Summary
هذا العرض يظهر الفيديو وسيلة لحصاد اثنين من أهم هياكل الأوعية الدموية للغاية التي تدعم وظيفة الدماغ الأمامي. هم سطح الدماغي (سطحية) جنبا إلى جنب مع الأوعية الدموية المرتبطة السحايا (MAV) والضفيرة المشيمية التي هي ضرورية لتدفق الدم في الدماغ والسائل النخاعي (CSF) التوازن.
Abstract
تم إنشاء هذا العرض التقديمي الفيديو لإظهار وسيلة لحصاد اثنين من أهم الهياكل الوعائية للغاية، وليس المقيمين في الدماغ السليم، أن وظيفة الدماغ الأمامي الدعم. هم سطح الدماغي (سطحية) جنبا إلى جنب مع الأوعية الدموية المرتبطة السحايا (MAV) والضفيرة المشيمية التي هي ضرورية لتدفق الدم في الدماغ والسائل النخاعي (CSF) التوازن. النسيج المقطوع هو مناسبة لتحليل الكيمياء الحيوية والفسيولوجية، وتبين أنها لMAV أن تكون حساسة للتلف التي تنتجها الأمفيتامين وارتفاع الحرارة 1،2. وكذلك، فإن vasculatures الرئيسية والثانوية تحصد الدماغي في MAV ذات الفائدة المرتفعة يحتمل عند التحقيق concussive أنواع من صدمات الرأس. وMAV تشريح في هذا العرض يتكون من حنوني وبعض من الغشاء العنكبوتي (دورا أقل) من السحايا والأوعية الدموية الرئيسية والثانوية سطح المخ. والمشيمية الضفيرة تشريح هو الهيكل الذي يقيم في لateral البطينين كما وصفها أولدفيلد وماكينلي 3،4،5،6. الطرق المستخدمة لحصاد هذه الأنسجة 2 تسهل أيضا حصاد الأنسجة القشرية إقليمية خالية من السحايا والأوعية الدموية السطحية أكبر الدماغي، ومتوافق مع حصاد أنسجة المخ الأخرى مثل المخطط، تحت المهاد، الحصين، وما إلى ذلك من تشريح الأنسجة 2 يأخذ من مجموع 5 دقائق إلى 10. يمكن العثور على مستويات التعبير الجيني للتشريح وMAV الضفيرة المشيمية، كما هو مبين والمذكورة في هذا العرض في GSE23093 (MAV) وGSE29733 (الضفيرة المشيمية) في مستودع GEO NCBI. وكانت هذه البيانات، ويجري، وتستخدم للمساعدة في فهم المزيد من سير عمل MAV والضفيرة المشيمية وكيف أعصاب أحداث مثل ارتفاع الحرارة الشديد وAMPH تؤثر سلبا وظيفتها.
Protocol
على الرغم من أن لا يظهر في شريط الفيديو، وقد تم أولا إعطاء الفئران جرعة زائدة من 300 ملغ / كغ من بنتوباربيتال، مما أدى إلى التخدير في أقل من 3 دقائق، ثم قتل بقطع الرأس. وكانت أدمغتهم ثم بسرعة ولكن بعناية من إزالة الجمجمة وبرود في الجليد الباردة ملحي لمدة 5 دقائق. من المهم السماح لتبريد الدماغ هذا القدر من الوقت قبل تشريح MAV بحيث يمكن فصل MAV من سطح القشرة (أعلى طبقة I). ثم وضعت في الدماغ في الجزء السفلي من طبق بتري الزجاج يستريح على الجليد التي كانت مليئة (1 سم العميق) من الجليد الباردة ملحي أو 0.1 الفوسفات مخزنة المالحة الصوديوم M الرقم الهيدروجيني = 7.4. ويتم كل تشريح الدماغ مع بالنسبة للجزء الأكبر مغمورة في المياه المالحة.
1. إزالة الغدة الصنوبرية
- وضع ما يصل الدماغ الجانب الظهري (نسبة إلى الجزء السفلي من طبق بيتري). يقع الغدة الصنوبرية في المنطقة البطنية أكثر الذيلية بين نصفي الكرة الأرضية منقاري فقط لرانه المخيخ (عطلة الصنوبرية)، وأقل فقط أو على سطح السحايا خلال الأكيمية. إزالة الغدة الصنوبرية باستخدام الأولين طرف بنت صغيرة ملقط. ومن ردي اللون مثل القشرة ولكن في كثير من الأحيان ويحيط بقايا الدم والأوعية الدموية المتبقية من إزالة الدماغ.
