Translate this page to:
Italian
In JoVE (1)
Other Publications (8)
Automatic Translation
This translation into Italian was automatically generated.
English Version | Other Languages
Articles by Yuhai Cui in JoVE
JoVE General
Rilevamento delle interazioni proteiche in pianta utilizzando un gateway compatibile complementazione fluorescenza biomolecolare (BiFC) Sistema
1Department of Biology, University of Western Ontario, 2Southern Crop Protection and Food Research Centre, Agriculture and Agri-Food Canada
Abbiamo sviluppato una tecnica per testare interazioni proteina-proteina in pianta. Una proteina fluorescente gialla (YFP) è divisa in due frammenti non si sovrappongono. Ogni frammento viene clonato in-frame ad un gene di interesse attraverso il sistema Gateway, consentendo l'espressione di proteine di fusione. Ricostituzione del segnale YFP si verifica solo quando le proteine interagiscono inchiesta.
Other articles by Yuhai Cui on PubMed
Due Biofiltri Mutanti Di Delezione Di 12S Semi Proteine Di Immagazzinaggio in Arabidopsis Thaliana
Sono state identificate due mutanti di Arabidopsis naturalmente, isole di Capo Verde e Monte (Mr-0), con profili di proteina (SSP) 12S aberrante seed storage da SDS-PAGE. In entrambi mutanti, una delle band di globulina 12S manca mentre una nuova band di bassa massa molecolare è presente. Analisi di spettrometria di massa spettrometria di massa tandem (MS/MS) dei peptidi mutanti hanno rivelato che entrambi sono più brevi varianti di globulina 12S con eliminazione siti rilevati all'interno della subunità alfa 12S globulina cruciferin B (CRB) e C (CRC), rispettivamente. Analisi delle sequenze del DNA genomico che fiancheggiano i siti di eliminazione hanno dimostrato che entrambe le eliminazioni si è verificato a livello genomico. Questi due mutanti sono denominati CRBDelta12 e CRCDelta13 con il segno del delta che indica una delezione e numeri indicanti gli amminoacidi eliminati. Allineamento di queste due sequenze mutanti con quello della subunità di soia A3B4, per cui la struttura di cristallo è stata determinata di recente, hanno rivelato che l'eliminazione di CRCDelta13 si trova in una regione ipervariabile/disordinato e probabilmente non pregiudica la struttura della globulina esamerica. L'eliminazione di CRBDelta12, tuttavia, si trova in una regione di associazione che è pensata per essere importante per la formazione del hexamer. Tuttavia, sembra che CRBDelta12 si accumulano normalmente come giudicato dalla sua intensità di banda rispetto le altre subunità SSP sui gel di proteine. Così sembra che il seme può, in una certa misura, tollerare alcune mutazioni nelle sue proteine di immagazzinaggio.
AtMBD9: Una Proteina Con Un Dominio Di Metilico-CpG-binding Regola Il Tempo Di Fioritura E Sparare Ramificazione in Arabidopsis
La caratterizzazione funzionale di proteine nei mammiferi, contenente un dominio metilico-CpG-binding (MBD) ha rivelato che MBD proteine possono decifrare le informazioni epigenetiche codificate da metilazione del DNA e integrare la metilazione del DNA, modifica della struttura della cromatina e la repressione dell'espressione genica. Il genoma di Arabidopsis ha 13 putativi geni codificano per le proteine MBD, e nessuna funzione biologica specifica è stata definita per qualsiasi geni AtMBD. In questo studio, abbiamo identificato tre alleli mutanti in inserimento T-DNA presso il locus AtMBD9 e trovato che tutti loro esposte evidenti anomalie dello sviluppo. In primo luogo, i mutanti atmbd9 fiorito significativamente prima delle piante wild-type. L'espressione di FLOWERING LOCUS C (FLC), un importante repressor di Arabidopsis fioritura, era notevolmente attenuato le mutazioni AtMBD9. Questa riduzione di trascrizione FLC è stata associata con una significativa diminuzione del livello acetilazione dell'istone H3 e cromatina H4 di FLC i mutanti di atmbd9. In secondo luogo, i mutanti atmbd9 prodotto più rami di sparare aumentando l'escrescenza di gemme ascellari quando confrontato con selvaggio-tipo piante. I due fattori principali noti controllando l'escrescenza di gemme ascellari in Arabidopsis, auxina e il percorso di crescita (MAX) più ascellare, trovate non per essere coinvolti nella produzione di questo enhanced sparare ramificazione fenotipo atmbd9 mutanti, che indica che AtMBD9 può disciplinare un romanzo percorso per controllare sparare ramificazione. Questo percorso non è correlato all'espressione FLC sovraespressione della FLC in atmbd9-2 restaurato il suo tempo di fioritura a uno simile a quello del tipo selvatico, ma non alterava il fenotipo di ramificazione di sparare.
