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Articles by Toru Kariu in JoVE
JoVE Immunology and Infection
틱 굿 내에서 빠른 전송과 라임 질병 병원균의 현지화을위한 방법
1Department of Veterinary Medicine, University of Maryland, 2Department of Entomology, Connecticut Agricultural Experiment Station
라임 질병 연구 조사는 종종 병원체 Borrelia burgdorferi, 일반적으로 몇 주 정도 소요 프로세스에 감염된 진드기의 생성을 필요로합니다. 여기 시간 이내에 수행할 수 있습니다 microinjection 기반 틱 감염 절차를 보여줍니다. 우리는 또한 진드기 이내 B. burgdorferi의 현장 지방화에 대한 immunofluorescence 방법을 보여줍니다.
Other articles by Toru Kariu on PubMed
아마미-오시마, 일본에서 Protobothrops Flavoviridis 독의 소설 [Lys(49)] Phospholipase A(2) (BPIII)의 섬 특정 식
Protobothrops flavoviridis 독 샘에 표현 된 성적 증명서를 찾아 466 표현된 시퀀스 태그 (ESTs) P. flavoviridis 아마미-오시마, 일본에서의 독 샘 cDNA 라이브러리에서 생성 되었습니다. 소설 lysine 49 phospholipase A(2) ([Lys(49)]PLA(2)) 복제 발견을 기존 데이터베이스에 대 한 유사성 검색에서 식별 하 여 뒤에 임의로 선택 된 cDNA 클론을 시퀀싱. 그것은 한 아미노를 함유한 산 성 대체 BPII homologue 또는 BPII 및 BPI [Lys(49)] 포함 된 PLA (2) s에에서 있는 아마미-오시마와 도쿠노시마 P. flavoviridis venoms 두 아미노산 대체 BPI homologue 코딩. BPIII, 명명 된이 isozyme 아마미-오시마 P. flavoviridis 독 으로부터 격리 되었다. BPIII 준 특정 [M+2H](2+) 피크 BPII와 비교 하면 S carboxamidomethylation와 트립 신 소화 후 m/z 736.3 질량 분석 (MS) 분석. S carboxamidomethylation 후 MS 분석에서 분명 하 게 되었다 및 BPI에서 BPII에 이르는 혼합된 단백질 봉우리의 트립 신 소화 얻은 아마미-오시마와 도쿠노시마 P. flavoviridis의 carboxymethyl 셀 룰 로스 열에 분류 하 여 venoms BPIII 단백질 아마미-오시마 P. flavoviridis 독 하지만 도쿠노시마 P. flavoviridis 독이 포함 되어 있습니다. 그것은 처음 도쿠노시마 P. flavoviridis 독에서 아마미-오시마 P. flavoviridis 독에 존재 하는 단백질을 찾을 수 없습니다.
BosR (BB0647) 제어 Borrelia Burgdorferi에 독성 식
요약 Borrelia burgdorferi (Bb), 라임 병 스피로헤타 homologue를 레 귤 레이 터 (모피) 잠재적인 철 통풍 관, BosR (BB0647)을 인코딩합니다. 지금까지, Bb 대사, 유전자 조절 또는 병 인 Bosr에 대 한 역할 결정 되지 않았습니다, 주로 때문에 지금까지 낮은 통로, 전염 성 Bb 격리에서 Bosr을 비활성화 하는 무 능력. 여기, 우리 보고서의 Bb. 악성 변형에 첫 번째 bosR 결핍 돌연변이 생성 bosR 돌연변이 틱에 정상적으로 유지 하는 반면, 돌연변이 BosR 포유류 호스트의 Bb 감염에 대 한 필수적입니다 나타내는, 생쥐를 감염 시킬 수는. 또한, 다양 한 유전자 했다 긍정적으로 또는 부정적으로 영향을 BosR 결핍, 제안 BosR 글로벌 진압와 활성 제에서 Bb. 모두 기 막히게 작동 수 있습니다, 우리의 연구 결과 나타났다 BosR 지 두 주요 독성 관련 Bb 단백질, OspC 및 DbpA, 대체 시그마 인자에 영향을 통해 아마의 식을 제어에 의해 나타났다 bosR 돌연변이의 transcriptional 프로 파일링Rpos입니다. 이 연구 따라서 뿐만 아니라 Bb의 또 다른 주요 독성 유전자 해명 했습니다 하지만 또한 이전에 알려지지 않은 유전자 조절 Bb에 RpoS 통치 계층에 새로운 통찰력을 제공 합니다.