2. إزالة MAV
- الوجه الدماغ على "رأسا على عقب" وفصل الشريان الفقري، أصغر الأوعية الدموية، والتي تغطي بونس السحايا السحايا من الأوعية الدموية والدماغ الأمامي لل. وبدأت بعد ذلك إزالة MAV الدماغ الأمامي.
من المهم أن تبدأ بطنيا في عملية التشريح. والشرايين الكبيرة الرئيسية للدائرة ويليس والشرايين الدماغية الأوسط (MCA) والشرايين الأمامية هي الأقوى وتكون بمثابة "السقالات" الذي أصغر الشرايين السطحية والشرايين من حنوني ويمكن بعد ذلك يتم إزالة غشاء من القشرة مع ما تبقى من السحايا. انظر استعراض Scremin 7 لمخام تمثيل مرئي وتفاصيل الأوعية الدموية السطحية الدماغي. - بدءا إما نصف الكرة، استخدم تلميح بنت صغيرة ملقط لقطع الشريان الخلفي التواصل الخلفي فقط لالمنعطف السباتي الداخلي. وهكذا، فصل الأشجار أكثر الأمامي والخلفي من الدماغ الأمامي الشرايين. كرر نفس العملية لنصف الكرة الأرضية المقابل.
- التي تجتاح MCA والشريان الأمامي مع ملقط، وسحب بلطف في اتجاه الأمامي الظهري بحيث يتم رفع MAV تغطي القشرة الأمامية البطنية (الكمثرية، الحديبة الشمية) على وحول المسالك حاسة الشم. هذا يزيل الكثير من MAV تغطي القشرة الأمامية (الحزامي والمداري).
- بدوره الدماغ بزاوية ° 45 ما بين 90 و طبق بيتري. يمكن تحرير الجانبي، المناطق الأكثر الأمامي من MAV المحيطة المناطق الجانبية القشرية (الانعزالية الحبيبية، الحسية الجسدية الثانوية والقشرة السمعية) من القشرة التي تجتاح بواسطة MCA وARTER المرتبطة بهاوسحب بلطف المنشأ ظهريا على طول القشرة. إذا لزم الأمر، يمكن استخدام نهايات ملقط لرفع وتحرير الشرايين الرئيسية من القشرة خلال تشريح.
- الآن إزالة المناطق الأكثر الخلفي الجانبي للMAV. (ملاحظة، فمن الأفضل للتبديل من نصف الكرة إلى أخرى أثناء هذه العملية الحصاد لضمان أن يظل MAV الباردة ورطب. أيضا، إذا تم مصادفة المقاومة في تحرير MAV من القشرة على مفتاح واحد إلى نصف الكرة نصف الكرة المقابل مؤقتا ثم انتقل مرة أخرى إلى نصف الكرة الأصلية في وقت لاحق.)
- لإزالة أكثر المناطق الظهرية للMAV المحيطة الحسية الجسدية الأولية والقشرة الحركية تحويل ما يصل الدماغ الجانب الظهري (نسبة إلى الجزء السفلي من طبق بيتري). لتحرير أخيرا MAV من الدماغ، استخدم طرفي ملقط على طول الجيب sagital.
ويمكن هذا الجزء المقطوع من MAV الاحتفاظ بشكل مؤقت في المياه المالحة الباردة الجليد حتى الاختبار والتحليل أو تجميد للتجهيز في وقت لاحق. غالباوMAV تغطي أكثر المناطق الخلفية / الذيلية من القشرة (القشور الأنفية الداخلية السمعية والبصرية والذيلية أكثر) لا تزال تعلق على القشرة. يظهر زواله في وقت لاحق في الفيديو عندما يتم تشريح MAV بين القشرة وخلف الطحال تغمر الأكيمية.
3. إزالة الضفيرة المشيمية
- موقف الجانب الظهري الدماغ صعودا وعقد في مكان مع أكبر ملقط ملقط ادفع أصغر أسفل خط الوسط من خلال نصفي الكرة الأرضية وبين استخدام ثم ينتهي إلى ثقب من خلال الثفني القشرة والإحضار (-3،3 ≈ مم من bregma) في الجزء العلوي من خط الوسط من قرن آمون.
- استخدام ملقط لسحب القشرة مع الثفني بعيدا عن الحاجز الحصين الظهرية و، وفضح معظم البطين الجانبي. يمكن أن يكون موجودا في الضفيرة المشيمية والتي حددها خط أحمر مائج ترسيم الشريان الرئيسي الذي يمتد طوله. استخدام طرفي ملقط لابعاد الجدران الجانبية للفين 3tricle وتكبير عليه في نهاية معظم الذيلية (-4،3 ≈ مم من bregma 8).