La BRAHMA Arabidopsis Atpasi Di Rimodellamento Della Cromatina è Coinvolto Nella Repressione Dei Geni Maturazione Semi in Foglie
Sintesi e accumulo di proteine di immagazzinaggio di seme (SSP) è un aspetto importante del programma di maturazione del seme. Geni che codificano per provider di servizi condivisi sono specificamente e altamente espressa nel seme durante la maturazione. Tuttavia, i meccanismi di reprimono l'espressione di questi geni nel tessuto della foglia non sono ben compresi. Per guadagnare la comprensione dei meccanismi di repressione, abbiamo eseguito una schermata genetica di mutanti che esprimono SSP in foglie. Qui, ci mostrano che le mutazioni che interessano BRAHMA (BRM), un SNF2 rimodellamento della cromatina ATPasi, causare espressione ectopica di un sottoinsieme di servizi condivisi e altri geni correlati a embriogenesi nel tessuto della foglia. Coerente con l'idea che tali ATPasi SNF2-come formano complessi della proteina in vivo, abbiamo osservato fenotipi simili per mutazioni di AtSWI3C, un partner BRM-interazione e BSH, un omologo SNF5 e subunità SWI/SNF essenziale. Gli esperimenti di immunoprecipitazione della cromatina mostrano che BRM è reclutato per i promotori di un certo numero di geni embriogenesi nel selvaggio-tipo foglie, tra cui i geni 2S, espressi in foglie di brm. Coerenti con il relativo ruolo nel rimodellamento nucleosoma, BRM sembra influenzare la struttura della cromatina del promotore At2S2. Così, il BRM-contenenti rimodellamento della cromatina ATPasi complesso coinvolto in molti aspetti dello sviluppo di pianta media la repressione dei provider di servizi condivisi nel tessuto foglia.
Arabidopsis Omologo Del Lievito TREX-2 MRNA Export Complesso: Componenti E Nucleoporin L'ancoraggio
Complessi di poro nucleare (NPC) sono vitali al nucleare citoplasmatico comunicazione negli eucarioti. Il complesso di lievito associato al NPC TREX-2, anche conosciuto come il complesso Thp1-Sac3-Cdc31-Sus1, è ancorato sull'ANP tramite il nucleoporin Nup1 ed è essenziale per l'esportazione del mRNA. Qui riportiamo l'identificazione e la caratterizzazione di Arabidopsis thaliana TREX-2 complesso putativo e suo ancoraggio nucleoporin. Prove fisiche e funzionali supportano l'identificazione dell'Arabidopsis orthologs di lievito Thp1 e Nup1. Di tre omologhi di Arabidopsis di lievito Sac3, due sono putativi TREX-2 componenti, ma, sorprendentemente, nessuno sono richiesti per l'esportazione del mRNA come sono nel lievito. Associazione fisica dei due omologhi di Cdc31, ma non l'omologo Sus1, con il complesso di TREX-2 è stata osservata. Oltre all'identificazione di questi componenti TREX-2, sono state osservate interazioni dirette dell'Arabidopsis omologo di DSS1, che è un componente del proteasoma stabilito nel lievito e animali, sia con il complesso di TREX-2 e del proteasoma. Questo suggerisce la possibilità di un collegamento tra i due complessi. Così questo lavoro ha identificato il complesso putativo di Arabidopsis TREX-2 e fornisce una base per gli studi futuri di esportazione nucleare in Arabidopsis.
