La Dopamina Dependiente De La Neurotoxicidad De La Alfa-sinucleína: Un Mecanismo De Neurodegeneración Selectiva En La Enfermedad De Parkinson

Nature Medicine. Jun, 2002  |  Pubmed ID: 12042811

El mecanismo por el cual las neuronas dopaminérgicas de forma selectiva perdido en la enfermedad de Parkinson (EP) es desconocido. Aquí nos muestran que la acumulación de alfa-sinucleína en los cultivos de los resultados en humanos neuronas dopaminérgicas en la apoptosis que requiere la producción de dopamina endógena y está mediada por especies reactivas del oxígeno. Por el contrario, la alfa-sinucleína no es tóxico en no dopaminérgicos neuronas corticales humanas, sino más bien muestra una actividad neuroprotectora. La dopamina dependiente de la neurotoxicidad está mediado por la 54 de 83 kD complejos de proteínas solubles que contienen alfa-sinucleína y la proteína 14-3-3, que se elevan de forma selectiva en la sustancia negra en la EP. Por lo tanto, la acumulación de complejos de proteínas solubles sinucleína alfa-puede hacer tóxicos dopamina endógena, lo que sugiere un mecanismo potencial para la selectividad de la pérdida neuronal en la EP.

Regulación Transcripcional De La BACE1, La Beta-amiloide Proteína Precursora De Beta-secretasa, Por Sp1

Molecular and Cellular Biology. Jan, 2004  |  Pubmed ID: 14701757

Procesamiento proteolítico de la proteína precursora beta-amiloide (APP) en el sitio beta es esencial para generar Abeta. BACE1, la mayor beta-secretasa involucrada en escindir APP, ha sido identificado como un tipo 1 asociada a la membrana aspartil proteasa. Hemos clonado un fragmento de 2,1 kb aguas arriba del gen humano BACE1 e identificado regiones clave necesarias para la actividad promotora. BACE1 la expresión del gen está controlada por un promotor TATA menos. La región de -619 a 46 pb es el promotor mínimo para controlar la transcripción del gen BACE1. Varios putativos que actúan en cis elementos, tales como una caja GC, el HSF-1, una caja de PU, AP1, AP2, y el elemento de respuesta linfoquina, se encuentran en la región 5 'flanqueante del gen BACE1. Activación de la transcripción y los ensayos de gel de cambio demuestra que el promotor BACE1 SP1 contiene un elemento de respuesta funcional, y la sobreexpresión del factor de transcripción Sp1 potencia la expresión de genes y de procesamiento de BACE APP para generar Abeta. Por otra parte, nocaut SP1 reduce BACE1 expresión. Estos resultados sugieren que la expresión del gen BACE1 está estrechamente regulada a nivel transcripcional y que el factor de transcripción Sp1 juega un papel importante en la regulación de BACE1 para procesar APP generación de Abeta en la enfermedad de Alzheimer.

La Degradación De BACE Por La Vía De La Ubiquitina-proteasoma

FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. Oct, 2004  |  Pubmed ID: 15289451

La proteína amiloide beta (Abeta) se deriva de la proteína precursora de beta-amiloide (APP). La escisión de la APP por la beta-secretasa genera un fragmento C-terminal (APPCTFbeta o C99), que posteriormente se divide por la gamma-secretasa para producir Abeta. BACE (o BACE1), la mayor beta-secretasa involucrada en escindir APP, ha sido identificado como un tipo 1 asociada a la membrana aspartil proteasa. En este estudio, se encontró que el tratamiento con inhibidores del proteasoma resultó en un incremento en los niveles de APP C99, lo que sugiere que el procesamiento de APP en el sitio de la beta-secretasa puede verse afectada por la vía de la ubiquitina-proteasoma. Para investigar si la degradación de BACE está mediada por la vía del proteasoma, las células transfectadas establemente con BACE fueron tratados con lactacistina. Hemos encontrado que la degradación de BACE proteína fue inhibida por lactacistina en un tiempo y dependiente de la dosis manera. No proteasoma inhibidores de la proteasa no tuvo ningún efecto sobre la degradación de BACE. Proteína de BACE es ubiquitinated. Por otra parte, aumentó lactacistina APP C99 de producción y la generación de Abeta. Nuestros datos demuestran que la degradación de las proteínas y el procesamiento de BACE APP están regulados por la vía de la ubiquitina-proteasoma.

Mecanismo De La Actividad Promotora Del Gen Precursor De Proteína Beta-amiloide En Líneas Celulares Diferentes: Identificación De Un Fragmento Específico De 30 Pb En La Región Promotora Proximal

Journal of Neurochemistry. Sep, 2004  |  Pubmed ID: 15341527

La proteína beta-amiloide (Abeta) se depositará en los cerebros de la enfermedad de Alzheimer (EA) de los pacientes se proteolíticamente derivado de una proteína precursora de grandes Abeta (APP). APP patrones de expresión génica en la región del cerebro AD indican que las anomalías de la regulación de genes puede ser importante en la patología AD. Para comprender la contribución de diferentes tipos de células a la expresión del gen APP, se estudió en cuatro niveles: la actividad promotora (mediante el ensayo del gen informador de las células transfectadas), el ADN nuclear interacción proteína (mediante el ensayo de movilidad electroforética cambio), el mensaje de ARN y proteína ( por) el norte y el Western Blot, respectivamente. ARNm de APP y los niveles de expresión de proteínas fue mayor en el neuroblastoma y las células PC12 que en las células epiteliales gliales o el cuello uterino. La actividad relativa de las 12 regiones promotoras diferentes regiones y dentro de un solo variaba según el tipo de células / línea celular. Una región aguas arriba de reglamentación que contiene un sitio GATA-1 es necesario para la actividad en las células PC12 y gliales, pero no en células de neuroblastoma. Interacciones proteína-ADN se examinaron en tres elementos promotores distales y un proximales en extractos nucleares pertenecientes a las células neuronales y no neuronales. La región promotora proximal es importante para la línea celular específica expresión del gen APP. Caracterización de la interacción de la región activa reguladora con células de tipo específico factor nuclear (s) es importante para entender expresión específica de tejido de APP visto en sujetos de AD.