- باستخدام ملقط صغير، وسحب هذه الغاية الضفيرة المشيمية للالحرة. ثم انتقل إلى المنطقة الأمامية جدا بين الحاجز والمذنبة / putamen (مدى أكثر منقاري، ≈ +1.6 ملم من Bregma) ومع ملقط تكبير هذا الجزء من البطين وسحب المشيمية الضفيرة مجانا. تنفيذ الإجراء نفسه على نصف الكرة المقابل للحصول على ثاني المتبقية الضفيرة المشيمية.
يمكن مرة أخرى أن هذا النسيج الاحتفاظ بشكل مؤقت في المياه المالحة الباردة الجليد حتى الاختبار والتحليل أو تجميد للتجهيز في وقت لاحق.
4. إزالة MAV المتبقية في البطين الثالث 3 المغطي المهاد والأكيمية، وكذلك على أن المناطق الأكثر الذيل من القشرة بما في ذلك خلف الطحال، والقشرة البصرية السمعية
- إزالة الحصين كامل من نصفي الكرة الأرضية تعريض MAV أكثر من المهاد والأكيمية. إزالةهذا الجزء من MAV هو أقل بكثير من الصعب إزالة القشرة MAV أكثر.
- سحب هذا الجزء من MAV مجانا من أكبر استيعاب الأوعية الدموية التي تغمر الجزء الأمامي من المهاد وسحب بلطف نحو caudally. ويرتبط هذا الأوعية الدموية لشبكة أكيمي أعلاه وتجهيز الدم إلى الحصين الظهرية والظهرية شبكة المهاد. تسحبه بعيدا نحو caudally وخالية تدريجيا حتى وصلت شبكة supracollicular الأجزاء الأخيرة من الأوعية الدموية الشريانية دائرة الذيلية.
عند هذه النقطة، يجب اتخاذ المزيد من الرعاية لإزالة أي المتبقية MAV بطني الخلفي على سطح محبب خلف الطحال والسمعية البصرية الأولية والقشور. كما هو الحال مع غيرها من الفرع MAV تغطي الأجزاء الأمامية أكثر من القشرة، يمكن هذا النسيج الاحتفاظ بشكل مؤقت في المياه المالحة الباردة الجليد حتى الاختبار والتحليل أو تجميد للتجهيز في وقت لاحق. يجب إزالة أي المتبقية MAV بطني الخلفي المقطوع مع هذا القسم MAV الثانية هيوأضاف د الى الفئة الاولى MAV تشريح تغطي القشرة إذا كانت لتحليلها بشكل منفصل.
5. ممثل النتائج
عند تنفيذ تشريح بشكل صحيح، يجب أن يكون الناتج الأنسجة MAV في كيانين سليمة وزنها نحو 35 الى 45 المجموع ملغ. وMAV تشريح البداية المحيطة معظم القشرة يجب أن تزن حوالي 25 ملغ وMAV تغطي المهاد، ينبغي الأكيمية والقشرة القذالي تزن حوالي 15 ملغ. ينبغي أن يكون ردي اللون قليلا في من الدم المتبقي في الأوعية الدموية. ينبغي أن الضفيرة المشيمية الثنائية المقطوع يكون في اثنين من عينات الأنسجة سليمة مع كل ملغ 1-2 وزنها. على الرغم من أن يمكن إزالة الماء الزائد من MAV قبل التخزين أو المعالجة باستخدام المناديل الورقية مثل تلك المستخدمة في تنظيف العدسة، لتجنب فقدان الأنسجة أنها ليست فكرة جيدة لإزالة المياه الزائدة من الضفيرة المشيمية تشريح. الشكل 1 تم إنشاؤها ل مقارنة PROFIL التعبير وفاق في ثلاث مناطق (المخطط، القشرة الجدارية وMAV) في ظل ظروف سيطرة على استخدام اجيلنت-014879 الجامع الجرذ الجينوم 4x44K 60mer صفائف قليل النوكليوتيد (G4131F، اجيلنت تكنولوجيز، بالو ألتو، CA، NCBI GEO انضمام # GPL7294؛ GSE23093 وGSE29733 التي تكون موجودة في مستودع GEO NCBI). قطعتي الأرض في الشكل تظهر بالصور التعبير في 1) والمخطط مقارنة مع القشرة الجدارية و 2) MAV مقارنة مع القشرة الجدارية. من الواضح أن المخطط والقشرة الجدارية هي أكثر ارتباطا ببعضها البعض من MAV. وستعرض البيانات مقارنة الضفيرة المشيمية مع MAV في منشور المستقبل. ومع ذلك، فمن المرجح أن أكثر ارتباطا ملامح التعبير في MAV والضفيرة المشيمية لبعضها البعض مما هي عليه في المخطط والقشرة الجدارية. ويبين الشكل 2 التعبير الجيني استجابة لارتفاع الحرارة التفاضلية (ايه) مقابل AMPH في MAV مقارنة للتحكم وبعضها البعض.
