Submit
Browse  

The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Turkish was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE General

Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

1,2, 1,2,3,4, 5,6, 1,2, 1,2,3,4, 7, 1,2, 1,2,8, 9, 5,6

1Department of Radiology, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, 2Athinoula A. Martinos Center for Biomedical Imaging, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, 3Gastrointestinal Unit, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, 4Department of Medicine, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, 5Center for biotechnology and Informatics, The Methodist Hospital Research Institute, 6Department of Radiology, The Methodist Hospital, Weill Cornell Medical College, 7Bejing University of Chinese Medicine, 8Department of Health Technology and Informatics, The Hong Kong Polytechnic University, 9Department of Radiology, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of   JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Recommend JoVE to Your Librarian

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 50.19.155.235, User IP: 50.19.155.235, User IP Hex: 840145899

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please or create an account with your institutional email address to access this content.

 

Video Article Chapters

Cite this Article: Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

Kwong, K. K., Kloetzer, L., Wong, K. K., Ren, J., Kuo, B., Jiang, Y., et al. Bioluminescence Imaging of Heme Oxygenase-1 Upregulation in the Gua Sha Procedure. J. Vis. Exp. (30), e1385, doi:10.3791/1385 (2009).

Abstract: Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

Gua Sha, deri, derialtı mikrovasküler kan ekstravazasyonu ve morluklar neden kazıma istihdam, geleneksel bir Çin halk tedavi. Bioluminescent optik görüntüleme için protokol HO-1-

