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Articles by Zhongshu Tang in JoVE
JoVE Neuroscience
一个视神经挤压伤的小鼠模型，研究视网膜神经节细胞生存
1National Eye Institute, NIH, 2Ophthalmology Department, The Second Hospital of Harbin Medical University
该协议显示了如何逆行标记视网膜神经节细胞，以及如何随后视神经挤压伤，以分析视网膜神经节细胞的存活和凋亡。这是一个为不同类型的视神经病变，包括青光眼的实验性疾病模型。
JoVE Clinical and Translational Medicine
一个小鼠模型角膜血管生成研究掌上含量
角膜是独特的，因为它没有血管组织。然而，强大的血管的生长和生存，可以在角膜上，通过强有力的血管生成因子诱导。因此，角膜可以与我们提供一个有价值的工具，对血管生成的研究。此协议演示了如何执行角膜口袋检测，以及如何评估使用这个模型的血管生成因子诱导的血管生成的小鼠模型。
Other articles by Zhongshu Tang on PubMed
酪氨酸羟化酶表达在大鼠胎纹状体体细胞移植术后的感应。
神经干细胞分化为酪氨酸羟化酶 (TH)-表示单元格的细胞移植到不同的大脑区域对收到的 6-羟基多巴胺的黑质纹状体通路的病变的大鼠进行了研究。约 13.6 16.1%的存活的体细胞表示神经元标记 doublecortin 获得类似神经元的功能。同样，20.7 25.7%的存活前体细胞分化为星形胶质细胞移植术后。免疫组织化学分析表明嫁接前体细胞中前部的内侧前脑束 （薄片），但不是在纹状体的一小部分和黑质巴胺一方，表明强 TH 免疫反应。这表明德国 MFB TH 向纹状体前体细胞体内诱导更宽容。当这些细胞被移植到成人脑多巴胺能系统，结果进一步举例说明的属性特定于站点的分化和神经干细胞的潜力。
大鼠纹状体后 6-羟基多巴胺的黑质纹状体通路的病变差异表达蛋白的鉴定和比较分析： 淀粉样前体蛋白 2 表达上调。
在神经退行性过程中，触发叶栅的退行性变和随后的再生。然而，分子性质的涉及中枢神经系统神经变性的因素很大程度上不得而知。在这项研究，调查了成年大鼠后 6-羟基多巴胺病变脑纹状体蛋白表达的变化，以便更好地了解失的目标组织中发生的分子事件。其次是基质辅助激光解吸电离-的/时间飞行质谱的双向凝胶电泳分析了大鼠纹状体，病变同侧。七蛋白质在病变部位的响应被上调 (188.1 750%相比，控制): 淀粉样前体样蛋白 2 (APLP2)，激肽，葡萄糖激酶、 原肌球蛋白 alpha 链，键入脑-1 和 calpactin 我轻链 ；虽然四种蛋白、 神经表皮生长因子样 2、 微小染色体维持 6 和甲状腺激素受体 β-2，被下调 (到 36%至 59%的深水操作的控制水平）。三种蛋白与瑞士端口蛋白质数据库中可用的数据不匹配也确定。免疫组织化学分析表明黑质神经元中的 APLP2 和酪氨酸羟化酶的共定位。此外，APLP2 阳性神经元的黑质致密带宽度以及黑质帕尔网脉及纹状体的增加减少被观察到。此外，培养液的中国仓鼠卵巢细胞使 APLP2-751 (软骨素硫酸修改），但不是 APLP2-763 (硫酸改性的 nonchondroitin)，是能够增加胎儿中脑神经文化中的酪氨酸羟化酶阳性神经元的数目。这些结果表明 APLP2，已被认为是阿尔茨海默病，与相关联的蛋白质的表达上调在纹状体多巴胺能肌纤。它们还支持硫酸软骨素硫酸修改 APLP2 蛋白可能发挥重要作用，多巴胺黑质纹状体系统中的视图。