BACE1 La Expresión Génica Y La Degradación De Proteínas

Annals of the New York Academy of Sciences. Dec, 2004  |  Pubmed ID: 15681800

La deposición de la proteína beta amiloide en el cerebro es la principal característica patológica de la enfermedad de Alzheimer. La proteína amiloide beta se genera a partir proteína precursora beta-amiloide en la beta-secretasa y gamma-secretasa. Procesamiento proteolítico de la proteína precursora de amiloide beta en el sitio por BACE1 es esencial para generar la proteína beta-amiloide. BACE1, la mayor beta-secretasa involucrada en escindir la proteína precursora amiloide, ha sido identificado como un tipo 1 asociada a la membrana aspartil proteasa. En este estudio, se encontró que BACE1 expresión del gen está controlada por un promotor TATA menos. BACE1 expresión de los genes está estrechamente regulada a nivel transcripcional y el factor de transcripción Sp1 juega un papel importante en la regulación de BACE1 para procesar la proteína precursora amiloide generación de proteína beta amiloide. Por otra parte, se encontró que la proteína BACE1 es ubiquitinated, y la degradación de las proteínas BACE1 y el procesamiento de la proteína precursora de amiloide están regulados por la vía de la ubiquitina-proteasoma.

Reglamento Distinta De La Transcripción Y La Función De Los Humanos Y BACE2 BACE1 Genes

FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. May, 2005  |  Pubmed ID: 15857888

La proteína amiloide beta (Abeta) es el principal componente de las placas neuríticas en la enfermedad de Alzheimer (EA). Abeta se deriva de la proteína precursora beta amiloide (APP) por beta-y-gamma secretasas. El beta-APP sitio cortando la enzima 1 (BACE1) ha sido identificado como el principal beta-secretasa. BACE2 es el homólogo de BACE1. El gen BACE2 está en el cromosoma 21 y se ha implicado en la patogénesis de la EA. Sin embargo, la función de BACE2 en la generación de Abeta es controvertido. Algunos estudios han demostrado que BACE2 APP hendidas en la versión beta del sitio, mientras que otros estudios mostraron que rompe alrededor del sitio de la alfa-secretasa. Para dilucidar la participación de BACE2 en la patogénesis de la EA, se compararon BACE2 BACE1 y regulación de los genes y sus funciones en la generación de Abeta. Hemos clonado y caracterizado funcionalmente el humano BACE2 promotor. El gen BACE2 está controlada por un promotor TATA menos. A pesar de SP1 se puede regular tanto BACE1 y los genes BACE2, el análisis comparativo de secuencias y predicción de factores de transcripción mostraron poca similitud entre los dos promotores. BACE1 mayor división de APP en la producción de beta-sitio y Abeta BACE2 mientras que no lo hizo. La sobreexpresión de BACE2 aumentó significativamente los niveles de Sapp en medios condicionados, pero reduce notablemente la producción de Abeta. Derribo de BACE2 produjo un aumento de APP C83. Nuestros datos indican que a pesar de ser homóloga en secuencia de aminoácidos, y BACE2 BACE1 tienen funciones distintas y la regulación transcripcional. BACE2 no es un beta-secretasa, pero los procesos de APP dentro del dominio de Abeta en un sitio aguas abajo del sitio de corte alfa-secretasa. Nuestros datos argumentar en contra de BACE2 estar involucrado en la formación de placas neuríticas en el año.

Control De La Aplicación De Procesamiento Y El Nivel De Abeta Generación Por BACE1 Actividad Enzimática Y La Transcripción

FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. Feb, 2006  |  Pubmed ID: 16449801

La deposición de la proteína beta amiloide (Abeta) es uno de los rasgos característicos de la enfermedad de Alzheimer (EA) neuropatología. El beta-secretasa, una aplicación beta-sitio de escisión de la enzima 1 (BACE1), es esencial para la biosíntesis de Abeta. Aunque la inhibición de BACE1 se considera un objetivo terapéutico válido para la EA, la dinámica enzimáticas de BACE1 en la regulación del procesamiento de APP y la generación de Abeta aún no se ha definido por completo. Para examinar esta cuestión, estrechamente controlada inducible BACE1 la expresión de genes se estableció en la línea celular neuronal N2ABP1 y el E2BP1 de células no neuronales línea mediante un sistema inducible por ecdisona. El nivel de proteína BACE1 se incrementó en un tiempo y dosis-dependiente manera en las inducibles BACE1 células estables por tratamiento con A. inductor ponasterona La generación de APP CTFbeta, el producto de beta-secretasa, aumenta proporcionalmente con el nivel de expresión de la proteína BACE1. Sin embargo, Abeta40/42 producción aumentaron considerablemente, hasta el nivel de meseta con un aumento relativamente pequeño en BACE1 expresión. A pesar de aumentar aún más BACE1 incremento en la expresión de beta-secretasa actividad, que no tuvo ningún efecto adicional en la producción de Abeta. Por otra parte, se encontró que los niveles de ARNm y BACE1 BACE1 promotor de la actividad fueron significativamente menores que los niveles de mRNA de APP y la actividad del promotor de APP. Nuestros datos demuestran que la transcripción inferior BACE es responsable de la minoría de APP experimentando la vía amiloidogénica y relativamente menor producción Abeta en las condiciones normales, y que un ligero aumento en BACE1 puede inducir una elevación dramática en la producción de Abeta, lo que indica que el aumento de BACE1 potencialmente puede aumentar la formación de placa neurítico en el estado patológico.

