Maus Brustepithelzellen Form Mammospheres Während lactogenic Differenzierung

1. Die HC11 Zellen wurden bis zur Konfluenz für 6 Tage in RPMI 1640 Medium mit 10% fötalem Kälberserum, 5μg/ml Insulin, 10 mM HEPES, 10ng/ml epidermal growth factor (EGF), um Kompetenz zu etablieren ergänzt gewachsen.
2. Die Zellen wurden mit PBS gewaschen und gepflegt in Nährmedien ohne EGF für 24 Stunden.
3. Zur Induktion lactogenic Differenzierung wurden die Zellen bei der Differenzierung Medien, dh RPMI mit Dexamethason (10 ^-6 M), Insulin (5 ug / ml) und Prolaktin (5 ug / ml) genannt DIP inkubiert.
4. Bei den angegebenen Zeiten post-DIP Zusätzlich wurden mammospheres fotografiert und aufgelistet durch Phasenkontrast-Mikroskopie mit einer Olympus IX71-Mikroskop mit Digitalkamera.

Repräsentative Ergebnisse:

Geringe Leistungsaufnahme Vergrößerung der normalen Brustepithelzellen Zellmonoschichten und mehrere mammospheres sowie hohe Leistung Vergrößerung eines einzelnen mammosphere sind in Abbildung 1 gezeigt.


Abbildung 1. Mammospheres. (A) Normal Brustepithelzellen Zellmonoschichten sollte als eine flache Schicht von konfluenten Zellen angezeigt werden. (B) Nach 3-5 Tagen der DIP Stimulation mehrerer mammospheres erscheinen. Foto genommen 5 Tage nach der DIP hinaus. (C) Höhere Vergrößerung eines einzelnen Feld mit mammospheres bei 5 Tage nach der DIP hinaus.

Um für diese Technik erfolgreich zu sein und von bester Qualität, die Epithelzellen sind bei Konfluenz gehalten werden, bevor die mit lactogenic Hormone induziert. Es kann Situationen geben, wo es zahlreiche mammospheres, die die Quantifizierung erschwert werden. So quantitative Zwecke ist es am besten, die mammospheres zu einem Zeitpunkt fotografieren, wenn die Zahl der mammospheres kann gezählt werden.

Zwar gibt es verschiedene molekulare Marker verwendet werden, um den Grad der Differenzierung der lactogenic Brustepithelzellen bestimmen sind, gibt es einige morphologische Marker für Zellen in 2D Kultur gewöhnt. Die Fähigkeit der epithelialen Zell-Monolayer zu Miniatur-Kuppel Strukturen, in denen Milch Proteine ​​akkumulieren Form bietet einen Modus, mit dem die morphologischen Veränderungen, die während dieses Entwicklungsprozesses auftreten überwacht werden können.