ISTONE DEACETYLASE6 Interagisce Con FLOWERING LOCUS D E Regola La Fioritura in Arabidopsis
Deacetilazione e acetilazione dell'istone gioca un ruolo importante nei controlli epigenetici dell'espressione genica. DEACETYLASE6 dell'ISTONE (HDA6) è un deacetylase dell'istone di potassio ridotto DEPENDENCY3-tipo, e il 5-axe1 del mutante hda6 Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) visualizzato un fenotipo fioritura tardiva. axe1-5/flc-3 doppi mutanti fiorito prima che le piante di axe1-5, che indica che il fenotipo di fioritura tardiva di axe1-5 era FLOWERING LOCUS C (FLC) dipendente. Complementazione bimolecolare fluorescenza, pull-down in vitro e dosaggi di coimmunoprecipitation ha rivelato l'interazione proteina-proteina tra HDA6 e l'istone demethylase FLD. Si scoprì che il dominio SWIRM nella regione amino-terminale del FLD e la regione carbossi-terminale del HDA6 sono responsabili per l'interazione tra queste due proteine. Aumento dei livelli di acetilazione dell'istone H3 e H3K4 trimethylation presso FLC, MAF4 e MAF5 sono stati trovati in piante sia axe1-5 e 6-fld, suggerendo interazione funzionale tra deacetylase dell'istone e demethylase nel controllo della fioritura. Questi supporto risultati uno scenario in cui istone deacetilazione e demetilazione cross talk sono mediati da associazione fisica tra HDA6 e della cromatina FLD. analisi di immunoprecipitazione indicato che HDA6 associata alla cromatina di diversi geni bersaglio potenziale, tra cui FLC e MAF4. Analisi di espressione genica di genome-wide ha rivelato che, oltre ai geni correlati alla fioritura, geni coinvolti nella risposta di stress e silenziamento gene inoltre sono stati influenzati hda6 mutanti, rivelando molteplici funzioni di HDA6. Inoltre, un sottoinsieme dei trasposoni era up-regolato e visualizzato hyperacetylation aumento dell'istone, suggerendo che HDA6 può anche regolare trasposoni attraverso deacetylating dell'istone.
Modificazioni Della Cromatina E Rimodellamento Nella Pianta Abiotico Stress Responses
Rilevamento modifiche ambientali e avviando una risposta di espressione genica sono importanti per le piante come sessili autotrofi. La capacità dello status epigenetico alterare rapidamente e in modo reversibile potrebbe essere una componente chiave per la flessibilità delle risposte della pianta all'ambiente. È stato documentato il coinvolgimento dei meccanismi epigenetici in risposta a stimoli ambientali e ai diversi tipi di stress abiotici. Diverse sollecitazioni ambientali portano a condizione alterata metilazione del DNA, nonché modifiche degli istoni nucleosomal. Capire come meccanismi epigenetici sono coinvolti nella risposta di pianta a stress ambientali è altamente auspicabile, non solo per una migliore comprensione dei meccanismi molecolari di risposta allo stress pianta ma anche per la possibile applicazione nella manipolazione genetica di piante. In questa recensione, evidenziamo la nostra attuale comprensione dei meccanismi epigenetici di modificazioni della cromatina e rimodellamento, con enfasi sui ruoli di enzimi specifici modifica e ritocca fattori nelle risposte di stress abiotici pianta. Questo articolo fa parte di un numero speciale dal titolo: impianto di regolazione genica in risposta agli stress abiotici.