المحتوى "> ومقارنة التعبير الجيني للجينات أكثر من 11،000 مع مسؤول رموز الجينات NCBI في MAV من الحيوانات التحكم لتلك المسجلة في المخطط والقشرة الجدارية. أكثر من 2000 من هذه الجينات كان تعبير 2.5 أضعاف أو أكثر مختلفة في MAV بالمقارنة مع الأنسجة العصبية الغنية اثنين، و 550 الجينات كان الفرق أكبر بمقدار 10 أضعاف في التعبير. كانت قليلا أكثر من 40٪ (253) من هذه الجينات مع انخفاض التعبير أضعاف-10 أو أكثر في MAV وكانت مرتبطة وظيفة الخلايا العصبية. كانت هناك 343 الجينات مع أكثر من 10 أضعاف التعبير أو أكبر في MAV مقارنة القشرة الجدارية والمخطط. وقد استخدم هذا الجدول قائمة من الجينات كنقطة انطلاق لتحديد التي الجينات مع لتخصيب عالية جدا في MAV. 1 قائمة الجينات مع أكبر من التعبير 15-أضعاف في MAV مقارنة القشرة الجدارية والمخطط ويصنفها فيما يتعلق وظيفة. ويتصل العديد من هذه الجينات إلى الأوعية الدموية و / أو الجهاز المناعي، وهذه روينبغي إثراء ypes من الجينات حوالي 5 - إلى 10 - إلى أضعاف بسبب زيادة الأوعية الدموية والدم نفسها موجودة في ذلك. ولكن، حتى مع وظائف الجينات عن الأوعية الدموية المعروفة عامة، بزيادة أعلاه أضعاف-15 يشير إلى تخصيب اليورانيوم في MAV. كانت هناك أيضا أعداد من الجينات مع تغييرات كبيرة جدا أضعاف التي كانت: 1) البروتينات المصفوفة خارج الخلية (لا تتصل بوجه خاص الأوعية الدموية)، 2) النقل والمذاب 3) الدهون واستقلاب حمض الريتينويك. كما تم العثور أيضا، النمو والقليلة التمايز الجينات أو عوامل النسخ.
الشكل 1. مقارنة بين التعبير الجيني في MAV مع القشرة الجدارية والمخطط. مؤامرة بركان مقارنة مستويات التعبير الجيني من القشرة الجدارية والمخطط (مخطط الأعلى) والقشرة الجدارية وMAV (مؤامرة أسفل). رموز الأحمر دلالة على الجينات التي هي مختلفة إلى حد كبير betweEN المناطق في ع <0.05 ولها التعبير الفرق 1.5 أضعاف أو أكثر بين المناطق. رموز سوداء تمثل الجينات التي لا تختلف اختلافا كبيرا بين المناطق (P> 0.05) وأقل من 1.5 أضعاف اختلاف في التعبير. رموز تشير إلى الجينات الوردي مع أقل من 1.5 أضعاف الفرق في التعبير ولكنها مختلفة بشكل ملحوظ إحصائيا عند 0.05 <P. رموز الصفراء تحديد الجينات التي لديها 1.5 أضعاف التعبير أو أكبر ولكن هذا التغيير ليس ذات دلالة إحصائية عند p <0.05.
الاختصارات
AMPH المنشطات
ايه للبيئة الناجم عن ارتفاع الحرارة
MAV السحايا الدماغي وما يرتبط بها من الأوعية الدموية
القاعدة تسيطر سوي الحرارة
الشكل 2. بركان المؤامرات آثار ارتفاع الحرارة والأمفيتامين على التعبير الجيني في MAV. مقارنةمستويات التعبير الجيني في MAV بعد المالحة، أو AMPH ايه في نقطة الوقت ساعة 3. رموز الأحمر دلالة على الجينات التي تعتبر أن تكون مختلفة بشكل كبير في حين أن النقاط السوداء / دوائر تمثل الجينات التي لا تختلف اختلافا كبيرا بين المناطق. تم استخدام التحليل الإحصائي إضافية للتحقق من الفروق بين التعبير التي تحكم والعلاجات هي في الواقع ذات دلالة إحصائية.