Fugas De Barrido Y Reinicio Regular BACE1 La Expresión Génica

Molecular and Cellular Biology. May, 2006  |  Pubmed ID: 16611980

beta del sitio proteína beta-amiloide precursora (APP)-escisión de la enzima 1 (BACE1) es la beta-secretasa in vivo para el procesamiento de APP para generar la proteína beta-amiloide (Abeta). Deposición de Abeta en el cerebro es el sello distintivo de la enfermedad de Alzheimer (EA) neuropatología. La inhibición de la actividad de BACE1 tiene un gran potencial farmacéutica para el tratamiento de Alzheimer. La expresión del gen BACE1 es relativamente baja en vivo. El control de la BACE1 expresión no ha sido bien definido. Hay seis AUGs aguas arriba (uAUGs) en la secuencia líder 5 'del ARNm BACE1 humana. Hemos investigado el papel del promotor y las uATGs en la región 5 'no traducida (UTR) de la humana BACE1 gen en la transcripción de genes y BACE1 iniciación de la traducción. Nuestros resultados muestran que los uATGs primero y segundo son la parte integral del núcleo promotor mínimo del gen humano BACE1, mientras que la tercera uAUG se omite por encima de exploración ribosómica. El cuarto uAUG puede funcionar como un codón de iniciación de la traducción, y la supresión o mutación de este uAUG aumenta la expresión del gen corriente abajo. El uAUG cuarta parte de la 5'UTR BACE1 es responsable de la inhibición de la expresión de BACE1. Iniciación de la traducción por los BACE1 uAUGs y agosto fisiológica requiere eIF4G intacta. Nuestros resultados demuestran que durante la expresión de genes humanos BACE1, los ribosomas saltado algunos uAUGs por fugas de barrido y traducido de un marco de lectura abierto aguas arriba, que se inició de manera eficiente a la uAUG cuarto, y la traducción BACE1 posteriormente reinició en el sitio fisiológica agosto Tal exploración con fugas y reiniciación como resultado una expresión débil de BACE1 bajo condiciones normales. Alteraciones de la fugas de barrido y de reinicio en la expresión génica BACE1 podría desempeñar un papel importante en la patogénesis de la EA.

El Aumento De BACE1 Maduración Contribuye a La Patogénesis De La Enfermedad De Alzheimer En El Síndrome De Down

FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. Jul, 2006  |  Pubmed ID: 16816111

Casi todos los síndrome de Down (SD) característica de los pacientes desarrollan la enfermedad de Alzheimer (EA) neuropatología, incluyendo las placas neuríticas y ovillos neurofibrilares, después de la edad media. El mecanismo que subyace en la neuropatología de la EA DS ha sido desconocido. Abeta es el componente central de las placas neuríticas y se genera mediante la escisión de la APP por las gamma-secretasa beta y. Aquí nos muestran que la actividad de la beta-secretasa es especialmente elevado en DS. La proporción de individuos maduros de formas inmaduras de BACE1 se altera en el DS. DS tiene niveles significativamente más altos de madurez BACE1 proteínas en Golgi que los controles normales. Time-lapse análisis de imágenes en vivo mostraron que las proteínas eran en su mayoría BACE1 inmóvil en el aparato de Golgi en las células de DS, mientras que fueron sometidos a tráfico normal en los controles. Por lo tanto, la sobreproducción de Abeta en DS es causada por el tráfico anormal de la proteína BACE1 y maduración. Nuestros resultados proporcionan un nuevo mecanismo molecular por el que se desarrolla en AD DS y apoyar el potencial terapéutico de la inhibición de BACE1 en el año y DS.

BACE2, Como Una Novela APP Theta-secretasa, No Es Responsable De La Patogénesis De La Enfermedad De Alzheimer En El Síndrome De Down

FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. Jul, 2006  |  Pubmed ID: 16816112

La proteína amiloide beta (Abeta), el principal componente de las placas neuríticas en la enfermedad de Alzheimer (EA), se deriva de la APP por divisiones sucesivas de la beta-secretasa y gamma de. El beta-APP sitio cortando la enzima 1 (BACE1) es el principal beta-secretasa en vivo. Beta-site APP escisión enzimática 2 (BACE2) es el homólogo de BACE1. La mayoría de las personas con síndrome de Down (SD), también llamado síndrome de trisomía 21, se desarrollará neuropatología de la EA en la edad madura. Nosotros y otros han demostrado que la APP C99, el principal producto de la beta-secretasa y Abeta aumentan notablemente en DS. Desde BACE2 se encuentra en el cromosoma 21, se especula que BACE2 puede jugar un papel en la patogénesis de la EA en DS. En este informe se encontró que BACE2 APP se unirá a las aguas abajo del sitio novela theta del sitio alfa, suprimir la producción de Abeta. La sobreexpresión de BACE2 por lentivirus reduce notablemente la producción de Abeta en las neuronas primarias derivadas de suecos ratones mutantes transgénicos APP. A pesar de una copia extra del gen BACE2 en DS y el aumento de su transcripción, BACE2 los niveles de proteína no se han modificado. Nuestros datos demuestran claramente que BACE2, como una novela de la teta-secretasa para escindir APP dentro del dominio de Abeta, no está involucrado en la patogénesis de la EA de los pacientes con SD, en su lugar, las intervenciones terapéuticas que potencien BACE2 puede prevenir patogénesis de la EA.

Ubiquitina-proteasoma Media La Vía De Degradación De La APH-1

Journal of Neurochemistry. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 17059559

La gamma-secretasa cataliza la proteólisis intramembraneous de tipo I varias proteínas transmembrana, incluyendo la proteína precursora beta-amiloide (APP), para generar la proteína beta-amiloide (Abeta), un jugador clave en la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer (EA). Los componentes críticos del complejo de la gamma-secretasa incluyen la presenilina (PS), nicastrin (NCT), presenilina potenciador-2 (PEN-2) y de la faringe anterior defectuosa-1 (APH-1). Las anomalías de la vía de la ubiquitina-proteasoma han sido implicados en la patogenia de la EA, mientras que el volumen de negocios PS y PEN-2 es regulada por esta vía, no se sabe si la vía de la ubiquitina-proteasoma también está implicado en la degradación de la APH-1 de proteína. En este estudio, se encontró que la expresión de endógenos y exógenos APH-1 aumentó significativamente en las células tratadas con proteasoma inhibidores específicos. El efecto de los inhibidores del proteasoma en APH-1 de la dosis y dependiente del tiempo. APH-1 proteína se ubiquitinated. Pulso y persecución experimentos de marcaje metabólico mostró que la degradación de los recién sintetizadas radiomarcados APH-1 proteínas fue inhibida por lactacistina. La alteración de los genes PS1 y PS2 no afectó a la degradación de la APH-1 por la vía de la ubiquitina-proteasoma. Por otra parte, la sobre-expresión de la APH-1 y la inhibición de proteasoma APH-1 la degradación de la gamma-secretasa facilitado la división de APP para generar Abeta. Estos resultados demuestran que la degradación de la APH-1 proteína está mediada por la vía de la ubiquitina-proteasoma.

