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Articles by Victor Chi in JoVE
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免疫組織化学：ベクターLabsからベクタステインABCキットを用いたパラフィン切片
Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)
Other articles by Victor Chi on PubMed
ひと肝チトクローム P450 2 D 6 遺伝子型、フルレングス メッセンジャー リボ核酸とチトクローム P450 と評価活動の 2 6 基板。
本研究の目的は開発し、CYP2D6 リボ核酸トラン スクリプト レベル、遺伝子型, およびヒトの肝生検試料中の酵素活性の関係を解明するために感度の向上とチトクローム P450 （CYP） 2 6 プローブ基板を検証する.
SHK毒素のD-ジアステレオ選択的電位依存性K +チャネルをブロックし、Tリンパ球の増殖を抑制する
ポリペプチド毒素SHKは、人間のエフェクターメモリーT細胞（T（EM））の活性化に重要であるKv1.3カリウムチャネルの強力なブロッカーであり、選択的遮断薬は、Tによって媒介される自己免疫疾患の治療のための貴重な治療薬のリード線を構成する（例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、1型糖尿病などのEM）細胞。カリウムチャネル遮断のための毒素上の重要なモチーフは、近隣のリジンとチロシン残基で構成されています。このモチーフは活性に十分であるため、SHKアナログはD-アミノ酸に基づいて設計されています。 D-アロSHKはSHKのものと本質的に同一の構造を有し、タンパク質分解に耐性があります。それは、K（d）は36ナノメートル（SHKより2800倍低い親和性）とKv1.3をブロックKv1.1以上Kv1.3のために2倍選択的であり、試験した他のK（+）チャネルに対して不活性であった。 D-アロSHKはSHKより100倍高い濃度でヒトT（EM）細胞増殖を抑制した。その半減期の循環と腎クリアランスは、その血漿レベルの主要な決定要因であることを意味するだけSHKのそれよりも若干長くなっています。 D-アロSHK SHKは異なり、チャネルの閉鎖状態に結合しなかった。 D-アロSHKのモデルはそれとして効果的にSHKとして細孔をブロックすることができますKv1.3ショーにバインドされているが、ネイティブのSHKよりも不利ないくつかである前庭、とさまざまな相互作用を行います。ポリペプチド毒素のすべての-Dアナログの生物活性を保持し、選択性は非常に珍しいであることを発見。改良されたKv1.3効力および特異性を持つすべての-d類縁体の治療上の利点を持つことができます。タンパク質分解および非抗原性の耐性のなので、このアナログは、チャネルの研究では、K（+）に有用でなければなりません。
人間Orai1とOrai3のCa2 +放出活性化Ca2 +チャネル活性を調節ストア依存性および非依存性モード
我々は、ヒト胎児腎臓細胞のSTIM1と一緒に往来のヒト相同体の発現によって誘導電流を評価した。 STIM1と共発現する場合、Orai1は、Ca（2 +）によって誘発される遅い不活性化で大きな内向き整流性のCa（2 +）選択的電流を誘導した。内向き整流性のIV特性を維持しながら、Orai1（E106D）の点突然変異が誘発Ca（2 +）放出活性化カルシウム（2 +）（CRAC）のような電流のイオン選択性を変化させた。 Orai1とSTIM1のC末端部分の表現は、ストア枯渇せずにCRAC電流を生成するのに十分であった。 2-APBは、STIM1とOrai3共発現細胞では大規模な比較的非選択的な電流がアクティブになります。 2-APBまた、ストアの枯渇またはSTIM1の共発現することなくOrai3発現細胞におけるCa（2 +）の流入を誘発した。 2-APBによって誘導されるOrai3電流は外向き整流および混合カルシウムと現在の一価を表す内部コンポーネントを示した。 Orai3の細孔変異体は、ストア作動性Ca（2 +）のエントリを抑制し、ストアの枯渇または2-APBの追加のいずれかに応答して、大きな電流を運ばなかった。 Orai1-3キメラの一連の分析はOrai3の第三の膜貫通セグメントの2番目からシーケンス内の2-APB-誘導電流の責任構造の決定要因を明らかにした。 2-APBによって誘導されるOrai3電流が相対的に非選択性陽イオン空孔を開き、CRACチャネル活性化のストアに依存しないモードを反映している可能性があります。