| MAV التعبير التعبير الدماغ | NCBI الرموز جين | خصوصية الأنسجة أو وظيفة ذكرت (ق) |
| > 50 أضعاف | Anxa2 ل، Col8a1، ديس، Esm1، Glycam1، كوالا لمبور ل، Lect1، Lepr، لوم، Myh11، Ogn، Tagln، Thbs2، Tnnt2 | الأوعية الدموية والقلب |
| > 50 أضعاف | Ccl19، Cd74 ل، Defb1، Lrrc21، Mgl1، Mrc1، Msln، ررa2g5، Prg4، RT1-BB، RT1 دا | الجهاز المناعي |
| > 50 أضعاف | Adh1، Aebp1، Aldh1a2، Gstm2 | حمض الريتينويك وتصنيع الدهون |
| > 50 أضعاف | Cdh1، Col3a1، Col1a2، Colec12، Cpxm2، CPZ، دار، Emp3، Gpc3، Nupr1، OMD، Pcolce Slamf9، Tmem27، Tspan8 | مصفوفة خارج الخلية والخلية خلية تقاطعات |
| > 50 أضعاف | Aqp1، Asgr1، Kcnj13، Slc5a5، Slc6a13، Slc6a20، Slc22a6، Sned1، فريق العمل المعني بالموارد | والتوازن الأيوني المذاب |
| > 50 أضعاف | Alx3، Cdkn1c، Foxc2، Igfbp2، Ifitm1، Ifitm2، Nkx6-1، OSR1، Prrx2، Sfrp1، Tbx15. Upk1b، Wisp2، Wnt6 | تنمية وتنظيم النسخ |
| > 50 أضعاف | Gpha2، Mfap5، Mpzl2 Plac8، Scgb1c1، Sostdc1، Steap1 | غير معروف ومتنوعة |
| 30 حتي 50 أضعاف Anxa1 ل، Angpt2، C6 ل، Gjb2، Ptgis، Thbd، Timp1 | الأوعية الدموية والقلب | |
| 30 حتي 50 أضعاف | Casp12، CCL2، Ccr1، CD14، Cxcl10، Ifitm3، Klra5، Lgals1، Lgals3، Ms4a4a، Ms4a7، Plscr1، Spp1، Xcl1 | الجهاز المناعي |
| 30 حتي 50 أضعاف | Col6a3، Cpxm1، Efemp1، FMOD، مجان، Nid2 | مصفوفة خارج الخلية والخلية خلية تقاطعات |
| 30 حتي 50 أضعاف | حزب المحافظين، Cubn، Gcgr، S100a6، Scn7a، SCT، Slc4a5، Slc16a11، Slco1a5 | والتوازن الأيوني المذاب |
| 30 حتي 50 أضعاف | قدم مكعبة يوميا، Ch25h، Crabp2، Rarres2 | حمض الريتينويك وتصنيع الدهون |
| 30 حتي 50 أضعاف | Bmp6، Casp12، Dab2، Folr1، IGF2، Msx1، Tbx18، Twist1، Wnt5b | تنمية وتنظيم النسخ |
| 30 حتي 50 أضعاف | Cela3b، Cln6، C1qtnf7، Copz2، Dhrs7c، Gng11، Prss23، Srpx، فيم | غير معروف ومتنوعة |
| 15 إلى أضعاف-30 | ADM، Angpt1، Angptl2، BGN، Cklf ل، Cnn1، Cox8h، Ctsk، F13a1، Gja5، Klf4، وكس، Lyz، Myl9، Procr، Pros1، RT1 با، Serpinb10، Serping1، Serpinf1، Tgm2، Tnmd، Trim63، Txnip و، Vamp5، VTN | الأوعية الدموية والقلب |
| 15 إلى أضعاف-30 | إدا، Bst2، Ccl6، CD40، Cd68، Ctsc، داب، Faim3، Fkbp9، Fxyd5، Fmo1، Glipr1، Ier3، Ifi47، Igsf6، ماجستير، Nfatc4، RT1-DB1، Serpinb1a، Tir4، Tubb6 | الجهاز المناعي |
| 15 إلى أضعاف-30 | Adamtsl4، Col1a1، Crb3، DPT، Egfl3، Fbn1، Fbln1، Fbln5، FN1، Itgb4، Lama2، Lgals3bp، Loxl1، Mfap4، Mmp14، Mmp23، Ppic، Serpinh1، Timp3 | مصفوفة خارج الخلية والخلية خلية تقاطعات |
| 15 إلى أضعاف-30 | Cybrd1، Selenbp1، Slc2a4، Slc9A2، Slc13a3، Slc16a4، Slc22a8، Slc22a18 | والتوازن الأيوني المذاب |
| 15 إلى أضعاف-30 | Agpat2، Bdh2، Cyp26b1، Lpar3، Ltb4dh، Olr1، Pon3، Rbp1، Rbp4 | حمض الريتينويك وتصنيع الدهون |
| 15 إلى أضعاف-30 | Atf3، Dkk4، Eya2، Ifitm7، Ltbp1، Mustn1، Nr2f2، Ptrf، Sphk1، Tgfbi، Tcfap2b Tcea3، Wnt2b، Wnt5a، Zic1 | تنمية وتنظيم النسخ |