阿扑吗啡诱导文化中支持胎鼠脑多巴胺能神经元的营养因素。
脱水吗啡，邻苯二酚派生多巴胺 D1/D2 受体激动剂，目前被作为一种抗帕金森病药物药物使用。以前报脱水吗啡是能够引起人们表达的酶酪氨酸羟化酶，DA 神经元，虽然存在脑源性神经营养因子的胎鼠大脑皮层文化中的标记。本研究表明胎儿大鼠腹侧中脑神经文化与脱水吗啡治疗的多巴胺能神经元数量造成显著的增加。可以模仿的多巴胺受体 （D1 和 D2） 受体激动剂或阻止的 preincubation 与 D1/D2 受体拮抗剂脱水吗啡的行动。孵化的收件人中脑神经文化与脱水吗啡刺激捐助中脑神经文化从派生的培养液引起 3.72-fold TH 阳性神经元数目的增加。脑源性神经营养因子及神经胶质细胞源性神经营养因子增加的 mRNA 表达水平亦被发现在再相应蛋白表达在培养液中加上增加的脱水吗啡治疗中脑神经细胞。此外，观察到的营养活性可部分抵销脑源性神经营养因子或神经胶质细胞源性神经营养因子抗体。培养胎纹状体的单元格，但不是海马细胞，也回答了脱水吗啡治疗。膜过滤研究表明两者 < 30 kDa 和 > 50 kDa 分数所载富营养化的活动。后者的特性使它们区别于大多数已知的神经营养因子。这些结果表明脱水吗啡调制发展的多巴胺能神经元可能从而介导的多巴胺受体亚型 D1 和 D2 活化增加多种生长因子的生产。
胱抑素 C 可防止大鼠黑质多巴胺能神经元变性的： 体外和体内研究。
销毁的黑质纹状体多巴胺 (DA) 能通路触发各种持久性的响应，例如炎症和增加神经生长因子，在脑内黑质和纹状体的合成。这种反应的病理过程很差的特点和有助于继发性损害和 （或） 在中枢神经系统 (CNS) 的再生。以前，胱抑素 C 是神经变性的过程中受牵连。然而，其神经变性过程的生物学作用不理解，仍有争议。本研究发现 DA 耗尽大鼠纹状体，从后 6-羟基多诱导病变的第二个星期开始增加胱抑素 C mRNA 水平。免疫组织化学分析证实了胱抑素 C 蛋白水平的纹状体后 DA 消耗增加。免疫组织化学双标记荧光显示黑质纹状体神经元、 星形胶质细胞和小胶质细胞有助于提升的胱蛋白酶抑制 6-羟基多巴胺，DA 特定的神经毒素，导致 DA 神经元丢失在胎儿中脑神经文化中，这可以部分抵消胱抑素 C.治疗效果 C.暴露级别此外，体内 DA 神经元生存研究表明管理的胱抑素 C 在 6-羟基多致损伤大鼠部分获救黑质 DA 神经元。结果说明 6-羟多巴胺毁损致相对缓慢但持续上调的胱抑素 C 表达式，并建议抑制剂可能施加对 DA 神经元的神经保护行动。这一发现引起半胱氨酸蛋白酶抑制剂可为新的候选人，神经保护治疗帕金森病的可能性。胱抑素 C 可能产生耐药性有助于限制在帕金森病中的神经病变。
Pias1 互动和代谢型谷氨酸受体 8 Sumoylation。
组三突触代谢型谷氨酸受体 (mGluRs) 发挥中央调节作用通过 G-蛋白离子通道和氙气酶的信号影响突触前活动。像所有类 C G 蛋白偶联受体 mGluR8 已扩展的 C 终端胞 (CTD) 允许的下游信号调制的推定。在与 mGluR8a 和 8b 定植的成年大鼠脑 cDNA 文库的酵母双杂交屏幕 (mGluR8-C) 作为诱饵，我们确定了 sumo1 和 sumoylation 的四个不同组件级联 （ube2a，Pias1，Piasgamma，Piasxbeta） 作为相互作用的蛋白质。