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Articles by Valerica Raicu in JoVE
JoVE General
在体内 G蛋白偶联受体相互作用光谱分辨的双光子显微镜定量
1Department of Physics, University of Wisconsin - Milwaukee, 2Department of Biological Sciences, University of Wisconsin - Milwaukee
通过采用一个光谱分辨的双光子显微成像系统，像素级别的地图福斯特共振能量转移（FRET）效率得到表达假设形成同源寡聚体复合物的膜受体细胞。从FRET的效率图，我们正在研究能够估计约低聚物复杂的化学计量信息。
Other articles by Valerica Raicu on PubMed
组合阿加曲班和依达拉奉在沙土鼠造成添加剂对 15 分钟的脑缺血的神经保护作用。
我们调查改善缺血低灌注和 15 分钟的长爪沙鼠脑缺血后降低死亡率的选择性凝血酶抑制剂、 阿加曲班和自由基清除剂，依达拉奉 (MCI-186) 组合。阿加曲班或依达拉奉独自显著增加缺血的脑血流量和衰减后再灌注的脑水肿。然而，只有组合增加成活率 (P < 0.05 的壁炉 Cox) 和保护神经元细胞损伤。本研究报告表明抗凝剂和自由基清除剂相互运作来抑制细胞缺血性损伤的研究进展和这些类型的药物组合将有助于改善脑缺血后的成果。
急性缺血导致零部件产业边缘细胞的 '黑牢' 变化中长爪沙鼠耳蜗。
人工耳蜗血管纹产生淋巴液和生成 endocochlear 直流潜力，听觉转导过程的两个必不可少的因素。边际的单元格中，构成纹，几种单元格类型之一透射电镜 (TEM) 称为 '黑牢' 其外观的基础上。为了澄清是否这通常观察到的暗外观' 是正常的边缘细胞特征，如推测在文学或实验项目，我们开发体内固定方法尽量减少缺血组织的损害。虽然下与氧合血持续体循环，沙鼠耳蜗血管纹化学固定固色剂外, 淋巴灌注和血管纹用透射电镜观察。与过去的一些报告，边缘细胞的细胞质不是乌云，和定量分析显示边缘细胞的细胞质的电子密度和，中间细胞 (零部件产业细胞的另一种类型） 之间的差异没有统计学意义。来比较，沙土鼠被允许进行 3 分钟的缺血后被斩首。在这些条件下，边际的单元格显示典型的黑外观'，如前所述，和其细胞质的电子密度是中间的单元格的 1.7 倍。此外，经历 3 分钟的缺血的边缘细胞中的线粒体的数量高于固定在体内。因此，我们认为得到广泛承认的 '黑牢' 外观的边缘细胞后常规固定程序反映了由于缺血，这是固有的标准固定的程序，但可以通过我们这里介绍的固定协议避免细胞损伤。
蛋白质相互作用的量化的光谱解析的荧光共振能量转移的体内。
我们描述了荧光共振能量转移 (音品)-基于寻找方法在活细胞中的分数蛋白人口 （alpha(T)) 中每个建筑群形成配合物及这些蛋白质分子的平均数 (n)。该方法依赖于两个关于致敏承兑人排放和捐助者 de-quenching (由光漂白作用的受体分子），加全谱分析的微分荧光签名，以量化体/受体能量转移。方法和敏感性限制非常适合体内微观调查。这表明用激光扫描共聚焦显微镜研究复杂地层的绿色、 青色、 黄色荧光蛋白在标签上的不育 2 α 因子受体蛋白 (Ste2p) (GFP、 CFP 和 YFP 分别），出芽酵母酿酒酵母中。一种理论模型被提出有关效率的能量转移蛋白质种群 （明显音品效率、 E(app)) 转一单一捐助者/承兑人对 (E，真正的音品效率) 的能量。我们决心通过使用一种新的方法，它依赖的两个捐助者/承兑人对，Ste2p-CFP/Ste2p-YFP 和 Ste2p-GFP/Ste2p-YFP E(app) 测量 E。从 E(app) 和 E 我们确定大约 1 alpha(T) 和 n 大约 2 Ste2 蛋白质。因为 Ste2p 配合物形成没有配体在我们的实验中，我们得出结论 alpha 因子信息素不必要为二聚。