La Hipoxia Facilita La Patogénesis De La Enfermedad De Alzheimer Hasta La Regulación De La Expresión Génica BACE1

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 17121991

El mecanismo molecular que subyace a la patogénesis de la mayoría de los casos de enfermedad esporádica de Alzheimer (EA) es desconocida. Los antecedentes de accidente cerebrovascular se encontró que se asocia con el desarrollo de algunos casos de AD, especialmente en la presencia de factores de riesgo vascular. Reducción de la perfusión cerebral es un componente común entre los factores de riesgo vascular, AD, y la hipoxia es una consecuencia directa de la hipoperfusión. Anteriormente hemos demostrado que la expresión de la proteína precursora de beta-sitio beta-amiloide (APP) la enzima división 1 (BACE1) BACE1 gen está estrechamente controlada, tanto a nivel de transcripción y traducción y que el aumento de BACE1 la maduración contribuye a la patogénesis de la EA en el síndrome de Down. Aquí hemos identificado un funcional hipoxia elemento sensible en el promotor del gen BACE1. La hipoxia hasta reguladas beta-secretasa escisión de APP y beta-amiloide producción de proteínas (Abeta) mediante el aumento de BACE1 transcripción de genes y la expresión tanto in vitro como in vivo. Tratamiento de la hipoxia marcado aumento en los depósitos Abeta y la formación de placas neuríticas y potenció el déficit de memoria en los ratones mutantes suecos APP transgénicos. En conjunto, nuestros resultados demuestran claramente que la hipoxia puede facilitar la patogénesis de la EA, y proporcionan un mecanismo molecular que vincula los factores vasculares a AD. Nuestro estudio sugiere que las intervenciones para mejorar la perfusión cerebral puede beneficiar a pacientes con EA.

Los Avances Recientes En Neurociencias Básicas Y Enfermedad Cerebro: De Sinapsis En El Comportamiento

Molecular Pain. 2006  |  Pubmed ID: 17196111

Descripción de los mecanismos neuronales básicos mantener la esperanza para el futuro tratamiento de la enfermedad cerebral. La 1 ª Conferencia internacional sobre la sinapsis, la memoria, la adicción a las drogas y el dolor se celebró en el hermoso centro de Toronto, Canadá el 21 a 23 agosto 2006. A diferencia de otras conferencias tradicionales, este nuevo encuentro se centró en tres objetivos principales: (1) para promover la investigación y el nuevo borde de corte de la neurociencia, (2) para fomentar el intercambio internacional de información y colaboraciones científicas, y (3) para proporcionar una plataforma para que los científicos activos para discutir los nuevos descubrimientos. Hasta 64 investigadores presentaron sus descubrimientos recientes, de los mecanismos básicos sinápticas de los genes relacionados con enfermedades del cerebro humano. Esta reunión fue en parte patrocinado por el dolor Molecular, junto con la Universidad de Toronto (Facultad de Medicina, Departamento de Fisiología, así como el Centro para el Estudio del Dolor). Nuestro objetivo para esta reunión es promover futuras colaboraciones científicas activas y mejorar la salud humana a través de investigaciones de neurociencias básicas fundamentales. La segunda reunión internacional sobre las neuronas del cerebro y la enfermedad se llevará a cabo en Toronto (29 a 31 agosto, 2007).

El ABCG1 Transportador De Colesterol Modula La Distribución Subcelular Y Procesamiento Proteolítico De La Proteína Precursora Beta-amiloide

Journal of Lipid Research. May, 2007  |  Pubmed ID: 17293612

Aunque los niveles de colesterol intracelular se sabe que influyen en la proteólisis de la proteína precursora beta-amiloide (APP), el efecto de genes específicos que regulan el metabolismo del colesterol en el procesamiento de APP sigue siendo poco conocida. El ABCG1 transportador de colesterol facilita la salida del colesterol HDL y se expresa en el cerebro. En particular, los mapas de genes humanos ABCG1 en el cromosoma 21q22.3, y los individuos con síndrome de Down (SD) por lo general se manifiestan con la enfermedad de Alzheimer (EA) neuropatología en sus 30 años. Este sentido, demuestran que la expresión de ABCG1 aumenta la proteína beta-amiloide (Abeta) en células HEK transfectadas de una manera que requiere la actividad funcional del transportador de colesterol. ABCG1 células que expresan también presentan mayor secretada APP (SAPP), el alfa y la secreción y la pantalla sAPPbeta aumento de la superficie celular asociada a la APP. Estos resultados sugieren que ABCG1 aumenta la disponibilidad de APP como sustrato secretasa, tanto para las vías y amiloidogénicas nonamyloidogenic. In vivo, ABCG1 los niveles de mRNA son dos veces más abundante en el cerebro de Nintendo DS en comparación con la edad y sexo similares a los controles normales. Por último, tanto Abeta y los niveles de sAPPalpha se incrementan en la corteza DS relativa a los controles normales. Estos hallazgos sugieren que la alteración del metabolismo del colesterol y el tráfico de APP mediada por ABCG1 puede contribuir a la aparición acelerada de la neuropatología de la EA en DS.

La Degradación De Los Nicastrin Implica Tanto Proteasoma Y Lisosoma

Journal of Neurochemistry. May, 2007  |  Pubmed ID: 17326768

La glicoproteína nicastrin (NCT) es un componente esencial del complejo de la gamma-secretasa, un complejo de alto peso molecular que contiene las proteínas presenilina 1, APH-y Pen-2. El complejo gamma-secretasa no sólo está implicada en el procesamiento de APP, sino también en el tratamiento de un número creciente de otro tipo I proteínas integrales de membrana. Como la mayor subunidad del complejo gamma-secretasa, NCT juega un papel crucial en su activación. Existe una considerable información sobre la distribución, estructura y función de NCT, sin embargo, poco se sabe de su proteólisis. El presente estudio tiene como objetivo explorar el mecanismo molecular de la degradación de NCT. Hemos encontrado que, o bien la inhibición proteasomal o lisosomal puede aumentar significativamente los niveles de NCT tanto endógenos y exógenos en diversas líneas de células, y el efecto de estas inhibiciones en NCT era tiempo-y dosis-dependiente. Inmunofluorescente análisis microscópico reveló que NCT se acumula en el aparato de Golgi ER y después de la inhibición proteasomal, mientras que la inhibición lisosomal conduce a la acumulación de NCT en el aparato lisosomal. Co-inmunoprecipitación puede tirar hacia abajo tanto NCT y ubiquitina. En conjunto, nuestros resultados demuestran que la degradación de NCT implica tanto el proteasoma y el lisosoma.