绑定使用重组 GST 融合蛋白证实 Pias1 交互不仅与 mGluR8 C mGluR8 C 对所有组三作用定植。 Pias1 绑定的化验所需区域 N 终端到共识 sumoylation 母题和不受精氨酸替代守恒赖氨酸 882 内这个母题。联合转染的遗传物质标记的 mGluR8a C、 sumo1 和 sumoylation 级联酶为表明，mGluR8a C 可以是体内 sumoylated 人胚胎肾 293 细胞。精氨酸替换的赖氨酸 882 内共识 sumoylation 母题，但没有其他守恒的 lysines 内 CTD，废除体内 sumoylation。我们的研究结果都符合及其类似物的 sumoylation 提供的组三作用调控的新机制。
Sumoylation 神经元： 核和突触的角色吗？
Sumoylation 是原来还以为只有目标核蛋白质的翻译后修饰。有确凿证据证明，但是，sumoylation 的作用是更趋多样化： 属于不同蛋白质家庭 (葡萄糖转运蛋白、 K(+) 渠道与代谢型谷氨酸受体） 的三种细胞膜蛋白有已显示为 sumoylated。此外，sumoylation 的转录因子，如心肌细胞增强因子 2 (MEF2)，找来调节突触形成。Sumoylation 在其他系统中的主要作用是修改蛋白质-蛋白质之间的相互作用，并因为蛋白质相互作用尤其是中枢神经系统中阐述和突触的形成和功能的关键，sumoylation 可构成神经元的主要监管机制。在这次审查，我们评估现有的数据和讨论的重要神经生物学过程如神经元发展和突触传递调控 sumoylation 的角色可能。
VEGF-B 抑制通过仅 BH3 蛋白基因在小鼠和大鼠中表达的生长因子受体介导 1 抑制细胞凋亡。
尽管它的早期发现和高的序列同源性向 VEGF 其他家庭成员，VEGF-B 的生物学功能仍然知之甚少。我们发现在这里新型功能 VEGF-b 作为一种强效抑制剂细胞凋亡。我们使用基因表达分析小鼠原发性主动脉平滑肌细胞，和通过使用鼠标和大鼠细胞株的实时荧光定量 PCR 结果确认，表明 VEGF-B 抑制浆液仅 BH3 的蛋白质和其它细胞凋亡和细胞死亡相关蛋白，包括 p53 和半胱氨酸蛋白酶的家属，通过激活生长因子受体-1 的编码基因的表达。与此相一致，VEGF-B 治疗获救从视网膜细胞凋亡和眼部神经退行性疾病和中风，模型鼠脑的神经元分别。有趣的是，在神经元存活的有效剂量的 VEGF-B 治疗不会造成视网膜新生血管形成，这表明 VEGF-B VEGF 家庭缺乏一般血管生成活性的同时具有强大的抗细胞凋亡影响的第一个成员。这些结果表明 VEGF-B 潜在可能提供治疗神经退行性疾病的新治疗选择。
蛋白质相互作用中的 Sumoylation 级联： X 射线结构的经验教训。
Sumoylation 是哪个相扑 （小泛素样修饰符） 中蛋白质共价键连接到基质蛋白的赖氨酸的多步蛋白质修饰反应。在这里，我们比较序列和参与与相关的泛和 neddylation sumoylation 叶栅的修饰符和酶的结构。通过使用修饰符/酶/基板之间的相互作用提供结构化数据，我们讨论和模型包括相扑 1 和 E1 和 E2 酶 Aos1-uba2，ubc9，或相扑 1 和 E2 与 E3 连接酶 RanBP2 和其基板 RanGAP1 的 sumoylation 配合物。他们比较提供了基础 sumoylation，蛋白质相互作用的洞察力，并建议相扑蛋白质如何可能再转移酶期间蛋白质修饰反应的各个步骤之间。
VEGF-B 是可有可无的血管增长，但其生存的关键和 VEGF-B 靶向抑制病理性血管形成。