Protocol: Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

  1. Kadın HO-1-lusiferaz transgenik farelerin (4-6 hafta yaş), varışta Taconic Çiftlikler, Inc satın alınabilir, farelerin en az 4 gün konaklama izin için bir hayvan barınağı tesisini yerleştirilir .
  2. Biyoparlaklık görüntüleme için hazırlanması:
    1. HO-1, her bir fare tartılır. Hayvan ağırlığı luciferase dozu hesaplamak için gereklidir.
    2. Epilasyon, hayvan ya da geri karın ve / üzerinde saç çıkarıcı Nair ® uygulamak için bir pamuk takas kullanınız . 5 ila 10 saniye bekliyorum. , Saçları temizlemek için temiz bir pamuk takas kullanın. Temiz kalan saçları temizlemek için distile su bir doku parçası batırın.
    3. Arka plan gürültüsünü azaltmak için bir IVIS 100 istasyonun görüntüleme platformu olmayan bir floresan siyah kağıt (Strathmore Artagain ® siyah kağıt) yerleştirin.
    4. Luciferase (Xenogen Corporation'ın) konsantrasyonu 7.5 mg / ml (steril H 2 O çözünmüş) çözüm hazırlayın. Luciferase dozu 65.5 mg / kg vücut ağırlığı. Böylece, 20 gram fare 0,175 ml luciferase çözüm intraperitoneal gerektirir. Bunu başarmak için, luciferase çözümü (0.175ml) tek bir enjeksiyon hacmi 26-gauge iğne ile bir şırınga önceden yüklenmiş
  3. Gua Sha prosedürü: Gua Sha biyoparlaklık görüntüleme protokolü çalıştırmadan önce sadece bir kez uygulanır. Gua Sha ağrılı olmadığından, fare sakin izofluran kısaca anestezi ihtiyacı var. Gua Sha prosedürü aşağıdaki adımları içerir:
    1. Gua Sha Gua Sha prosedürü sırasında birkaç kez hedef deri bölgelerinde yağlamak için yemeklik yağ veya distile su uygulayın.
    2. Seramik bir çorba kaşığı veya bir plastik kaşık kullanarak nazik ama sağlam kuvvet fare arka arka arkaya saç serbest bölge kazımak.
    3. Kazıma arka deri kırmızı olana kadar devam eder, genellikle 2 ile 3 dakika içinde elde edilen deri altındaki kan ekstravazasyonu bir işaretidir.
  4. HO-1 upregülasyonu birkaç saat içinde yavaş yavaş inşa edilir gibi Biyoparlaklık görüntüleme Gua Sha hemen veya birkaç saat sonra başlamış olabilir. Biyoparlaklık görüntüleme için prosedür:
    1. Izofluran (% 1.5) ve tıbbi dereceli hava karışımı ile dolu bir anestezi indüksiyonu odasında fare anestezisi.
    2. Fare uyuşturulduktan sonra, IVIS 100 optik görüntüleme istasyonu görüntüleme odasına fareyi hareket ettirin. Fare (yukarı karın) supin pozisyonda yerleştirin. Görüntüleme odasının sürekli izofluran,% 1.5 ile demlenir. Görüntüleme platformu 37 ısıtılır ° C fare sıcak tutmak için.
    3. , "Orta binning" görüntüleme edinimi ve maruz kalma süresi 30 saniye olarak ayarlanır ayarlayın. Görüntüleri elde etmek için Başlat. Manüel ya da otomatik olarak görüntü alımı her üç dakikada bir tekrar makineye ayarlayın. Satın alınmasından sonra ilk görüntü, ilgi (ROI) bir bölge, karın, göğüs ve baş alanı kapsayacak şekilde çizilir. Bu yatırım getirisi daha sonra kopyalanmış ve "Yaşayan Görüntü ®", IVIS 100 istasyonu ile birlikte yazılım kullanarak aşağıdaki resimlere yapıştırılır.
    4. Saniyede fotonlar sinyal yoğunluğu ölçülür. Mark sinyal yoğunluğu doruk değere ulaşmak ve görüntüleme fare tepe süre sonra yaklaşık 5 ila 10 dakika devam.
    5. Supin pozisyonda görüntüleme edinimi tamamlandığında, fareyi ters çevirin ve yüzükoyun pozisyonda (yedeklemek) yatıyordu. Hayvan görüntüleme yazılımı "Yaşayan Görüntü ®" kullanımı sırt ve baş alanı kapsayacak şekilde çizilmiş ROI 5 ila 10 dakika devam edin. Supin pozisyonda sonra yüzükoyun pozisyonda görüntüleme seçimi keyfidir. Bir birincil ilgi organlara bağlı olarak, yüzükoyun pozisyonda başlatmak için seçebilirsiniz. Başka bir seçenek görüntünün ayrı deneyler ve yüzüstü yatar pozisyonlarda.
    6. Yüzükoyun pozisyonda görüntüleme satın alma işlemi tamamlandığında, izofluran kapatın ve görüntüleme odasının indüksiyon odasına kurtarmak için fareyi hareket ettirin. Indüksiyon odasına tıbbi sadece hava ve fare genellikle bir dakikadan daha az uyanıyor ile demlenir.
    7. Post-processing için görüntüleme verileri kaydetmek.
    8. Ilk Görüntüleme çalışmadan sonra ilave görüntüleme satın almalar Gua Sha sonra birkaç gün boyunca yapılır. Bir örnek program, 12. saat, 24. saat, 36. saat, 48. saat, 72. saat ve 120 inci saat görüntüleme tekrarlandı ama kesin görüntüleme programı esnek olmasıdır . Ek görüntüleme oturumları ise daha uzun bir izlem gereklidir eklenebilir. Görüntüleme önce, saç büyüdü saç kaldırma işlemi tekrarlayın.
  5. Kontrol grubu için, tüm prosedürü tekrarlayın ancak Gua Sha (adım 3) atlayın. Farelerin aynı grup kontrolü ve Gua Sha, kontrol exp için kullanılıreriment en az bir ay daha sonra tercihen Gua sha işlem öncesi yürütülen ya da olmalıdır.

Temsilcisi Sonuçlar:

Gua Sha yanıt HO-1 in vivo upregülasyonu biyoparlaklık görüntüleri Şekil 1 gösterisi. Şekil 2'de grafik aynı fare Gua Sha ile ilgili tüm vücut optik akı (fotonlar / sn), 120 saatten fazla nicel temporal değişiklik gösterir ...

Şekil 1
Şekil 1 Soldan sırasıyla 18 saat, 36 saat ve 120 saat sonrası Gua Sha sağ ön Gua Sha önce aynı fare görünümünde (yatarak), temsili görüntü,. Gua Sha sonra, bir ilerleme, gastrointestinal sistem, genital sistem, karaciğer, böbrekler (arka görünümünde gösterilir), ve diğerleri bölgeleri kapsayacak birden fazla organlarda önemli bir sinyal yoğunluğu artış gözlemlemiştir. Lütfen buraya tıklayın Şekil 1'de bir büyük versiyonu için.