Regula El SP1 De SNAP-25 Humana Expresión Génica

Journal of Neurochemistry. Apr, 2008  |  Pubmed ID: 18194215

La proteína asociada a sinaptosomas de 25 kDa (SNAP-25) es una proteína plasmática presináptica de la membrana. SNAP-25 juega un papel importante en la membrana de la vesícula sináptica de acoplamiento y la fusión, que está implicado en la regulación de la liberación de neurotransmisores. SNAP-25 se ha implicado en la patogénesis de los trastornos neuropsiquiátricos como la esquizofrenia, el trastorno de déficit de atención con hiperactividad y la enfermedad de Alzheimer. Hemos clonado un segmento 1584 pb de la región 5 'flanqueante de la SNAP-25 gen humano. Una serie de deleciones anidadas de los 5 'fragmento región flanqueante se subclonaron en el plásmido informador de luciferasa pGL3-básico. Las células se transfectaron con N2A las construcciones del promotor SNAP-25 y la actividad de luciferasa se midió como una indicación de la actividad promotora. Se identificó un fragmento de 188 pb que contenía el sitio de iniciación de la transcripción como de la región mínima necesaria para la actividad promotora. Varios supuestos de acción cis-elementos, entre ellos el SP1, el factor inducible por hipoxia (HIF), Camp de respuesta a la proteína, el factor de elemento de unión de las células T o linfocitos factor potenciador 1 (TCF/LEF1), AP1 y el transductor de señal y activador de la transcripción-6 ( STAT6) se encuentran en la región 5 'flanqueante de la SNAP-25 gen. Activación de la transcripción y los ensayos de gel de cambio mostró que la SNAP-25 humana promotor del gen contiene elementos funcionales de respuesta de SP1. La sobreexpresión de Service Pack 1 de SNAP-25 aumentó la expresión de genes y la inhibición de Service Pack 1 mediada por la activación transcripcional de SNAP-25 reduce la expresión de genes. Estos resultados sugieren que el SP1 juega un papel importante en la regulación de la expresión génica de SNAP-25 humana.

Ácido Valproico Inhibe La Producción De Abeta, Formación De Placas Neuríticas, Y Déficits De Comportamiento En Modelos De Ratón De Alzheimer Disease

The Journal of Experimental Medicine. Nov, 2008  |  Pubmed ID: 18955571

Placas neuríticas en el cerebro son una de las características patológicas de la enfermedad de Alzheimer (EA). Amiloide beta-proteína (Abeta), el componente central de las placas neuríticas, se deriva de la proteína precursora de beta-amiloide (APP) después de la escisión beta-y gamma-secretasa. El mecanismo molecular que subyace a la patogenia de la EA no está todavía bien definida, y no ha habido un tratamiento efectivo para la EA. El ácido valproico (VPA) es uno de los anticonvulsivantes más utilizados y agentes estabilizadores del estado de ánimo para el tratamiento de la epilepsia y el trastorno bipolar. Hemos encontrado que el VPA disminución de la producción Abeta mediante la inhibición de la GSK-3beta-mediada por la gamma-secretasa escisión de APP, tanto in vitro como in vivo. Tratamiento de VPA redujo significativamente la formación de placas neuríticas y los déficit de memoria en la mejora de ratones transgénicos modelo AD. También se encontró que la aplicación temprana de VPA fue importante para aliviar el déficit de la memoria de ratones modelo de Alzheimer. Nuestro estudio sugiere que el VPA puede ser beneficiosa en la prevención y el tratamiento de la EA.

TMP21 La Degradación Mediada Por El Sistema Ubiquitina-proteasoma

The European Journal of Neuroscience. Nov, 2008  |  Pubmed ID: 19046380

El complejo de la presenilina-asociada se refiere a dos actividades independientes de su desdoblamiento intramembranosas, es decir, la gamma-secretasa y la actividad epsilon-secretasa. El complejo de la gamma-secretasa requiere cuatro componentes críticos para su actividad: la presenilina 1, anterior faringe defectuoso de 1, 1 y presenilina nicastrin Enhancer 2, todos los cuales son degradados a través de la vía de la ubiquitina-proteasoma. Recientemente, TMP21, un tipo I proteína transmembrana involucrada en retículo endoplasmático / Golgi transporte, fue identificado como un miembro del complejo presenilina. Derribo de TMP21 reguladas selectivamente patógenos actividad de la gamma-secretasa, que resulta en aumento de la proteína beta amiloide 40 y 42, sin afectar a la épsilon-división de Notch. Una mayor comprensión de la degradación TMP21 está obligada a examinar las consecuencias biológicas de las proteínas a nivel de TMP21 aberraciones y su papel potencial en la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer y el desarrollo de fármacos. Aquí nos muestran que TMP21 humana tiene una vida media corta de aproximadamente 3 horas. El tratamiento con inhibidores de proteasomal puede aumentar los niveles de proteína TMP21 tanto en un tiempo-y dosis-dependiente manera, y los dos co-inmunoprecipitación y la demostración de que la tinción de inmunofluorescencia TMP21 es ubiquitinated. La inhibición de la vía lisosomal no muestran un aumento dosis-dependiente en los niveles de proteína TMP21. En conjunto, estos resultados indican que la degradación de TMP21, como con los otros presenilina asociados secretasa gamma miembros complejas, está mediada por la vía de la ubiquitina-proteasoma.