| 15 إلى أضعاف-30 | Adamts12، Adamtsl3، C1r، Crispld2، Crygn، Cyp1b1، DSE، Enpep، Enpp2، Epn3، Flna، Fmo3، Gnmt، Gprc5c، Hspb1، Klc3، Krt18، Krt19، MDK، Mesp1، Ms4a6a، Ms4a6b، Ms4a11، Net1، Pdlim2، Phactr2، Plp2، Ppp1r3b، Pqlc3، Rin3، Spag11، Sult1a1، Tmem106a، Wfikkn2 | غير معروف ومتنوعة |
* يجب أن الجينات المدرجة في الجدول أن تكون تعبيرا أكثر من 15 أضعاف أعلاه في المخطط وparietآل القشرة و 5 أضعاف فوق المستويات الطبيعية. وكان يستخدم أقل من نسب اثنين (MAV / أو المخطط MAV / القشرة الجدارية) لكل جينة للتجميع.
تم العثور على الجينات في الخلايا البطانية ولكن أيضا تلعب دورا رئيسيا على الأرجح في التوسط الاستجابات المناعية.
الجدول 1. الجينات مع * 15 أضعاف أو أكثر زيادة في التعبير MAV مقارنة المخطط والقشرة الجدارية.
Discussion
التقنية جوانب MAV والمشيمية تشريح الضفيرة
فمن الأهمية بمكان خلال تشريح MAV أن يكون الدماغ "المغمور" أكثر من مرة في ملحي أو الصوديوم الفوسفات مخزنة المالحة. سوف يسمح للMAV والقشرة ليذوى خلال تشريح يؤدي إلى MAV الالتزام بإحكام على I. طبقة قشرية هذا سوف يزيد من كمية الأنسجة القشرية تحصد مع / وMAV أو نتيجة عدم القدرة على في إزالة هذه المقاطع MAV الالتزام من القشرة. أيضا، والصبر ضروري أثناء تشريح. مرة أخرى، إذا كان أحد واجه بعض المقاومة في إزالة القشرة من MAV في نصف الكرة الجنوبي خلال تشريح، والتحول إلى نصف الكرة أخرى والعودة في وقت لاحق إلى الجانب حيث واجه مقاومة. هذه الطريقة لا تأخذ بعض الممارسة لاتقان ويتطلب حوالي 5 إلى 15 "الممارسة" تشريح قبل أن يتم التوصل إلى الحصاد موحدة باستمرار من الأنسجة MAV. طريقة البدء في تشريح وريموفال من MAV في دائرة الشرايين عند قاعدة الدماغ يسهل إزالة السحايا باستخدام أكبر الأوعية الدموية والدعم "السقالات".
يجب طرد الكثير من الدم في الأوعية الدموية في الأصل MAV بعد التضحية خلال تشريح، وأقل من 5٪ من الحمض النووي الريبي تحصد من MAV ينبغي أن تكون ذات منشأ الدم. فمن الممكن لإزالة ما يقرب من جميع الدم عن طريق perfusing الحيوان 50 الى 70 مل من محلول ملحي، وذلك باستخدام التقنيات النسيجية، وذلك قبل قطع الرأس وإزالة الدماغ. ومع ذلك، فمن ثم أكثر صعوبة لتصور الأنسجة MAV أثناء تشريح. المصادر الثلاثة على الأرجح من "التلوث" للأنسجة MAV هي الغدة الصنوبرية، طبقة قشرية I الأنسجة والأنسجة المتبقية البصلة الشمية ولكن من الممكن أيضا الحصول على الغدة النخامية الغدة الأنسجة في إعداد. تم الكشف عن تلوث الصنوبرية في MAV من MAV تحتوي على جولة قطر 1-2 مم المجال وهذا هو الأحمر الداكن اللون. وتتمثل المهمة الرئيسيةويعتبر عادة من الغدة الصنوبرية في أن تكون مختلفة تماما عن MAV. وظيفتها الأساسية هي إنتاج الميلاتونين الذي ينظم جوانب إيقاع الساعة البيولوجية 9، وlipoxygenation في 10 من السلائف الدهون. على الرغم من كان يعتقد أن الجينات وكس، الذي ينظم نشاط أكسيجيناز شحمية، لتكون موجودة في المقام الأول البالغين في الغدة الصنوبرية 10، نتائجنا تشير إلى أنه موجود أيضا باستمرار في مستويات كبيرة في MAV. تلوث المتبقية لمبة القشرية أو حاسة الشم النتائج في الأنسجة ردي MAV شبكة الإنترنت مثل وجود بعض أكثر كثافة 1-2 مم الأنسجة التي هي ونا كثيرا في اللون محاطة فيه. يمكن رصدها عن طريق "عائمة" للMAV على سطح المخزن المؤقت، ومن ثم إزالة الأنسجة القشرية أو أثقل مبة باستخدام ملقط تشريح 2.