Şekil 2
Şekil 2 Şekil 1 aynı fare Gua Sha, 120 saat boyunca izlenen tüm vücut akı nicel değişim (fotonlar / sn) . Lütfen Şekil 2'de büyük halini görmek için buraya tıklayın .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion: Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

HO-1, heme oksijenaz indüklenebilir formu, Transkripsiyon heme, hidrojen peroksit, UV ışını, hipoksi ve fiziksel stresler de dahil olmak üzere birçok faktör tarafından upregüle. HO-1 biyoparlaklık protokolü gibi tüm vücut görüntülemesi çok organlarda sistemik HO-1 ekspresyonu hızlı bir anlık sağlar. Küçük hayvanlar, biyoparlaklık görüntüleme, yüksek hassasiyet in vivo sistemik gen ekspresyon değişiklikler gerçek zamanlı kantitatif uzunlamasına optik değerlendirme, gösterildiği gibi sağlar. Biyoparlaklık moleküler görüntüleme maliyetini düşürür ve pratik hızla karmaşık sistemleri biyoloji hipotez soruşturma için gerekli istatistiksel güç elde etmek ve önerilen ilaç ve diğer tedavi müdahalelerin sistemik etkileri değerlendirmek için küçük hayvanların gen ekspresyonu testlerinin verimini artırır. Bir sınırlama anatomi düşük uzaysal çözünürlüğü. Tomografik yeteneğine sahip yeni optik görüntüleme sistemlerinin sorunu hafifletmek. Mikro-BT ya da küçük hayvan MRG görüntü elde etme ve kayıt anatomi doğru belirlenmesine yardımcı olur. Diğer sınırlamalar düşük ışık dokusu ile penetrasyon ve transgenik hayvanlar için ihtiyacı vardır. Bunlar aslında büyük hayvan veya insan kullanımı için çeviri engellemez, ancak küçük hayvan sistemleri biyoloji ya da preklinik tedavi hipotez testi için önemli bir dezavantaj değil.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures: Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

Acknowledgements: Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

K. Wong, STC Wong Fonksiyonel ve Moleküler Görüntüleme Merkezi, Brigham ve Kadın hastaneye gelen fon tarafından desteklenen
K. Wong, STC Wong Biyoteknoloji ve Bilişim, Methodist Hastanesi Araştırma Enstitüsü, Weill Cornell Medical College Merkezi tarafından desteklenmektedir.
KK Kwong, I. Chen, JQ Ren Athinoula A. Martinos Merkezi Biyomedikal Görüntüleme, Massachusetts Genel Hastanesi fon tarafından desteklenmektedir.
Lenuta Kloetzer Braden Kuo nöroenterik Araştırma Merkezi, Massachusetts Genel Hastanesi fon tarafından desteklenen
Yazarlar Dr teşekkür. S. Zeng ve Optik Imaging Lab, Brigham ve Kadın Hastanesi, teknik yardım için X. Xu.

Materials: Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

Name Company Catalog Number Comments
Luciferin Caliper Life Sciences P/N 122796 Previously Xenogen
IVIS 100 Caliper Life Sciences Previously Xenogen