Borrelia Burgdorferi 표면에 위치한 막 단백질 1의 고유 영역의 특성화
라임 질병 Borrelia burgdorferi 병원 체 생성 되 나 상 표면 단백질 "표면에 위치한 막 단백질 1" (Lmp1). Lmp1 이전에 호스트 획득 면역 방어 회피와 포유류의 지속적인 감염의 설립에는 미생물을 지원 하기 위해 표시 되었습니다. 여기, 우리가 Lmp1 N 단자, 중간, 그리고 C 터미널 영역 표면 노출 필수적인 막 단백질 임을 보여줍니다. Murine 감염 하는 동안 다음 세 가지 단백질 지역 인식 하는 항 체 생산 되었다. 각 개별 지역 생쥐의 별도 예방접종 감염 시 스피로 생존에 차등 영향을 끼쳤다. 특히, C 터미널 지역에 대 한 항 체 주로 방해 관절, B. burgdorferi 지 N 터미널 영역에 특정 항 체는 carditis의 개발을 포함 한 마음에 병원 체 수준에 주로 영향을 하는 동안. Lmp1 N 터미널 영역 lmp1 삭제 돌연변이의 유전 재구성 면역 세라의 살 균 효과 저항 능력을 크게 향상 하 고 또한 병원 체 생존 vivo에서 증가를 관찰 했다. 함께 찍은, 결합 된 데이터 제안 Lmp1 N 터미널 지역 스피로 생존에 뚜렷한 역할 및 단백질의 다른 부분 기관 별로 표시 되는 감염 시 지 속성 병원 체 및 tropism을 해당 특정 함수를 관련이 있습니다. 여기에 보고 된 연구 결과 밑줄 lmp1의 표면 노출 지역 백신 대상 또는 자연 라임 병의 과정을 변경할 수 있는 항 원 영역으로 역할을 잠재적으로 수 있는 사실.
항 체는 말에 Borrelia Burgdorferi 감염의 프로 파일링
Borrelia burgdorferi 감염 말과 조랑말 뉴 잉글랜드와 미국의 중부 대서양 지역에서 일반적입니다. 여기, 우리 말 B. burgdorferi 감염의 진단에 대 한 세 가지 서로 다른 항 원 대상에 대 한 항 체 응답을 프로 파일링 루시페라아제 immunoprecipitation 시스템 (입술) 평가. 입술의 말과 혈 청 샘플 테스트 라임 감염 밝혀 말 샘플 (114/159)의 약 75% 된 합성 VOVO 항 원에 대 한 seropositive OspC immunodominant epitopes로 반복된 immunodominant C6 epitopes 구성의 의심. VOVO 및 면역 형광 분석 실험 (IFA)의 비교 샘플의 51% 두 분석 실험에서 긍정적인 했다 보여주었다 (13% 했다 VOVO(-)/IFA(+), 21%는 이었다 VOVO(+)/IFA(-), 및 15%에서 부정 했다 VOVO(+)/IFA(+)). 추가 B. burgdorferi humoral 응답을 이해 하 고 진단 차이점 IFA와 VOVO, 두 개의 추가 B. burgdorferi 입술 테스트 Dbpa를 사용 하 여 수행 하 고 DbpB. 강인 seropositive 항 체 응답 DbpA 및 Dbpb에 대 한 98% (79/81)는 VOVO(+)/IFA(+)의와 어긋나는 샘플의 93% (50/54)에서 발견 되었습니다. 또한, 일부 VOVO과 IFA에 의해 부정적인 샘플 보여 DbpA 또는 DbpB. 전반적으로에 대 한 immunoreactivity 의심된 말 샘플의 94%, 입술에 의해 seropositive 그리고 열 지도 분석 발표 seropositive 샘플 종종 적어도 두 개 이상의 세 가지 항 원을 가진 immunoreactive 했다. 이러한 결과 입술 테스트 여러 재조합 항 원을 채용 라임 병에 항 체 반응의 평가 위한 유망한 접근법을 제공 것이 좋습니다.
Borrelia Burgdorferi 외부 멤브레인 Vesicles의 Multiprotein 단지의 특성화
세균성 세포 봉투 가운데 Borrelia burgdorferi 바깥 막 (OM)은 구조적으로 독특한에 그 많은 단백질 복합물의 신원을 알 수 없는; 그러나, 그들의 특성화 막 단백질 상호 작용 및 잠재적 함수의 우리의 이해를 향한 첫 걸음 이다. 여기, 단백질 단백질의 상호 작용 뿐만 아니라 식별 B. burgdorferi의 여러 전염 성 센스 stricto 격리에서 고립 된 OM 소포에 단백질 복합물으로 전역 특성에 대 한 2 차원 블루 기본/SDS 페이지/질량 spectrometric 분석을 사용 했습니다. 10 뚜렷한 옴 단지 몇 가지 독특한 subunits 은닉의 존재를 발견 하 고, 비록는 complexome 막 단백질, 특히 P13, 외부 표면 단백질 (Osp) A, B-,-C, 그리고-D 및 lp6.6의 제한 된 다양성의 자주 발생 하 여 주도하 고 있다. 이 단지의 발생 및 소 단위 상호 작용 특이성 mutagenesis 연구, 소 단위 구성원 (P66)의 타겟된 소모는 선택적으로 특정 복잡 한 폐지에 의해 뿐만 아니라 독립 2 차원 immunoblotting 및 coimmunoprecipitation 분석 실험에 의해 지원 추가 되었습니다. B31, 297, 등 두 개의 주요 전염 성 격리에 옴 complexome의 유사한 프로필 검색 되었습니다 있지만 특정 단지 분리 특정 방식으로 발생할 수 있습니다. 여러 Osp 불충분 한 격리에서 단백질 복합물의 추가 평가 손실을 여러 단백질 복합물의 보여주지만, 야생 형 세포에 감지 되지 않는 추가적인 복잡 한/subunits의 존재를 공개. 함께, 이러한 관측 막 단백질 상호 작용에 관련 된 borrelial 항 원을 발견 했다. 연구는 또한 OM 단지의 조립 공정은 특정 하 고 코어 또는 안정화 subunits 단지 사이 다 나왔다. 그들의 생물 학적 중요성의 등이 단백질 복합물의 더 특성화 병원 체 지 속성 메커니즘 및 감염 예방 대책 개발에 새로운 빛을 발산 수 있습니다.