Kv1.3チャネルのブロックによる遅延型過敏反応と抑制の間にエフェクターメモリーT細胞のイメージング
エフェクターメモリーT（TEM）細胞が自己免疫疾患、遅延型過敏（DTH）、炎症反応のTEMセルへの参加の二光子イメージングのための便利なモデルの重要なメディエーターである。まもなく（3時間）抗原感作耳組織、安定した抗原軸受抗原提示細胞（APC）に接続されたTEMセルへのエントリの後に。 24時間後、拡大したTEMセルでは、コラーゲン繊維に沿って非常に運動したと18時間急速に移行し続けた。 TEMセルは、カルシウムシグナル伝達を調節するために電位依存性カリウムチャンネルKv1.3に依存しています。 SHK-186は、特定のKv1.3ブロッカー、炎症組織におけるDTHおよび抑制TEMセルの拡大と運動性を阻害したが、ナイーブとセントラルメモリーT（TCM）は、細胞のリンパ節へのホーミングや運動性に影響を及ぼさなかった。 SHK-186は実質的に多発性硬化症のラットモデルで病気を治療した。これらの結果は、末梢組織における炎症性免疫応答間にテム細胞におけるKv1.3チャネルの要件を示しています。中央メモリー応答が無傷のままながら、エフェクターメモリーの応答が抑制されるためにKv1.3を標的とすることができます。
多発性硬化症の治療標的としてKv1.3カリウムチャネル
私たちは多発性硬化症の治療薬としてTリンパ球におけるKv1.3カリウムチャネルの阻害剤の潜在的な使用について説明します。現在の治療戦略は、非選択的に免疫系を対象としています。その結果、一般的な免疫抑制、毒性副作用と日和見感染症のリスクの増加は、より選択的な治療の必要性を作成します。自己免疫の主要なメディエーターであると考え自己反応性エフェクター·メモリーT（T（EM））細胞は、Kv1.3チャネルの多数を表現しています。 Kv1.3の選択的遮断薬は、カルシウムシグナル伝達、サイトカインの産生およびT（EM）細胞の増殖をin vitroであり、T（EM）in vivoでの細胞運動性を阻害する。 Kv1.3ブロッカーは、急性感染症に対する防御免疫応答を損なうことなく、多発性硬化症、関節リウマチ、1型糖尿病と接触性皮膚炎の動物モデルで疾患を改善する。 Kv1.3ブロッカーは、げっ歯類と霊長類の良好な安全性プロファイルを持っています。
マトリックスメタロプロテアーゼ23毒素ドメインによるカリウムチャネルの変調
ペプチド毒素が深い生理学的および病理学的効果を引き起こす毒ブロックK（+）チャネルの広い配列で見つかった。ここでは、哺乳動物タンパク質の最初の機能のK（+）チャネル遮断毒素ドメインを記述します。 MMP23（マトリックスメタロプロテアーゼ23）は進化的にイソギンチャクのペプチド毒素に関連しているドメイン（MMP23（TxDを））が含まれています。 MMP23（TxDは）イソギンチャク毒素BGKとSHKに近い構造的類似性を示しています。低マイクロモルの範囲のナノモルでまた、このドメインブロックK（+）チャネル（効力の降順でKv1.6> Kv1.3> Kv1.1 = Kv3.2> Kv1.4）、他のKを温存しながら（+ ）チャネル（Kv1.2、Kv1.5、Kv1.7、およびKCa3.1）。フルレングスのMMP23は、K（+）と共同でローカライズとMMP23（TxD）は、敏感なERのチャネルを捕捉することによりチャネルを抑制します。我々の結果は、イソギンチャクの毒素に関連したドメインを含むタンパク質の広大な家族の構造と機能への手がかりを提供しています。チャネル調節機能を維持するために進化の圧力は、植物や動物の王国全体でこのドメインの保全に貢献するかもしれない。
自己免疫疾患の治療のための免疫調節として、イソギンチャク毒素の開発
分子の同定と結合し電気生理学的および薬理学的研究は、イオンチャネル、Kv1.3、KCa3.1、CRAC（Orai1 + STIM1）、TRPM7、CL（うねり）の独自のネットワークを明らかにしたアドインに必要なカルシウムシグナル伝達カスケードを開始し、維持するリンパ球活性化のために。リンパ球活性化と分化の間、これらのチャネルの発現パターンが変化し、機能的なネットワークは、免疫応答の間に適応することができます。それが自己免疫疾患に関与し、TおよびBリンパ球のサブセットで重要な役割を果たしているので、Kv1.3チャネルが重要である。イソギンチャクStichodactylaヒマワリからSHK毒素はKv1.3の強力なブロッカーである。 SHK-186、SHKの合成アナログ、自己免疫疾患の治療薬として開発されており、ファーストインマンフェーズ1 2011年に臨床試験を開始する予定です。このレビューはSHK-186の開発が進められてきた旅について説明します。