不考虑 VEGF-B，同系物的 VEGF 发现很久以前，在反血管增生疗法中的一项重要指标。相反，它已从外地收到很少的注意。在此研究中，使用不同的动物模型和多种类型的血管细胞，我们发现虽然 VEGF-B 是可有可无的血管生长，它是其生存的关键。重要的是，VEGF-B 的生存影响是不仅对血管内皮细胞周细胞、 平滑肌细胞和血管干/祖细胞。在体内，VEGF-B 靶向抑制脉络膜和视网膜新生血管。机械化，我们发现 VEGF-B 血管生存影响通过许多血管 prosurvival NP-1 和生长因子受体-1 基因的表达调控。因此我们的工作指示 VEGF-B 在血管系统的功能是充当"求生存"，而不是"血管生成"因子和血管 B 抑制可能提供新的治疗机会，以治疗新生血管性疾病。
VEGF-b： 生存或血管生成因子吗？
尽管它的早期发现和高的序列同源性向 VEGF 其他家庭成员，VEGF-B 的生物学功能逗留很长时间，值得商榷，迄今为止 VEGF-B 已收到外地到很少的注意。最近，我们和其他人发现 VEGF-B (1) 通过抑制通过仅 BH3 的蛋白质和其它细胞凋亡/死亡相关基因的表达抑制细胞凋亡是烈性的生存因子为不同类型的单元格。(2) VEGF-B 具有诱导血管生长在大多数机构中的可以忽略不计的作用。相反，它是极其需要血管生存。VEGF-B 靶向抑制病理性血管生成废除血管生存在不同的动物模型。(3) 使用不同类型的神经损伤及神经退行性疾病模型、 VEGF-B 治疗保护濒危的神经元凋亡，无诱使不良的血管生长或渗透。因此，VEGF-B 是有烈性的生存抗凋亡作用，但却缺乏一般血管生成活性的 VEGF 家族的第一个成员。我们的工作因此主张 VEGF-B 的主要功能是充当"生存"，而不是"血管生成"因子和涉及的 VEGF-B 的治疗潜力治疗不同类型的血管和神经退行性疾病。
血小板衍生的生长因子 DD 针对逮捕病理血管生成通过调节糖原合酶激酶-3beta 磷酸化。
血小板衍生的生长因子 DD (血小板衍生生长因子-DD) 是最近发现血小板衍生生长因子家族的成员。在病理血管生成和底层的细胞和分子机制血小板 DD 的作用仍然很大程度上是蛮荒之地。在此研究中，使用不同的动物模型，我们表明血小板 DD 表达式是在病理血管新生，期间上调抑制血小板 DD 抑制脉络膜和视网膜新生血管。我们还展示了调解的血小板 dd.血小板 DD 致糖原合酶激酶-3beta (GSK3beta) Ser(9) 磷酸化和 Tyr(216) 脱磷体外和体内，功能的新型机制导致增加的细胞存活。始终如一，GSK3beta 活动是需要为血小板 DD 靶血管生成的影响。此外，血小板 DD 规管 GSK3beta 和许多其他重要的血管生成和凋亡的基因的表达。因此，我们发现血小板 DD 作为重要目标基因的反血管增生疗法由于其对血管及非血管细胞的多效性作用。血小板衍生生长因子 DD 抑制可能提供新的治疗选择，以治疗新生血管性疾病。
血小板衍生生长因子-CC 的生存影响通过调节 GSK3beta 磷酸化拯救神经元在大脑和视网膜细胞凋亡。