Fe CO 键能的外差检测瞬态热阶段光栅光谱的肌红蛋白的测定。
生物系统中债券能量蛋白质活性部位紧密耦合到结构与功能的关系。由于蛋白质松弛反应坐标沿的未知性质，无法直接确定债券能量与蛋白质功能有关。通过在海藻糖眼镜中嵌入蛋白，有可能出蛋白质松弛短时间尺度上冻结，并确定使用光热波谱学 photolabile 配体的债券能量。作为一个典型的例子，光解动力学和热力学羧基-肌红蛋白 (MbCO) 在室温的海藻糖玻璃矩阵中的瞬态吸收 （或泵探针） 进行了研究和瞬态热相光栅光谱测定 CO 重组动态和分别相关能量学。初始 balls 打破的债券和债券改革后释放的能量可以用于，时间刻度上比重要蛋白质松弛，更快地确定铁钴债券能源作为 34 + /-4 千卡/摩尔。这种债券能量远远大于，通常引 (25 千卡/摩尔） 间接测量的基础上，但在好的协议，与最近的理论预测 (35 千卡/摩尔） （Rovira，C.；Parrinello，M.int.J.量子化工厂 2000 年 80、 1172年)。这与理论学习相结合的结果表明蛋白质结构具有重要作用在债券能量活动地点，反过来又提供了优化的有效屏障高度独立的过渡状态区域的元素。
共振能量转移的蛋白质同源寡聚物中的效率。
理论模型中游离单体的混合物和同源寡聚蛋白复合体大小均匀明显效率 (Förster) 荧光共振能量转移 （音品） 的建议。模型考虑到帐户转移的光激发的可能途径从单一捐助者向多个受众和多个捐助者 （非-同时） 到单个的受众。这有必要偏离标准的理论，有人在文献中，但它只成功地推行了几个特定的情况下，如特定几何形状的低聚物。目前的理论模型的预测相差太大的标准理论，二聚体，为其协议观察到的案例。此模式因此提供的低聚物组成两个以上的单体，音品行为的新见解和还建议手段确定寡聚蛋白复合体的大小以及相关和无关的单体的比例。
为组织阻抗表征的快速可重构阵列的执行情况。
组织的各种属性已在过去使用和作为衡量标准，以歧视健康从病变组织。（x 光片和光信号） 的电磁吸收、 散射的近红外灯和电阻是几个这样的参数。作为判别式的病变 （如肿瘤） 首先必须精确地确定组织，这些组织的特点。在本文中，我们考虑的组织和细胞聚合，生物电阻抗属性和目前这是能够提供良好的电磁接口向下研究，组织为 0.01-30 兆赫范围中表征的可重构电极阵列的设计。数字控制，允许各种电磁场配置要应用于所研究的组织下，可能轻易更改数组元素的配置。数组为了四个点，以及两个点的阻抗检测到的接口和可用于二维成像系统基于电气阻抗。设计可将扩展到更高的频率和规模较小的尺寸，允许细胞水平的电气性能的研究。
实时监测的双光子光聚合在微流控器件的使用。
我们报告的微流控设备大师使用双光子光聚合苏 8 负性光刻，它依赖于在成像的生物样品中常用的双光子显微镜 (TPM) 的生产方法的改进。设备大师作为消极救济结构的聚二甲基硅氧烷微流控设备。我们观察到不仅双光子激发的 su-8 启动交联中的近红外激光束焦点区域的材料，（按预期），而且它还导致排放的可见区域中的荧光。检测到的排放 su-8 术双光子激发的显示大小与聚合对象接触 ； 过程中产生的强相关性这允许微流控主生产过程进行实时监测的进展。我们表现出荧光检测期间双光子聚合生产的微流体装置，其目的是，捕获单个酵母细胞可以用于微流控大师书写了同一 tpm 映像中的使用。