إذا تلوث طبقة قشرية من MAV I الأنسجة، والأنسجة تحت المهاد البصري أو الغدة الصنوبرية موجود، ثم سوف يكون لها العديد من الجينات ذات دلالةأكبر cantly التعبير مما هو عادة موجودة في تشريح "نظيفة". سوف تلوث MAV مع الغدة الصنوبرية يؤدي إلى التعبير عن أعلى arylalkylamine N-أسيتيل (Aanat) وهو أمر ضروري لتخليق الميلاتونين. للأسف، إذا تلوث الصنوبرية يحدث أثناء تشريح MAV، فإن مستويات وكس في MAV لا تكون قادرة على أن تحدد بدقة. سوف تلوث MAV مع الأنسجة القشرية يؤدي إلى أعلى تعبيرا عن العصبية جينات محددة مثل hippocalcin (Hpca)، parvalbumin (Pvalb) و / أو مستقبلات الخلايا العصبية pentraxin (Nptxr). سوف تلوث MAV مع الأنسجة تحت المهاد البصري يؤدي إلى ارتفاع التعبير عن هرمون النمو 1 (GH1)، proopiomelanocortin (POMC). في حالة أن بعض التلوث موجود في الأنسجة تحصد، يمكن تحديد معظم هذه الجينات وعدم استخدامها في تحليل التعبير الجيني. هذا مهم بشكل خاص للجينات موجودة في الكحول المتداولةالتطوير التنظيمي التي قد تكون لا تزال موجودة في MAV أو الضفيرة المشيمية.
Interpretting بيانات التعبير الجيني من MAV المقطوع والضفيرة المشيمية
سطح الدماغي (سطحية) جنبا إلى جنب مع الأوعية الدموية المرتبطة السحايا (MAV) والضفيرة المشيمية ضرورية لتدفق الدم في الدماغ والسائل النخاعي (CSF) التوازن 4،11، 12، 13، 14، 15، 16، 17. حصاد الأنسجة مناسبة لتحليل الكيمياء الحيوية والفسيولوجية، وتبين أنها لMAV أن تكون حساسة للتلف التي تنتجها الأمفيتامين وارتفاع الحرارة 1،2 من خلال تحليل التعبير الجيني. هذه النتائج متناسبة مع ما هو معروف أيضا عن ارتفاع الحرارة الشديدة والتعرض لالأمفيتامينات إلى الأوعية الدموية في المخ في عام 18،19،20. البيانات السريرية البشرية يدعم الاعتقاد بأن الأوعية الدموية تحت الجافية حساسة للتلف من الأمفيتامين والميثامفيتامين 21،22. وكذلك، بما في vasculatures الرئيسية والثانوية الدماغيجي في تلك الطبقة حنوني للسحايا التي يتم حصادها في MAV ذات الفائدة المرتفعة يحتمل عند التحقيق concussive أنواع من صدمات الرأس 23،24 25. التعبير الجيني الشخصي الحالي أسفرت عن MAV يشير إلى أن حنوني وربما الأغشية السحائية العنكبوتية قد تلعب دورا أكبر مما كان متوقعا في تنظيم تكوين CSF. في المستقبل، من خلال استخدام تقنيات تشريح المجهر، فإنه قد يكون من الممكن فصل المزيد من الأنسجة التي تتألف منها MAV بحيث يمكن فصل الأغشية حنوني والعنكبوتي من الحاضر الأوعية الدموية الشرياني، وربما أكبر من بعضها البعض. وسيمكن هذا أفضل تفسير وظيفة كل من هذه المكونات 3 من MAV المقطوع.
Disclosures
ليس لدينا شيء في الكشف عنها. قد العمل المقدم هنا لا تعبر بالضرورة عن وجهة نظر إدارة الغذاء والدواء.