Borrelia Burgdorferi 코엔자임 A Disulphide Reductase Enzootic 주기 전체에 걸쳐 급속 한 성장에 대 한 중요 하 고 필수적인 포유류 호스트의 감염입니다
Microarray 분석 포유류 호스트 적응 Borrelia burgdorferi, bb0728에에서 RpoS regulon (cdr) 이중 수 복사할 시그마 요인에 의해 σ(70)와 RpoS 발견 됐다. Cdr 유전자 NADH 의존 방식에서 CoA-disulphides CoA 줄여 주는 코엔자임 A disulphide reductase를 (CoADR)을 인코딩합니다. B. burgdorferi에 Coa의 풍부 하 고 효소의 생화학을 바탕으로, CoADR 반응성 산소 종에 대 한 응답으로 스피로헤타의 역할을 제안 하고있다. Bbcoadr의 생리 적인 복수 이해, cdr 유전자 중단 되었습니다 B. burgdorferi 돌연변이 생성. RT-PCR 및 5'-경주 분석 bb0729 코딩 시퀀스;의 상류 단일 transcriptional 시작 사이트에서 cdr 및 bb0729는 co-transcribed는 밝혔다 bb0729-cdr 오 페론 및 상류 프로모터 요소를 포함 하는 셔틀 벡터는 cdr 돌연변이 보완 하기 위해 사용 되었다. 돌연변이 부모 보다 더 민감한 과산화 수소를, t-부 틸-hydroperoxide, spirochetal 세포 막 손상 산화 화합물의 높은 농도를 증가 감도 전시 않았다 그것. 표준 중 돌연변이의 특성화 (15% 산소, 6 %co(2)) 혐 기성 (< 1 %o(2), 37 ° C에서 9-13 %co(2)) 재배는 anaerobiosis 중 특히 눈에 띄는 두 조건 하에서 성장 결함을 공개 했다. 돌연변이 바늘 접종 하 여 avirulent는 고 nymphs, 먹이 감소 생존 보여주지만 unfed 플랫 nymphs 생존 결함 없음 표시. 이러한 결과 바탕으로, 우리 Bbcoadr은 CoA/CoA-disulphide 및 NAD(+) /NADH enzootic 주기 지원 thiol disulphide 항상성, 과산화 중재 멤브레인 손상; 스피로헤타를 직접 보호 하 고 신속 하 게 복제의 기간 동안 최적의 redox 비율을 유지 하는 데 필요한 제안 이러한 함수 중 하나 이상을 B. burgdorferi에 의해 포유류 호스트의 감염에 대 한 필수적입니다.
Borrelia Burgdorferi BBA52 라임 질병 백신 차단 전송에 대 한 잠재적인 대상 이다
Borrelia burgdorferi의 표면 노출 항 원 보호 호스트 면역 반응의 유도 대 한 중요 한 목표를 나타냅니다. Bba52는 우선적으로 먹이 틱 B. burgdorferi에 의해 표현과 bba52의 타겟된 삭제 벡터 호스트 전환 vivo에서 방해. 이 연구에서는 BBA52 외부 멤브레인 표면에 노출 된 단백질은 이황화 다리 호모 oligomeric 천연 단백질 조립에 참여 하 고 보여 줍니다. BBA52 항 체 부족 감지 borreliacidal 활동 체 외. 그러나, 활성 예방 접종 연구 시연 BBA52 예방 접종을 마우스 크게 덜 후속 tick-borne 도전 감염에 취약 했다. 마찬가지로, BBA52 항 체 틱에서의 수동 전송 완전히 순진한 쥐 진드기를 먹이 기에서 B. burgdorferi 전송 차단. 함께 찍은, 이러한 연구 쥐 진드기에서 스피로 보급에 bba52의 역할을 강조 하 고 B. burgdorferi 전송을 차단 하기 위한 백신을 개발 하기 위해 지속적인 노력을 보완 하기 위해 BBA52 항 체 중재 전략의 가능성을 입증.