Preparación De Nanopartículas De PbS Por El Método De Transferencia De Fase Y La Aplicación De Pb-electrodo Selectivo De Base De Membrana De PVC

Analytical Letters. Oct, 2008  |  Pubmed ID: 19112518

Un nuevo enfoque para preparar las nanopartículas de PbS homogéneas por el método de transferencia de fase se ha desarrollado. Las condiciones de preparación fueron estudiadas en detalle, y las nanopartículas se caracterizaron por microscopía electrónica de transmisión (TEM) y la espectroscopia UV-Vis. Entonces una ventaja de nuevo electrodo selectivo de iones de cloruro de polivinilo (PVC) de la membrana sobre la base de estas nanopartículas de sulfuro de plomo se preparó, y la proporción óptima de los componentes en la membrana se determinó. Los resultados indicaron que el sensor exhibió un amplio rango de concentraciones de 1.0x10 (-5) a 1.0x10 (-2) mol.L (-1). El tiempo de respuesta del electrodo fue de aproximadamente 10 s, y el pH óptimo en el que podría ser el electrodo utilizado fue 3,0 a 7,0. Coeficientes de selectividad se indica que el electrodo era selectiva para el ion primario sobre el ion interferente. El electrodo se puede utilizar por lo menos 3 meses sin ninguna divergencia en el potencial. Se aplicó con éxito para determinar directamente los iones plomo en solución y se utiliza como un electrodo indicador en la valoración potenciométrica de iones de plomo con EDTA.

La Regulación Positiva De La Migración De Macrófagos Inhibitoria Expresión Gen Del Factor En El Accidente Cerebrovascular

Stroke; a Journal of Cerebral Circulation. Mar, 2009  |  Pubmed ID: 19131653

TMI se ha implicado a funcionar en muchos procesos inflamatorios. Este estudio examinó si la expresión del FOMIN se vio afectado en el accidente cerebrovascular y su mecanismo molecular subyacente.

La Degradación De Regulador De La Calcineurina 1 (RCAN1) Está Mediada Tanto Por Acompañante Mediada Por Autofagia Y Ubiquitina Proteasoma Caminos

FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. Oct, 2009  |  Pubmed ID: 19509306

Regulador de la calcineurina 1 (RCAN1), un gen identificado en la región crítica del síndrome de Down, ha sido implicada en la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer (EA). RCAN1 expresión fue demostrado ser aumentado en los cerebros de AD, sin embargo, el mecanismo de regulación de genes RCAN1 no está bien definida. El presente estudio fue diseñado para investigar el mecanismo molecular de la degradación de proteínas RCAN1. Además de ser degradado a través de la vía del proteasoma ubiquitina, se encontró que la inhibición lisosomal aumentado notablemente RCAN1 expresión de la proteína en un momento de forma y dosis-dependiente. La inhibición de la expresión RCAN1 macroautofagia reducido, lo que indica que RCAN1 degradación no es a través de una vía macroautofagia. Sin embargo, la interrupción de la autofagia mediada por acompañante (CMA) se incrementó RCAN1 expresión. Dos motivos de reconocimiento de la CMA se identificaron en RCAN1 proteína para mediar en su degradación a través de una vía de CMA-lisosoma. Un ensayo promotor demostrado además que la inhibición de la degradación en las células RCAN1 reducido calcineurina-NFAT actividad. Disfunciones de las vías de la ubiquitina-proteasoma y la autofagia lisosoma-han sido implicados en enfermedades neurodegenerativas. Por lo tanto, el esclarecimiento de RCAN1 la degradación de una vía de la ubiquitina proteasoma y la vía CMA-lisosoma en el presente estudio en gran medida puede avanzar en nuestra comprensión de la patogénesis de la EA.

BACE1 Promotor Del Gen Polimorfismos De Nucleótido único En La Enfermedad De Alzheimer

Journal of Molecular Neuroscience : MN. Sep, 2010  |  Pubmed ID: 20455082

La enfermedad de Alzheimer (EA) es el trastorno neurodegenerativo más que conduce a la demencia. La formación de placas neuríticas en el cerebro es una característica de la patogénesis de la EA. La proteína amiloide beta (Abeta) es el componente central de las placas neuríticas. Procesamiento de proteína beta-amiloide precursora (APP) en el sitio de la beta-secretasa por el APP beta-escisión de la enzima del sitio 1 (BACE1) es esencial para la generación de Abeta. La elevación de BACE1 actividad y la expresión se ha informado en los cerebros con EA. Sin embargo, ninguna mutación en la secuencia de codificación BACE1 ha sido identificado en los casos de EA. Humanos expresión BACE1 está estrechamente regulada en la transcripción y el nivel de traducción. Para determinar si hay algún polimorfismos de nucleótido único en la región promotora del gen BACE1 BACE1 que afecta a la expresión en la patogénesis del Alzheimer, en este estudio, hemos examinado 2,6 kb del ser humano BACE1 región promotora del gen de pacientes con Alzheimer de inicio tardío y se encontró que no había asociación significativa entre los polimorfismos de nucleótido único y los casos de Alzheimer.

Evidencia De Que La Gamma-secretasa Mediatiza Estrés Oxidativo Inducido Por Beta-secretasa De Expresión En La Enfermedad De Alzheimer

Neurobiology of Aging. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 18687504

El beta-secretasa (BACE1), una enzima responsable de la producción de beta-amiloide péptido (Abeta), se incrementa en el estrés oxidativo y se eleva en los cerebros de los pacientes con enfermedad esporádica de Alzheimer (EA). En este sentido, muestran que el estrés oxidativo no inducir a BACE1 expresión en la presenilina-1 (gamma-secretasa) con deficiencia de las células y en las células normales tratados con inhibidores de la gamma-secretasa. El estrés oxidativo inducido por la actividad de la beta-secretasa y los niveles de sAPPbeta fueron suprimidas por los inhibidores de la gamma-secretasa. Los niveles de las actividades de gamma y beta-secretasa fueron mayores en las muestras de tejido cerebral de pacientes con EA en comparación con los sujetos de control no dementes, y el elevado nivel de BACE1 en los cerebros de los ratones 3xTgAD se redujo en un tratamiento con un inhibidor de la gamma-secretasa. Nuestros hallazgos sugieren que la gamma-secretasa media estrés oxidativo inducido por la expresión de BACE1 que resulta en la producción excesiva de Abeta en el año.

