MCF - 7 세포주에서 세포 독성 Nanogenomedicine의 : MTT 분석

96 - 웰 플레이트에 MCF - 7 시딩 :

MCF - 7 세포는 37 Dulbecco의 수정된 이글의 중간 (DMEM) 10 % FBS, 100 U / ML 페니실린, 100 μg / ML 스트렙토 마이신을 포함하는 배지에서 25 T - 플라스크에 교양되었습니다 ° C 5% CO _2, 95 %를 공기와 습기 완료. 일단 ~ 90 % confluency에 도달, 그들은 0.05 % 트립신 / EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)를 사용하여 분리하고 trypan 파란색과 hemocytometer에 의해 계산되었다. 이러한 전지는 다음 4 농도 × 10 ⁴ 세포 / cm ² resuspended 및 8 채널 피펫으로 (즉, 250 μl / 음) 96 - 웰 플레이트에 추가되었습니다. 배경 흡수 들어, 일부 우물은 빈 제어로 휴대가없는, 즉 남아 있었다.

다른 nanopolyplexes와 세포 치료 :

40-50%에서 (48 시간 이후에 씨를 뿌린다) confluency, 재배 전지 nanostructured 스타 버스트 polyamidoamine의 dendrimers (즉, Superfect ® 및 Polyfect ®)와 공급자가 제공한 transfection 지침에 따라 새로운 테스트 폴리머로 치료했다. 세포는 또한 EGFR 대우 혼자 안티 센스를 스크램블하고,이 두 oligonucleotides의 세 가지 nanopolyplexes과 고분자 (n은 = 4)되었습니다. 푸르 웰스는 제어로 치료 남아 있었다. 사시간 후 치료 미디어가 제거되었습니다 신선한 미디어 보충함.

세포 생존 능력을 평가하기위한 MTT 분석 :

MTT 분석은 transfection 후 24 시간을 수행했다. 이러한 목적으로, MTT 솔루션은 PBS에 1mg/ml에서 준비되었으며 0.2 μm의 필터를 통해 필터링했습니다. 그런 다음, MTT 플러스 페놀 레드없는 DMEM 200 μl 50 μl은 세포가없는 빈 우물 제외하고, 각 우물에 추가되었습니다. 전지는 37 4 시간 동안 incubated되었습니다 ° C 5% CO _2, 95 %의 공기와 완벽한 습도. 사시간 후, MTT 솔루션은 제거하고 DMSO와 25μl 소렌손의 글리신 버퍼 (글리신 0.1M, 0.1M NaCl, 전화 : 10.5 0.1 NaOH)를 200 μl로 대체되었습니다. 접시는 더욱 실온에서 5 분 incubated되었고, 우물의 광학 밀도 (OD)는 570 nm의의 테스트 파장과 630 nm의의 기준 파장에서 플레이트 판독기를 사용하여 결정되었다.

MTT 분석은 다양한 방법으로 간주하고 이에 따라 세포의 생존은 다양한 치료시 평가 수 있습니다. 결과 formazan의 생산은 세포의 에너지 대사의 수준에 비례하는 것 같아요. 따라서도 세포 증식의 부재에 metabolically 활성 세포를 측정할 수 있습니다. 생산 formazan의 양은 배양 매체에서 MTT의 금액에 비례합니다. 동안 formazan의 최대 금액을 달성하는 데 필요한 MTT의 농도는 다른 세포 라인의 활용도에 따라 변경될 수 있습니다를 생산. 게다가,이 분석을 사용하는 데, 살아있는 세포의 매우 작은 번호가 감지 될 수 있으며, 세척 단계를 필요가 없기 때문에 오류의 발병률은 최소한의 것입니다. formazan의 흡수는 pH의 10.5 ¹ 버퍼를 추가로 극복할 수있는 핸드폰 번호뿐만 아니라 산도에 따라 다릅니다. formazan의 색상은 상온 ² 몇 시간 동안 안정합니다. 하나 이상의 접시의 경우에는 컨트롤뿐만 아니라 다른 접시에 포함되어야합니다. 그럼에도 불구하고,이 방법은 몇 가지 사소한 단점을 앓고 :) metabolically 비활성 세포는 죽은 세포 ³ B와 차별하실 수 없습니다)는 한 ^달 최대 4 ° C에 저장된 수있는 경우에도 MTT 솔루션, 빛으로부터 보호되어야 C) 그것은 매체 약물의 안정성을 검증하는 데 실패하고, D) MTT에 사용되는 전지는 이후 다른 assays에 대해 사용할 수 없습니다.

이것은 페놀 레드 570 nm의 흡수에 해당 evoked해야합니다. 또한, 그것은 이전에 페놀 레드 이란게 부정 확한 MTT 결과를 다음의 몇 가지 에스 트로겐 반응 세포 내의 세포 성장 패턴에 영향을 미칠 수있는 에스 트로겐의 활동을 가지고보고되었습니다. 이러한 영향을 방지하기 위해, 우리는 페놀 레드 ^넷없이 DMEM을 이용했습니다.