M2 毒蕈碱受体在活细胞所确定的定量荧光共振能量转移的寡聚大小。
荧光共振能量转移 （音品）、 荧光强度根据显微镜与荧光寿命成像测量、 被用来估计的低聚物形成 M(2) 毒蕈碱样胆碱能受体的大小。基于成对音品效率之间的单一捐助者和单个承兑人 (E) 和低聚物的指定大小 (n) 内明显音品效率之间的关系。M(2) 受体是 N 总站到增强型绿色或黄色荧光蛋白融合，并表示在中国仓鼠卵巢细胞中。发射光谱分析的光谱反卷积，并明显提高效率，增强黄色荧光 protein-M(2) 受体对增强绿色荧光 protein-M(2) 受体在不同比率的捐助 dequenching 和敏承兑人排放量的估计。数据被解释为是一种模式，认为所有的捐助者组合和承兑内指定的低聚物获得 E 的拟合的值，如下所示： n = 2，+ /-0.019 ； 0.495n = 4，+ /-0.010 ； 0.202n = 6，+ /-0.006 ； 0.128n = 8，+ /-0.005 0.093。成对的音品效率确定独立的荧光寿命成像 0.20-0.24，确定作为四聚体的 M(2) 受体。这里所述的战略收益率寡聚大小根据荧光属性仅显式估计。其更广泛的应用程序可以解决 G 蛋白偶联受体是否存在为二聚体或较大的低聚物的一般问题。低聚物的大小有职能部门的影响，和可以预期这类信息有助于理解信号的过程。
二维介电谱： 实施和验证扫描的不限成员名额同轴探头。
介电谱是强大的工具，用于描述和分类基于它们的电气性能的材料。为了对与空间可变属性的示例执行介质的测量，测量探头通常被重新定位手动表面的每个度量值的示例。在本文中，我们提出一种新型的技术，基于可重构的电极阵列，而无需实际移动的测量电极方便的在各种不同的空间位置测量记录。通过电子方式选择电极之一作为内线和连接在一起以形成外线的电极的其余部分，不限成员名额的同轴探头被创建的这可以通过简单地选择不同的电极组合 ； 重新定位因此"旅游"的同轴探头的名称。几何因子或细胞常数，数组中的每个同轴探测器的据估计对盐溶液与已知的电特性的测量。为了验证安装程序的生物细胞、 血浆膜电容和细胞质的介电性能的测量酵母细胞悬浮在水溶液中的电导率是衡量和相比的结果，从已发布的报表。介电谱成像进行关于组织幻像包裹体组成的浓缩的酵母细胞悬浮液琼脂凝胶制成。幻像上, 执行测量和介质的数据空间映射对电极的位置。空间电气数据正是相关的幻像酵母细胞包裹体的位置。
荧光共振能量转移效率的便服在活细胞中的蛋白质测定的办法之间整个分布和平均水平为基础的比较。
当前使用荧光共振能量转移 （音品） 的蛋白质-蛋白质相互作用研究中的数据的分析方法摆脱了几十年的使用宽视场显微镜和 spectrofluorometers 来测量荧光从单个单元格，或单元格人口的研究。固有的大多数测量是平均分布的音品效率了大量人口的蛋白复合物，洗出的关于化学计量学和蛋白复合体的结构信息。虽然采用激光扫描显微镜原则可能只有相对较便利量化分布的音品效率在活细胞内，最近做这种潜力充分实现，通过光谱-或生命周期为基础的办法发展。要利用这个新机会分子影像学研究，有必要进一步发展的理论模型和数据分析方法。我们使用蒙特卡罗模拟，调查音品的均匀和非均匀分布的分子。我们的研究结果表明基于音品效率分布分析呈现显著的优势以平均水平为基础的方法，其中包括允许适当鉴定的生物有关的烦恼。这项研究提供了洞察音品，分子拥挤的影响，它提供了使用基于模拟的数据拟合的音品效率分布信息提取的基础。