NF-kB Inhibe La Señalización Ubiquitina Carboxilo-terminal Hidrolasa L1 Expresión Génica

Journal of Neurochemistry. Mar, 2011  |  Pubmed ID: 21210816

La ubiquitina carboxilo-terminal hidrolasa L1 (UCH-L1) es una enzima deubiquitinating que juega un papel regulador en la orientación proteínas de la degradación proteasomal. UCH-L1 es altamente expresado en las neuronas y se ha demostrado para promover la viabilidad celular y mantener la integridad neuronal. La reducción de los niveles de UCH-L1 se han observado en varias enfermedades neurodegenerativas, y la expresión de UCH-L1 se puede rescatar a la disfunción sináptica y déficit de memoria en ratones con Alzheimer modelo de la enfermedad. Sin embargo, los mecanismos que regulan la UCH-L1 expresión no se han determinado. En este estudio, se clonó un 1782 pb de la región 5 'flanqueante de la humana UCH-L1 y gen identificado un fragmento de 43 pb que contenía el sitio de inicio de la transcripción como de la región mínima necesaria para la actividad promotora. Secuencia de análisis reveló varios elementos supuestos normativos, incluyendo NF-kB, NFAT, CREB, NRSF, YY1, AP1, y STAT en el promotor de la UCH-L1. Un funcional de NF-kB elemento de respuesta fue identificado en la región promotora UCH-L1. La expresión de NF-kB supresión de la transcripción del gen UCH-L1. En el sistema de eliminación de RelA donde se realiza la ablación de actividad NF-kB, la UCH-L1 expresión se incrementó de manera significativa. Además, la activación de NF-kB señalización por el lipopolisacárido estimulador inflamatoria y TNF como resultado una disminución de la expresión génica UCH-L1 mediante la inhibición de su transcripción. Como NF-kB es un módulo importante de señalización en la respuesta inflamatoria, nuestro estudio sugiere la posibilidad de que la inflamación podría poner en peligro las funciones neuronales a través de la interacción de NF-kB y la UCH-L1. Una mejor comprensión de la NF-kB regulada por la UCH-L1 de la transcripción se proporciona una visión de la función de la respuesta inflamatoria en la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.

Regulador De La Calcineurina 1 (RCAN1) Facilita La Apoptosis Neuronal a Través De La Activación De Caspasa-3

The Journal of Biological Chemistry. Mar, 2011  |  Pubmed ID: 21216952

Las personas con síndrome de Down (SD), inevitablemente, se desarrollará la enfermedad de Alzheimer (EA) neuropatología algún momento después de la mediana edad, que puede ser atribuible a los genes triplicado en los individuos con síndrome de Down. Las características de la neuropatología de la EA son las placas neuríticas, ovillos neurofibrilares y la pérdida neuronal en diversas regiones del cerebro. El mecanismo que subyace a la neurodegeneración en la EA y DS sigue siendo difícil de alcanzar. Regulador de la calcineurina 1 (RCAN1) ha sido implicado en la patogénesis del síndrome de Down. Nuestros datos muestran que RCAN1 expresión es elevada en la corteza de los pacientes con DS y AD. RCAN1 expresión puede ser activado por la dexametasona hormona del estrés. Un elemento funcional respuesta glucocorticoide se identificó en la región promotora RCAN1 isoforma 1 (RCAN1-1), que es capaz de mediar la regulación de RCAN1 expresión. Aquí nos muestran que la sobreexpresión de RCAN1-1 en las neuronas primarias se activa la caspasa-9 y caspasa-3 y, posteriormente, induce la apoptosis neuronal. Por otra parte, encontramos que la neurotoxicidad de RCAN1-1 es inhibida por knock-out de la caspasa-3 en caspasa-3 (- / -) neuronas. Nuestro estudio proporciona un nuevo mecanismo por el cual RCAN1 funciona como un mediador de la tensión y Ap-inducida por la muerte neuronal, y la sobreexpresión de RCAN1 debido a una copia extra del gen en el cromosoma 21 RCAN1 contribuye a la patogénesis de la EA en DS.

El Aumento De NF-kB Regula La Señalización Up-BACE1 Expresión Y Su Potencial Terapéutico En La Enfermedad De Alzheimer

The International Journal of Neuropsychopharmacology / Official Scientific Journal of the Collegium Internationale Neuropsychopharmacologicum (CINP). Feb, 2011  |  Pubmed ID: 21329555

Los niveles elevados de la enzima β-APP sitio de escisión de 1 (BACE1) se encuentra en el cerebro de algunos esporádicos enfermedad de Alzheimer (AD) de los pacientes, sin embargo, el mecanismo subyacente es desconocido. BACE1 unirá β-amiloide proteína precursora (APP) para generar la proteína amiloide β (Ap), un componente central de las placas neuríticas en el cerebro de AD. El factor nuclear kappa B (NF-kB) de señalización desempeña un papel importante en la regulación de genes y está implicada en la inflamación, el estrés oxidativo y la apoptosis. En este informe se encontró que tanto la BACE1 y NF-kB niveles de p65 aumentaron significativamente en los cerebros de pacientes con EA. Dos funcionales NF-kB de unión a los elementos se identificaron en la región del promotor humano BACE1. Se encontró que el NF-kB p65 expresión dio lugar a aumento de la actividad promotora y la transcripción BACE1 BACE1, mientras que la interrupción de NF-kB p65 disminuyó BACE1 la expresión génica en p65 knockout (RELA-octavos de final) de las células. Además, NF-kB p65 conduce a la expresión hasta reguladas β-secretasa la escisión y la producción de Ap, mientras que los no-esteroides anti-inflamatorios no esteroideos (AINEs) inhiben BACE1 activación transcripcional inducida por una fuerte NF-kB activador del factor de necrosis tumoral-alfa (TNF -α). En conjunto, nuestros resultados demuestran claramente que la señalización de NF-kB BACE1 facilita la expresión génica y procesamiento de la PPA, y el aumento de BACE1 mediada por la expresión de NF-kB de señalización en el cerebro podría ser uno de los nuevos mecanismos moleculares que subyacen en el desarrollo de la EA en algunos casos esporádicos . Además, los AINE podría bloquear la inflamación inducida por la transcripción y la producción de BACE1 Ap. Nuestro estudio sugiere que la inhibición de la expresión de NF-kB BACE1 mediada puede ser una diana terapéutica valiosa para el tratamiento de Alzheimer.