Acknowledgments
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل NCTR / FDA.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Normal Saline (9 grams saline/ 1 Liter H2O) | In-house | Dissection buffer | |
| 0.1 M Sodium Phosphate pH 7.4 | In-house | Dissection buffer | |
| Bone Rongeurs | Roboz | RS-8300 | Skull bone removal |
| Forceps-bent tip (4" long & 0.8 mm wide tip) | Roboz | RS-5135 or RS-5137 | Dissecting forceps |
| Forceps-straight tip (5.5" long ) | Roboz | RS-8124 or RS-8104 | Thumb Dressing forceps |
References
- Thomas, M., George, N. I., Patterson, T. A., Bowyer, J. F. Amphetamine and environmentally induced hyperthermia differentially alter the expression of genes regulating vascular tone and angiogenesis in the meninges and associated vasculature. Synapse. 63, 881-894 (2009).
- Thomas, M., et al. Endoplasmic reticulum stress responses differ in meninges and associated vasculature, striatum, and parietal cortex after a neurotoxic amphetamine exposure. Synapse. 64, 579-593 (2010).
- Ek, C. J., Dziegielewska, K. M., Habgood, M. D., Saunders, N. R.
- Oldfield, B. J. M., Michael, J. The Rat Nervous System. Paxinos, G. 2, Academic Press. San Diego. 391 (1995).
- Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance. Methods Mol. Biol. 686, 101-131 (2011).
- Johanson, C. E. Multiplicity of cerebrospinal fluid functions: ? challenges in health and disease. Cerebrospinal Fluid Res. 5, (2008).
- Scremin, O. U. The Rat Nervous System. Paxinos, G. 2, Academic Press. San Diego. 3 (1995).
- Paxinos, G., Watson, C. The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , Academic Press. San Diego. (1995).
- Johnston, J. D. Photoperiodic regulation of prolactin secretion: changes in intra-pituitary signalling and lactotroph heterogeneity. J. Endocrinol. 180, 351-356 (2004).
- Catala, A. The function of very long chain polyunsaturated fatty acids in the pineal gland. Biochim. Biophys. Acta. 1801, 95-99 (2010).
- Burnstock, G.
- Hamel, E. Perivascular nerves and the regulation of cerebrovascular tone. J. Appl. Physiol. 100, 1059-1064 (2006).
- Johanson, C. E., et al. Cognitive function and nigrostriatal markers in abstinent methamphetamine abusers. Psychopharmacology (Berl). 185, 327-338 (2006).
- Johnston, M., Papaiconomou, C. Cerebrospinal Fluid Transport: a Lymphatic Perspective. News Physiol. Sci. 17, 227-230 (2002).
- Johnston, M., Zakharov, A., Koh, L., Armstrong, D. Subarachnoid injection of Microfil reveals connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatics in the non-human primate. Neuropathol. Appl. Neurobiol. 31, 632-640 (2005).
- Johnston, M., et al. Evidence of connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatic vessels in humans, non-human primates and other mammalian species. Cerebrospinal Fluid Res. 1, 2 (2004).
- Kulik, T., et al. Regulation of cerebral vasculature in normal and ischemic brain. Neuropharmacol. 55, 281-288 (2008).
- Bowyer, J. F., Ali, S. F. High doses of methamphetamine that cause disruption of the blood-brain barrier in limbic regions produce extensive neuronal degeneration in mouse hippocampus. Synapse. 60, 521-532 (2006).
- Sharma, H. S., Westman, J., Nyberg, F. Pathophysiology of brain edema and cell changes following hyperthermic brain injury. Prog. Brain Res. 115, 351-412 (1998).
- Sharma, H. S., Sjoquist, P. O., Ali, S. F. Drugs of abuse-induced hyperthermia, blood-brain barrier dysfunction and neurotoxicity: neuroprotective effects of a new antioxidant compound H-290/51. 13, 1903-1923 (2007).
- Ho, E. L., Josephson, S. A., Lee, H. S., Smith, W. S.
- Ohta, K., et al. Delayed ischemic stroke associated with methamphetamine use. J. Emerg. Med. 28, 165-167 (2005).
- Brenner, L. A. Neuropsychological and neuroimaging findings in traumatic brain injury and post-traumatic stress disorder. Dialogues Clin. Neurosci. 13, 311-323 (2011).
- Case, M. E. Inflicted traumatic brain injury in infants and young children. Brain Pathol. 18, 571-582 (2008).
- Maas, A. I., et al. Prognostic value of computerized tomography scan characteristics in traumatic brain injury: results from the IMPACT study. J. Neurotrauma. 24, 303-314 (2007).
