lactobacillus, Enterokokken und Streptococcus Bazillen wurden auch identifiziert. Beta-Delta und Gamma-Proteobacterial Gattungen enthalten Acinetobacter, Sutterella und Escherichia. Deferribacteres Klone zeigten hohe Ähnlichkeit mit Mucispirillum Schaedleri. Statistischen Vergleich der inländische und wilde Türkei Klon Bibliotheken angegeben vergleichbarem Gemeinschaft Reichtum und Ebenheit trotz der Tatsache, dass die beiden Bibliotheken nur 30 % der Gesamt-Klon operative taxonomische Einheiten geteilt. Zusammen zeigen diese Ergebnisse, dass obwohl hochrangige taxonomischen Gemeinschaftsstruktur ähnelt, High-Density Türkei Produktion erhebliche Unterschiede der Gattungen in der Ceca kommerzielle Vögel von denen ihrer wilden Gegenstücke gefunden wird.

Charakterisierung Der Fäkalen Microbiota Aus Einer Salmonellen-endemische Rinderherde Von Oligonukleotid-Fingerabdruck Der RDNA-Gene Bestimmt

Die gastrointestinale (GI) Trakt Microbiota besteht aus komplexen Gemeinschaften. Aller bisher untersuchten Arten zeigen Kultur und Molekulare Analysen, daß diese Gemeinschaften sehr unterschiedlich sind und Individuen einzigartige Konsortien beherbergen. Ziel der aktuellen Arbeit war es, interindividuelle Vielfalt der Rinder fäkale Microbiota zu prüfen und festzustellen, ob Salmonellen vergießen Status mit Gemeinschaft Reichtum oder Ebenheit Parametern korreliert. Mit einem ribosomal Gens Array-basierte Ansatz, Oligonukleotid-Fingerabdruck von ribosomal Genen (OFRG), wir analysierten 1440 16S Gene von 19 fäkalen Proben aus einer Rinderherde mit einer Geschichte von Salmonellose gewonnen. Identifizierte Bakterien gehörten die Stämme Firmicutes (53 %), Bacteroides (17 %) und Proteobakterien (17 %). Sequenzanalyse der 16S rDNA gen Klone ergab, dass Spirochäten und Verrucomicrobia auch in den Kot vorhanden waren. Die Mehrheit der Firmicutes im Kot gehörte der Ordnung Clostridiales, die über Dot-Blot-Analyse überprüft wurde. Beta-Proteobacteria vertreten 1,5 % der bakteriellen Gemeinschaft festgelegt durch Echtzeit-PCR. Statistische Analyse der 16S-Bibliotheken von 19 Tieren angegeben sehr hohen Artenreichtum und Ebenheit, so dass einzelne Bibliotheken einzigartige Populationen vertreten. Schließlich diese Studie nicht Arten identifizieren, die verhinderte Salmonellen Kolonisation oder resultiert aus Salmonellen Kolonisation.

Bewertung Der Kontrolle Des Erregers Laden Ein Reinigungsspray Bakterium in Eine Herde Von Rindern Mit Persistenten Salmonellen-Infektion

Um festzustellen, ob ein Reinigungsspray Bakterium Einfluß auf Kontrolle des pathogenen Belastung bei anhaltend infizierten Rindern Herden.

Das Bba64-gen Von Borrelia Burgdorferi, Die Lyme-Borreliose-Agent Ist Kritisch Für Säugetier-Infektion über Tick Biss Übertragung

Der spirochetal Erreger der Lyme-Borreliose, Borrelia Burgdorferi, ist durch Bisse von Ixodes Zecken an Säugetieren Reservoir-Hosts und Menschen übertragen. Die Mechanismen, durch die der Organismus von Vector Host verschleppt ist, werden oft missverstanden. In dieser Studie demonstriert, dass B. Burgdorferi mutant Belastung in der Synthese der bba64 gen Ware mangelhaft unfähig Mäuse über Zeckenbiss zu infizieren war, obwohl der Mutant i infektiöse bei Mäusen bei der Einführung von Nadel-Inokulation, (Ii) erworben durch larval Zecken fressen infizierten Mäusen, und (Iii) in der Lage, durch Tick Mausernde Stufen beibehalten wurde. Diese Feststellung eines B. Burgdorferi-Gens für Pathogen-Übertragung und/oder Überleben von der Zecke auf den empfänglichen Host erforderlich stellt einen wichtigen Durchbruch in Richtung Übertragungsmechanismen Beteiligten für die Lyme-Borreliose-Agent zu verstehen.