HDA6 Direttamente Interagisce Con DNA Metiltransferasi MET1 E Mantiene L'elemento Trasponibile Tacere in Arabidopsis
Il meccanismo molecolare di come il deacetylase dell'istone che hda6 partecipa al mantenimento di silenziamento elemento trasponibile (TE) in Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) non è ancora definito. In questo studio, mostriamo che un sottoinsieme di TEs transcriptionally è stato riattivato e che riattivazione TE è stato associato con elevata dell'istone H3 e H4 acetilazione come pure aumentato H3K4Me3 e H3K4Me2 in hda6 mutanti. Diminuita metilazione del DNA del TEs è stata rilevata anche in hda6 mutanti, suggerendo che HDA6 zittisce il TEs regolando l'acetilazione dell'istone e metilazione, nonché lo stato di metilazione del DNA dei TEs. Analogamente, le trascrizioni di alcuni di questi TEs sono state aumentate anche nella methyltransferase1 (met1) mutante, con diminuita metilazione del DNA. Inoltre, acetilazione H4, H3K4Me3, H3K4Me2 e H3K36Me2 sono stati arricchiti presso la TEs coregulated i mutanti met1 met1 e hda6. Analisi di interazione proteina-proteina indicano che HDA6 fisicamente interagisce con MET1 in vitro e in vivo, e ulteriore eliminazione analisi ha dimostrato che la regione carbossi-terminale del HDA6 e il dominio di omologia bromo-adiacente di MET1 erano responsabili per l'interazione. Questi risultati ha suggerito che HDA6 e MET1 interagire direttamente e agire insieme per silenziare TEs modulando la metilazione del DNA, acetilazione dell'istone e lo stato di metilazione dell'istone.
Repressione Sinergica Del Programma Embrionale Di Impostare Dominio Gruppo 8 E 2 Fiori Embrionali in Arabidopsis Piantine
Il programma di maturazione del seme si verifica solo durante la fine della fase di sviluppo dell'embrione, e la repressione dei geni maturazione è fondamentale per lo sviluppo del semenzale. Tuttavia, meccanismi che reprimono l'espressione di questo programma nei tessuti vegetativi non sono ben compresi. Una schermata di genetica è stata eseguita per mutanti che esprimono geni maturazione nelle foglie. Qui, si è dimostrato che le mutazioni che interessano SDG8 (impostare dominio gruppo 8), una putativo istone metiltransferasi, causa espressione ectopica di un sottoinsieme dei geni di maturazione nelle foglie. Ulteriormente, per indagare il rapporto tra SDG8 e le proteine Polycomb Group (PcG), che sono conosciute per reprimere molti geni evolutivo importante seme maturazione geni compresi, sono stati realizzati doppi mutanti e formazione di embrioni somatici è stato osservato su semenzali mutante con mutazioni in SDG8 ed EMF2 (embrionali fiore 2). Analisi dello stato di metilazione dell'istone presso i siti della cromatina di un certo numero di loci di maturazione ha rivelato un effetto sinergico di emf2 e sdg8 sulla deposizione del contrassegno dell'istone attivo che è il trimethylation di Lys4 su istone 3 (H3K4me3). Questo è coerenza con alta espressione di questi geni e formazione di embrioni somatici i mutanti di doppia sdg8 emf2. È interessante notare che, un doppio mutante di sdg8 e vrn2 (vernalization2), un paralogue di EMF2, è cresciuto e sviluppato normalmente a maturità. Queste osservazioni dimostrano una funzionale interazione cooperativa tra SDG8 e un EMF2 contenente PcG complesso nel mantenimento della cellula vegetativa identità di reprimere i geni di seme per promuovere lo sviluppo del semenzale. Il lavoro indica anche la specificità funzionale dei complessi PcG in Arabidopsis.