Regulación Transcripcional De TMP21 Por NFAT

Molecular Neurodegeneration. 2011  |  Pubmed ID: 21375783

TMP21 es un miembro de la familia de carga proteína p24, que está implicado en el transporte de proteínas entre el aparato de Golgi y ER. Enfermedad de Alzheimer (EA) es la enfermedad neurodegenerativa más común que conduce a la demencia y la deposición de la proteína amiloide β (Ap) es la característica patológica de la patogénesis de la EA. Derribo de TMP21 expresión de siRNA provoca un fuerte aumento en la producción de Ap, sin embargo el mecanismo subyacente por el cual se regula la generación de TMP21 Ap es desconocida, y el gen humano TMP21 regulación de la expresión aún no ha sido estudiada.

La Pérdida De La CaMKII Activado En La Pérdida De La Sinapsis Subyacen a La Enfermedad De Alzheimer La Memoria

Journal of Neurochemistry. Nov, 2011  |  Pubmed ID: 21899538

Control De La Degradación De BACE1 Y Procesamiento De APP Por La Ubiquitina Hidrolasa L1 Carboxilo Terminal

Journal of Neurochemistry. Dec, 2011  |  Pubmed ID: 22212137

J. Neurochem. (2012) RESUMEN 10.1111/j.1471-4159.2012.07644.x: El depósito de proteína amiloide β (Ap) en el cerebro es el sello distintivo de la enfermedad de Alzheimer (EA) patogénesis. El beta-sitio proteína precursora amiloide (APP) escindiendo enzima 1 (BACE1) es la β-secretasa in vivo esencial para la generación de Ap. Anteriormente hemos demostrado que BACE1 es ubiquitinated y la degradación de BACE1 está mediada por la vía de la ubiquitina-proteasoma (UPP). Sin embargo, el mecanismo de regulación subyacente de la degradación por BACE1 UPP sigue siendo difícil de alcanzar. La ubiquitina carboxilo-terminal hidrolasa L1 (UCHL1) es una enzima deubiquitinating altamente específico para las neuronas, que cataliza la hidrólisis de los conjugados de ubiquitina de sustratos ubiquitinated. UCHL1 regula la ubiquitina-dependiente de la degradación de proteínas. Sin embargo, si UCHL1 está particularmente implicada en la degradación proteasomal de BACE1 y cuál es el papel de UCHL1 en la patogénesis de la EA sigue siendo difícil. Para investigar el efecto de la degradación UCHL1 el BACE1, las células Huch, una UCHL1 de forma estable sobre-expresado HEK293 línea celular, se estableció. Hemos encontrado que la inhibición de UCHL1 aumentó significativamente BACE1 nivel de proteína en una forma dependiente del tiempo. La mitad de vida de BACE1 se redujo en las células en comparación con HEK Huch. La sobreexpresión de la disminución de UCHL1 APP fragmento C-terminal C99 y los niveles de Ap en las células Huch. Por otra parte, la alteración de los niveles de genes UCHL1 significativamente elevados de BACE1 endógena, C99 y Ap en los ratones gad UCHL1 nulo. Estos resultados demostraron que UCHL1 acelera la degradación y la BACE1 afecta el procesamiento de APP y la producción de Ap. Este estudio sugiere que la potenciación de UCHL1 podría ser capaz de reducir el nivel de BACE1 y Ap en el cerebro, que le hace una nueva diana para el desarrollo de AD fármaco.

Reglamento De La Hipoxia ATP13A2 (PARK9) La Transcripción De Genes

Journal of Neurochemistry. Jan, 2012  |  Pubmed ID: 22288903

La enfermedad de Parkinson (EP) es el segundo de los trastornos neurodegenerativos más comunes con una combinación variable de síntomas motores y no motores. Las mutaciones en varios genes, entre ATP13A2 (PARK9) se informó que se asoció con la enfermedad de Parkinson. El mecanismo subyacente de la enfermedad de Parkinson no está bien definido, sin embargo, ambas causas genéticas y ambientales que contribuyen a ella. ATP13A2 localiza gen en el cromosoma 1 y contiene 29 exones que codifican para una proteína de 1180 aminoácidos con 10 dominios transmembrana. La expresión del gen anormal ha sido implicado en los trastornos neurodegenerativos. La regulación transcripcional del gen ATP13A2 es desconocida. En este informe hemos clonado y caracterizado funcionalmente en el ser humano ATP13A2 promotor del gen. Se mostró que la región promotora del gen ATP13A2 humano contiene elementos de respuesta hipoxia (HREs) que pueden unirse a factor de transcripción inducible por hipoxia factor de 1α (HIF-1α). La hipoxia a través de la transcripción upregulated ATP13A2 HIF-1α en células dopaminérgicas HEK293 y MN9D. Nuestro estudio indica que la señalización de la hipoxia juega un papel muy importante en la regulación de la expresión de genes humanos ATP13A2. Se necesitan más estudios para determinar el papel de la hipoxia en la patogénesis de la EP y su interacción con otros genes causantes de DP, que ofrecerá una visión sobre el papel de la hipoxia y la desregulación de la expresión génica en la enfermedad de Parkinson. © 2012 El Diario de Neuroquímica autores © 2012 Sociedad Internacional de Neuroquímica.

Reglamento De La APP-escisión De β-sitio De Una Expresión De La Enzima Del Gen Y Su Papel En La Enfermedad De Alzheimer

Journal of Neurochemistry. Jan, 2012  |  Pubmed ID: 22122349

La enfermedad de Alzheimer (EA) es la enfermedad neurodegenerativa más común que conduce a la demencia. Placas neuríticas son la neuropatología característica distintiva en los cerebros de Alzheimer. Procesamiento proteolítico de la proteína precursora de amiloide β-β en el sitio por la beta-amiloide β sitio de la proteína precursora del clivaje de la enzima 1 (BACE1) es esencial para generar Ap, un componente central de las placas neuríticas. BACE1 se incrementa en algunos cerebros con la EA esporádica, y la desregulación de la expresión génica BACE1 juega un papel importante en la patogénesis de la EA. Esta revisión se centrará en la regulación de la expresión del gen BACE1 en la transcripción, post-transcripcional de iniciación de la traducción, los niveles de traslación y después de la traducción, y su papel en la patogénesis de la EA. Otros estudios sobre la regulación de la expresión del gen BACE1 contribuirá enormemente a nuestra comprensión de la patogénesis de la EA y revelar los posibles enfoques novedosos para la prevención de la EA y el desarrollo de fármacos.