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Articles by Zhiru Guo in JoVE
JoVE General
Aislamiento y cultivo de células madre adultas epiteliales de la piel humana
Department of Cancer Biology, University of Massachusetts Medical School
Una forma rápida y robusta de aislar células viables de adultos epiteliales madre de la piel humana se describe. El método utiliza la digestión enzimática de la matriz de colágeno la piel, seguido por el punteo de los folículos pilosos y el aislamiento de las suspensiones de células individuales o fragmentos de tejido para el cultivo celular.
Other articles by Zhiru Guo on PubMed
Deficiencia Humana Del Crecimiento Del Pelo Se Relaciona Con Un Defecto Genético En El Gen De La Fosfolipasa LIPH
Los mecanismos moleculares que controlan el crecimiento del cabello humano y la pérdida de pelo del cuero cabelludo son poco conocidos. En la detección de alrededor de 350.000 personas en dos poblaciones de la región del Volga-Urales de Rusia, hemos identificado una mutación genética en familias que muestran una forma hereditaria de pérdida de cabello y un defecto de crecimiento del cabello. Los individuos afectados son homocigotos para una deleción en el gen del cromosoma 3q27 en LIPH, causada por cortos intercalados nucleares elemento retrotransposón mediada por recombinación. El gen se expresa LIPH en los folículos pilosos y codifica una fosfolipasa llamada lipasa H (también conocido como membrana asociada a ácido fosfatídico selectivo A1alpha fosfolipasa), una enzima que regula la producción de lípidos bioactivos. Estos resultados sugieren que la lipasa H participa en el crecimiento del cabello y el desarrollo.
Multi-potencialidad De Una Nueva Línea De Células Epiteliales Inmortalizado Madre Derivadas De Folículos Pilosos Humanos
Hemos demostrado previamente que las células que expresan queratina 15 presentes en la región bulbo de los folículos pilosos presentan propiedades de células madre adultas. Ahora hemos establecido y caracterizado un adulto inmortalizada epitelial línea de células madre derivadas de células aisladas de la región protuberancia cabello humano folículo. Folículos telógeno de la piel humana se microdissected para obtener una población enriquecida de células de queratina 15 positivos madre de la piel. Al expresar el virus del papiloma humano 16 E6/E7 genes en estas células madre, hemos sido capaces de cultivar las células durante más de 30 pasajes y mantener un fenotipo estable después de 12 meses de paso continuo. La línea celular se comparó con las células madre primarios para la expresión de proteínas de células madre específicas, para propiedades in vitro de células madre, y por su capacidad para diferenciarse en linajes de células diferentes. Esta nueva línea celular, el nombre de Tel-E6E7 mostraron patrones similares de expresión para células normales de la madre de la piel y mantiene propiedades in vitro de células madre. Las células pueden diferenciarse en la glándula sebácea epidérmica, y los linajes del folículo piloso. Intacto beta-catenina señalización dependiente, que se sabe que el control de la diferenciación del pelo in vivo en roedores, se mantiene en esta línea celular. El Tel-E6E7 línea celular puede servir de base para reproducir válida, en modelos in vitro para el estudio de determinación de linaje de células madre y la diferenciación.
Inhibición De La Replicación Del Virus Pie - Y - Boca Disease in Vitro E in Vivo Por ARN Interferente Pequeño
Mediante el uso de programas informáticos de Bioinformática, se analizaron todas secuencias del genoma del virus (VFA) del pie - y - boca disease en bases de datos de dominio público. Basado en los resultados del análisis de homología, 2 específica ARN interferente pequeño (siRNA) dirigidos a regiones homogéneas de 3D y 2B1 de 7 serotipos del VFA fueron vectores preparados y 2 siRNA-expresión, pSi-FMD2 y pSi-FMD3, fueron construidos. Los vectores de siRNA-expresión se utilizaron para probar la capacidad de inhibir la replicación del virus en células de riñón (BHK-21) bebé hámster y ratones de lechal, un modelo animal pequeño utilizado de siRNAs. Los resultados demostraron que la transfección de BHK-21 células con plásmidos siRNA-expresando debilitaron significativamente el efecto citopático (CPE). Por otra parte, las células BHK-21 transfectadas transitoriamente con short hairpin RNA (shRNA)-expresando plásmidos fueron especialmente resistentes a la infección de los serotipos del VFA A, O y Asia I y esto los efectos antivirales persistieron durante casi 48 horas. Medimos los títulos virales, la dosis infectiva de cultivo de tejidos de 50% (TCID50) en células transfectadas con anti-VFA siRNAs resultó para ser más baja que la de las células control. Además, la inyección subcutánea de plásmidos de siRNA-expresando en el cuello de los ratones de amamantamiento hacía menos susceptibles a la infección con O y Asia serotipos del VFA.
Modelo De Ratón Transgénico Integración SiRNA Contra El Virus De La Fiebre Aftosa
Hemos construido 2 pequeño interferentes RNAs (siRNAs) dirigidos específicamente contra regiones homogéneas de 3D y 2B1 de 7 serotipos de los virus de la fiebre aftosa (VFA) y prueba la capacidad de inhibir la replicación del virus en células de riñón (BHK-21) bebé hámster y ratones de amamantamiento de siRNAs. En este estudio, hemos generado modelos de ratón transgénico integración short hairpin RNA (shRNA) dirigidos a microinfected VFA. Cuando se examina en el paso 7 en ratones transgénicos, el gene de destino fue encontrado todavía por PCR para integrarse en el genoma. En comparación con los ratones de control, los ratones transgénicos demostraron patología sólo ligeramente anormal cuando estaban infectados con el serotipo Asia 1 del VFA. El número de virus en los tejidos del ratón transgénico fue muy bajo y en algunos tejidos virus no podrían ser detectadas por inmunohistoquímica.