Nachweis Von Borrelia Burgdorferi DNA Im Tick Kot Stellt Beweis Für Den Organismus Bei Der Fütterung Von Vektor Zu Vergießen

Borrelia Burgdorferi, das Bakterium, die Lyme-Borreliose verursacht wird auf einen empfänglichen Wirt durch Ixodes spp. Zeckenbisse übertragen. Allerdings gibt es Unsicherheit ob B. Burgdorferi aus Zecken durch die fäkale Route vergossen sind. In dieser Studie wurden B. Burgdorferi infizierten Zecken Mäuse während beschränkt auf einen bestimmten Bereich der Haut durch eine Kapsel zugeführt. Während und nach der Fütterung, Tick Kot wurden aufgenommen und im Barbour-Stoenner-Kelley (BSK)-II-Medien für den Anbau und in sterilem Wasser für die Analyse der Polymerase-Kettenreaktion (PCR). Obwohl keine der getesteten Proben Kultur für B. Burgdorferi positiv waren, waren alle außer einem der fäkalen DNA-Proben von infizierten Zecken PCR positiv. Diese Ergebnisse angegeben, dass B. Burgdorferi wurden von der Fütterung von Zecken während Stuhlgang vergossen und schlagen vor, daß die Spirochetes nicht lebensfähigen verblieb der äußeren Umgebung einmal ausgesetzt. Diese Erkenntnis hat wichtige Auswirkungen für Ermittler B. Burgdorferi-spezifische PCR-Ergebnisse zu interpretieren, wenn Tick Übertragung Experimente durchführen.

Funktionsanalyse Der Borrelia Burgdorferi Bba64 Gen Ware in Murinen Infektion über Tick-Befall

Borrelia Burgdorferi, den Erreger der Lyme-Borreliose, ist von den Bissen von Ixodes spp. Zecken auf den Menschen übertragen. Während des borrelial Tick-Säugetier-Lebenszyklus muss B. Burgdorferi an vielen Umweltveränderungen anpassen, indem Sie steuert mehrere Gene, einschließlich bba64. Unser Labor vor kurzem gezeigt, dass das bba64-gen-Produkt für Maus-Infektiosität notwendig ist, als B. Burgdorferi von einem infizierten Zeckenbiss, aber nicht über Nadel Inokulation übertragen wird. In dieser Studie untersuchten wir die phänotypischen Eigenschaften eine bba64-mutant-Stamm, einschließlich 1) Replikation während Tick Engorgement, 2) Migration in das nymphal Speicheldrüsen, 3) Host-Getriebe und 4) Anfälligkeit für die MyD88-abhängige angeborenen Immunantwort. Ergebnisse ergab, dass der bba64-Mutant abgeschwächte Infektiosität durch Zeckenbiss nicht wegen eines Mangels Wachstum innerhalb einer aktiv Fütterung nymphal Zecke oder Misserfolg in die Speicheldrüsen einzudringen. Diese Befunde vorgeschlagen, es war entweder ein Mangel einer Spirochete Übertragung auf der Host-Dermis oder erhöhte Anfälligkeit für angeborene Immunantwort des Wirtes. Weitere Experimente zeigten der bba64-Mutant war nicht kultivierbarer aus Maus Haut am Standort nymphal Biss genommen und keine Infektion MyD88-defizienten Mäusen über Tick Befall herstellen. Kollektiv, deuten die Ergebnisse dieser Studie, dass BBA64 an der Speicheldrüse-zu-Host-Lieferung-Schnittstelle von Vektor-Getriebe funktioniert und nicht Widerstand gegen Angeborene Immunität MyD88-vermittelte beteiligt.

Analyse Von Borrelia Burgdorferi Oberfläche Proteine Als Determinanten in Zur Gründung Von Host Cell-Interaktionen

Borrelia Burgdorferi-Infektion Ursachen Lyme-Borreliose beim Menschen, eine Bedingung, die eine systemische Ausbreitung des Organismus auf verschiedene Gewebe und Organe zu kolonisieren umfassen kann. Wenn die Infektion wird nicht durch Antibiotika behandelt werden, kann es zu Manifestationen einschließlich, Arthritis, Karditis und/oder neurologischen Problemen führen. Identifizierung und Charakterisierung von B. Burgdorferi äußeren Membranproteine, die zelluläre Anlage und Invasion herstellen Infektion erleichtern weiter untersucht werden. In dieser Studie suchte wir genauer definieren, vermeintliche Zelle Bindungseigenschaften Oberfläche exponierten B. Burgdorferi Proteine durch die Beobachtung, ob Mobilfunk Einhaltung durch Antikörper blockiert werden könnte. B. Burgdorferi gemischt separat mit monoklonalen Antikörpern (mAbs) gegen äußere Oberfläche Protein (Osp) A, OspC, Decorin-verbindliches Protein (Dbp) A, BBA64, und RevA Antigene wurden mit menschlichen Nabel-Vene Endothelzellen (HUVEC) und menschliche neuroglial Zellen (H4) inkubiert. B. Burgdorferi mit Anti-OspA, - DbpA, behandelt und - BBA64-mAbs zeigte eine signifikante Abnahme zellulären Association im Vergleich zu Kontrollen, während B. Burgdorferi mit Anti-OspC behandelt und Anti-RevA zeigte keine Verringerung zelluläre Anlage. Darüber hinaus ergab zeitliche transkriptionelle Analysen herraufreguliert Ausdruck des bba64, OspA und DbpA während Coincubation mit Zellen. Zusammen, belegen die Daten dieser OspA, DbpA und BBA64 Funktion in Host Zellmechanismen Haftfähigkeit und Infektion.

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