Малого объема (1-3л) Фильтрация прибрежной морской воды Образцы

1. Настройка фильтрации аппарата
   1. Перед фильтрации, во-первых стереть конденсат из полных бутылок и взвесьте
   2. Место автоклаве бен на одной стороне насоса и отходов колбу с другой.
   3. Затем положите полную бутылку образца в автоклаве бен, однако, не снимайте крышку бутылки еще.
   4. Пропустите через трубки перистальтического насоса так, чтобы Луер конец трубки в колбу.
   5. С помощью пинцета удалите хлопка из стерильной пипетки 25 мл, и приложить пипеткой на другом конце трубки.
2. Фильтрация морской воды
   1. Для начала фильтрации морской воды, открыть бутылку и вставьте пипетки. Включите насос и набор скорости потока 1. Смотреть, чтобы вода закачивается в правильном направлении.
   2. Разрешить ~ 100 мл воды, чтобы пройти через все трубки.
   3. Выключите насос и прикрепить фильтр Sterivex к мужскому Луер установку на свободный конец трубки.
   4. Продолжить фильтрации пока вода не осталось в бутылках.
3. Хранение фильтры
   1. Чтобы сохранить фильтры, сначала изгнать всю оставшуюся воду с 30-60 мл шприца.
   2. Уплотнение нижней части Sterivex фильтр с парафильмом. Используя пипетку, добавьте 1.8ml буфера для лизиса на фильтр, сохраняя ~ 200 мкл пространства в фильтр для последующего добавления реагентов.
   3. Потом, уплотнение верхней части Sterivex фильтр с небольшой кусочек парафильмом, и этикетки фильтры с датой и образец идентификации.
   4. Магазин фильтров в предварительно меченных 50 мл пробирки сокола при -80 ° C
4. Убирать
   1. Вставьте 25 мл пипетки в колбу, содержащую 0,1% соляной кислоты, и включить насос.
   2. После мытья HCl, промыть трубы с автоклавного воды.
      
      Наконец, измерения и учета массы теперь пустые бутылки 1л для расчета объема воды, пропущенной через фильтр.

Представитель Результаты: Каждый 1 л пробы воды дает одну Sterivix фильтр, который содержит биомассу более 0,22 мкм. Он сохраняется в буфере для лизиса для последующего выделения ДНК и анализа. Окончательный результат состоит из одного Sterivix фильтр в 1-литровую бутылку, хранящиеся в буфере для лизиса и готовы к экстракции ДНК. Фильтр содержит биомассу более 0,22 мкм. Фильтры могут храниться при температуре -80 ° C до извлечения EDNA.

Крайне важно, чтобы протереть скамейки и насосы с мокрым полотенцем после использования, чтобы удалить любые вялые следы соленой воды, которые могли бы коррозии оборудования. Хотя процедура проста, время требование может быть обширным в зависимости от концентрации биомассы или мусора в образце фильтруется.