血小板衍生的生长因子抄送 (血小板衍生生长因子-CC) 是家庭的第三个家庭的成员血小板超过二十年，血小板 AA 和血小板衍生生长因子 BB 的原始成员研究后发现的。血小板衍生生长因子-CC 的生物学功能很大程度上仍有待探讨。我们的报告发现血小板衍生生长因子-CC 通过调节糖原合酶激酶 3beta 行为的一个有力的神经保护作用因素的一种新型 (GSK3beta) 活动。在几个不同动物模型的神经元损伤，如切断诱导的神经元死亡、 神经毒素诱导神经元损伤、-6-羟基诱导帕金森病多巴胺能神经元死亡和缺血引起的中风，血小板衍生生长因子-CC 蛋白或基因传递保护不同类型的神经元在视网膜和大脑中的细胞凋亡。另一方面，损失的函数检测使用 null 小鼠血小板衍生生长因子-C、 中和抗体或短发夹 RNA 表明血小板衍生生长因子-CC 虚/抑制加剧体内不同神经细胞组织中的神经元死亡。机械化，我们发现血小板衍生生长因子-CC 的神经保护作用通过调节 GSK3beta 磷酸化和表达。我们的数据表明血小板衍生生长因子-CC 是急需的神经元存活，有可能用于治疗神经退行性疾病。应谨慎维护正常神经细胞功能进行抑制血小板衍生生长因子-CC-血小板衍生生长因子受体途径不同临床用途。
血小板衍生生长因子-CC 封锁对病理血管生成抑制通过作用于细胞和分子的多个目标。
确定病理血管生成因子独立通路的重要性是日益认识到由于新兴耐药抗 VEGF 的疗法。血小板衍生生长因子-CC 是超过二十年的研究血小板 AA 和血小板衍生生长因子-BB 后发现血小板衍生生长因子家族的第三名成员。血小板衍生生长因子-CC 和底层的细胞和分子机制的生物学功能仍然主要是蛮荒之地。在这里，我们使用不同的动物模型，报告中和抗体、 shRNA 或遗传删除抑制血小板衍生生长因子-CC 对抑制脉络膜和视网膜新生血管。重要的是，我们发现血小板衍生生长因子-CC 针对行事不仅对多个单元格类型重要的病理血管新生，如血管壁画和血管内皮细胞、 巨噬细胞、 脉络膜成纤维细胞和视网膜色素上皮细胞，也对其他重要血管生长的基因，如血小板衍生生长因子-BB 和血小板衍生生长因子受体的表达。在分子层面上，我们发现血小板衍生生长因子-CC 规管糖原合成酶激酶 (GSK)-3beta 磷酸化和体外和体内的表达。GSK3beta 激活受损血小板衍生生长因子-CC 诱导的血管生成和抑制 GSK3beta 废除血小板衍生生长因子-CC 封锁血管生成的影响。因此，我们发现血小板衍生生长因子-CC 作为重要的候选目标基因的反血管增生疗法和抑制血小板衍生生长因子-CC 可能治疗新生血管性疾病的治疗价值。
诱导血小板 C.独立 VEGF 的血管通路
VEGF 据说是在发育和病理的血管生成的主调节器。然而，在血管新生，血小板衍生生长因子-C 的作用仅仅处于正在显示的开始。我们和其他人所示血小板衍生生长因子-C 是病理血管生成的关键球员，因为其作用对多细胞目标。血小板衍生生长因子-C 所致的血管通路是很大的程度上，VEGF 独立。这些路径可能包括，但不是限于对血管细胞、 对组织基质成纤维细胞、 血小板衍生生长因子-C 的影响及对巨噬细胞的影响血小板衍生生长因子-C 的直接影响。两者合计，多效性、 多才多艺和独立 VEGF 的血管生成血小板衍生生长因子-C 的性质已跻身它反血管增生疗法最重要的靶基因。
复杂的生活，复杂的 VEGF B
没有其他家庭的成员 VEGF (血管内皮生长因子） 一直是那样神秘作为 VEGF B.尽管它的名称，VEGF-B 可以几乎不被视为生长因子因为增长相当通常发生在 Vegf-b 缺陷小鼠。此外，VEGF-B 是几乎没有血管生成在大多数情况下，虽然它预计将血管生成因子很长时间。在某些条件下，VEGF-B 证明有关的血管生长。在其他情况下，但是，VEGF-B 能够采取行动，抑制肿瘤的生长和血管生成。鉴于这些相互矛盾的研究结果，VEGF-B 的生物学功能出现神秘。在这次审查，我们总结 VEGF-B 生物学最新进展，并讨论其多方面的作用、 基础的机制，以及治疗的潜在影响。
