The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Center for Regenerative Medicine, MGH - Massachusetts General Hospital
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Yusuf, R. Z., Scadden, D. T. Homing of Hematopoietic Cells to the Bone Marrow. J. Vis. Exp. (25), e1104, doi:10.3791/1104 (2009).
घर वापस आना जिससे प्रतिरोपित hematopoietic कोशिकाओं और टीका लगाना यात्रा या अस्थि मज्जा में निवास स्थापित कर रहे हैं घटना है. विभिन्न chemomkines और रिसेप्टर्स hematopoietic स्टेम कोशिकाओं के घर वापस आना में शामिल हैं. [1, 2]
इस कागज क्लासिक घर वापस आना hematopoietic स्टेम सेल के अध्ययन में इस्तेमाल किया प्रोटोकॉल की रूपरेखा. सामान्य में इस सेल की आबादी जिनके घर वापस आना की जरूरत के लिए जांच की जानी अलग, ब्याज की एक डाई के साथ इस आबादी को धुंधला हो जाना और एक प्राप्तकर्ता जानवर के रक्त प्रवाह में इन कोशिकाओं को इंजेक्शन शामिल है. प्राप्तकर्ता जानवर तो इंजेक्शन और अस्थि मज्जा प्रतिशत या जो ब्याज की डाई के लिए सकारात्मक रहे हैं कोशिकाओं की निरपेक्ष संख्या के लिए मूल्यांकन के बाद एक पूर्व निर्धारित समय पर बलिदान है. एक सबसे आम प्रयोगात्मक योजनाओं आनुवंशिक दो अलग जानवरों से hematopoietic कोशिकाओं (एक प्रकार जंगली जानवर और इसी दस्तक बाहर) के घर वापस आना दक्षता में तुलना है. इस अनुच्छेद के प्रयोग के रूप में इस तरह के ढांचे में hematopoietic सेल घर वापस आना प्रोटोकॉल का वर्णन करता है.
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घर वापस आना प्रक्रिया है जिससे स्टेम कोशिकाओं, पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं और विभेदित कोशिकाओं, अस्थि मज्जा रक्त प्रवाह या चूहों के अस्थि मज्जा गुहा में इंजेक्शन के बाद किया जा रहा में अपनी तरह सहित अस्थि मज्जा की कोशिकाओं. के रूप में परिभाषा से स्पष्ट है, एक वैज्ञानिक hematopoietic स्टेम कोशिकाओं, पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं या immunophenotyping द्वारा की पहचान की है और सेल छँटाई के द्वारा अलग विभेदित कोशिकाओं के घर वापस आना अध्ययन के लिए चुना कर सकते हैं. आमतौर पर वैज्ञानिकों अस्थि मज्जा वंश मार्करों के लिए समाप्त कोशिकाओं इंजेक्षन और इसलिए पूर्वज और स्टेम कोशिकाओं के लिए समृद्ध है.
ब्याज की कोशिकाओं इंजेक्शन की खुराक इस प्रयोग में एक चर है. कक्षों की संख्या 500 से 000 प्रति प्राप्तकर्ता माउस प्राप्तकर्ता माउस के अनुसार 20 लाख भिन्न हो सकते हैं. और अधिक कोशिकाओं को एक अस्थि मज्जा में पता लगाने आसान इंजेक्षन कर सकते हैं. सेल संख्या उपलब्धता इंजेक्शन संख्या सीमित कर सकता है. 20 मिलियन LKS स्लैम कोशिकाओं छंटनी अत्यंत कठिन शायद सबसे प्रयोगशाला सेटिंग्स में मौजूदा प्रौद्योगिकियों, जो मामले में एक ऊपर दिए गए रेंज के निचले अंत की ओर कक्षों की एक नंबर का उपयोग करने का फैसला हो सकता है के साथ भी अव्यावहारिक है.
घर वापस आना जो में अध्ययन किया जा रहा है नली जानवर भी अलग किया जा सकता है. इस प्राप्तकर्ता जानवर WT C57BL/6J माउस जो lethally 9 विकिरण के grays के साथ विकिरणित किया गया है के रूप में हम इस प्रयोग WT C57BL/6J माउस या एक माउस डब्ल्यू / WV जो विकिरणित नहीं किया गया है में किया जा सकता है. चाहे माउस या विकिरणित सवाल experimenter के लिए जवाब की कोशिश कर रहा है पर नहीं निर्भर करता है. यदि एक एक सेटिंग जहाँ साइटोकिन्स की एक बड़ी राशि जारी किया जा रहा है और संवहनी रिसाव को प्रेरित किया जा रहा है में घर वापस आना अध्ययन में रुचि है, एक विकिरणित WT माउस एक उपयुक्त विकल्प है. कोशिकाओं (500 000) की एक छोटी संख्या एक WT माउस जो इतना ऊपर confounders के बिना नहीं है कि स्टेम सेल खाली niches के एक छोटी संख्या के लिए घर कर सकते हैं विकिरणित किया गया है में अंतःक्षिप्त किया जा सकता है.
डब्ल्यू / WV चूहों सी किट रिसेप्टर समारोह में कमी कर रहे हैं और किसी भी शर्त के बिना स्टेम सेल टीका लगाना कर सकते हैं. यह हमें संवहनी चोट या cytokine रिलीज विकिरण की वजह से के अभाव में स्टेम कोशिकाओं के अध्ययन के लिए घर वापस आना की अनुमति देता है. इन चूहों के उपयोग के साथ रसद समस्या यह है कि WWv चूहों की पर्याप्त संख्या प्रजनन कॉलोनी आकार चिंताओं की वजह से प्राप्तकर्ता के रूप में सेवा प्राप्त करने के लिए मुश्किल है.
संक्षेप में, यद्यपि हम एक मानक घर वापस आना प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं, बदलाव के जवाब दिए और प्रयोग के डिजाइन के दौरान निर्धारित होना चाहिए होना प्रश्न पर निर्भर इस्तेमाल किया.
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इस प्रोटोकॉल का परीक्षण किया गया था और डॉ. डेविड Scadden की प्रयोगशाला में अनुकूलित. अनुदान दाना Farber कैंसर संस्थान / मैसाचुसेट्स जनरल अस्पताल में क्लीनिकल रुधिर और कैंसर विज्ञान फैलोशिप प्रोग्राम द्वारा प्रदान की गई है.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DPBS (Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Mediatech, Inc. | 21-031-CV | |
| Sterile Fetal Bovine Serum | Valley Biomedical, Inc. | BS3033 | |
| 0.5M EDTA (pH 8.0) | Boston BioProducts | BM-150 | |
| Tryphan Blue solution | Mediatech, Inc. | 25-900-CI | |
| ACK Lysing Buffer | Lonza Inc. | 10-548E | |
| Isopropranolol U.S.P. | Denison Pharmaceuticals, Inc | ||
| Vybrant DiD cell-labelling solution | Invitrogen | V22887 | |
| Vybrant DiI cell-labelling solution | Invitrogen | V22885 |
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ReplyPosted by: Meera N.December 1, 2010, 5:20 AM