References: Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

  1. Zhang, W. et al. Selection of potential therapeutics based on in vivo spatiotemporal transcription patterns of heme oxygenase-1. J Mol Med 80, 655-64 (2002).
  2. Zhang, W. et al. Rapid in vivo functional analysis of transgenes in mice using whole body imaging of luciferase expression. Transgenic Res 10, 423-34 (2001).
  3. Contag, C. H. & Stevenson, D. K. In vivo patterns of heme oxygenase-1 transcription. J Perinatol 21 Suppl 1, S119-24; discussion S125-7 (2001).
  4. Nielsen, A., Knoblauch, N. T., Dobos, G. J., Michalsen, A. & Kaptchuk, T. J. The effect of Gua Sha treatment on the microcirculation of surface tissue: a pilot study in healthy subjects. Explore (NY) 3, 456-66 (2007).
  5. Schwickert, M. E., Saha, F. J., Braun, M. & Dobos, G. J. [Gua Sha for migraine in inpatient withdrawal therapy of headache due to medication overuse]. Forsch Komplementmed 14, 297-300 (2007).
  6. Tsai, P. S., Lee, P. H. & Wang, M. Y. Demographics, training, and practice patterns of practitioners of folk medicine in Taiwan: a survey of the Taipei metropolitan area. J Altern Complement Med 14, 1243-8 (2008).
  7. Nielsen, A. Gua sha research and the language of integrative medicine. J Bodyw Mov Ther 13, 63-72 (2009).
  8. Contag, C. H. et al. Visualizing gene expression in living mammals using a bioluminescent reporter. Photochem Photobiol 66, 523-31 (1997).
  9. Cui, K., Xu, X., Zhao, H. & Wong, S. T. A quantitative study of factors affecting in vivo bioluminescence imaging. Luminescence 23, 292-5 (2008).
  10. Shibahara, S., Yoshida, T. & Kikuchi, G. Mechanism of increase of heme oxygenase activity induced by hemin in cultured pig alveolar macrophages. Arch Biochem Biophys 197, 607-17 (1979).
  11. Lee, P. J. et al. Hypoxia-inducible factor-1 mediates transcriptional activation of the heme oxygenase-1 gene in response to hypoxia. J Biol Chem 272, 5375-81 (1997).
  12. Maines, M. D. The heme oxygenase system: a regulator of second messenger gases. Annu Rev Pharmacol Toxicol 37, 517-54 (1997).
  13. Wunder, C. & Potter, R. F. The heme oxygenase system: its role in liver inflammation. Curr Drug Targets Cardiovasc Haematol Disord 3, 199-208 (2003).
  14. Hoekstra, K. A., Godin, D. V. & Cheng, K. M. Protective role of heme oxygenase in the blood vessel wall during atherogenesis. Biochem Cell Biol 82, 351-9 (2004).
  15. Yang, N. C., Lu, L. H., Kao, Y. H. & Chau, L. Y. Heme oxygenase-1 attenuates interleukin-1beta-induced nitric oxide synthase expression in vascular smooth muscle cells. J Biomed Sci 11, 799-809 (2004).
  16. Morse, D. & Choi, A. M. Heme oxygenase-1: from bench to bedside. Am J Respir Crit Care Med 172, 660-70 (2005).
  17. Ryter, S. W. et al. Protective functions of heme oxygenase-1 and carbon monoxide in the respiratory system. Antioxid Redox Signal 9, 2157-73 (2007).
  18. Wilson, K., Yu, J., Lee, A. & Wu, J. C. In vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells. J Vis Exp (2008).
  19. Calabrese, V. et al. Vitagenes, dietary antioxidants and neuroprotection in neurodegenerative diseases. Front Biosci 14, 376-97 (2009).
  20. Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K. & Contag, C. H. Bioluminescent indicators in living mammals. Nat Med 4, 245-7 (1998).

Ask the Author: Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

2 Comments

Hi,

Lucky now home leave in Hong Kong and view this great scientific way to study Guasha, (in Mainland even Youtube was banned), I'm sure the Guasha works but in China people talk a lot on this but at least me a layman have not see any convincing study on its mechanism.

My name is Stone Siu, service engineer for Caterpillar, from HK and stations in Beijing. Got nothing done with medical business but just take different alternatives for fun, in the past few years I did some study on the guasha tools... from my mechanical of view.
What was that mouse original health condition? For such a small mouse, the force applied even distorted its body; Plastic spoon molding line usually sharp, what those red dots might not necessary be the Chinese medical so called "Sha". Have you did any study comparing healthy and sick? With different tools on different meridian line / zone?

FYI, in China a Guasha doctor Ms. Zhang Xiuqin did a lot of promotion, the book "Holographic Meridian Scraping Therapy (Guasha) for Modern Practice" got English version, the 2002 CD ISRC CN-A51-99-0044 o/v.G4 got Mandarin and English narration. ( Look at the names of the people involve in this study, quite some might be from mainland China and some might be from HK, anyway this link could be a contact point "www.jingluoguasha.cn/".)

To me Zhang Xiuqin's overall sayings are good, but I do not agree on Chinese traditional Guasha tools, (documented here "http://xiaoshiwei.blogspot.com/ " in Chinese), next time if you do any similar study, may make simple tool to have a better controlled scrape area.

Thank you for your attention

Stone



1

Reply

Posted by: Stone SiuJanuary 2, 2010, 12:40 AM

Dear Authors,
Thanks for your great work. As an anesthesiologist who work in the field of wet-cupping, I believe that your work is an important step forward to find the mechanisms of wet-cupping and find who does it worked. We are going to find the effects of wet-cupping in the treatment of Leishmaniasis in mice. For doing wet-cupping for mice, we used to another approach that is similar to your work. However, I learn a lot from your work.
Thanks for this important work.
Alireza Ahmadi, MD
Kermanshah University of Medical Sciences, Iran
Karolinska Institutet, Sweden.

2

Reply

Posted by: Alireza A.February 21, 2010, 9:02 AM

Dear Dr. Ahmadi,

Looking forward to the publication of your work. Wet cupping as well as fire cupping would be expected to induce HO-1 due to the break down of hemoglobins. Other anti-inflammatory and anti-oxidative processes are also obviously involved as HO-1 induction, which takes hours to build up, may not account for the immediate relief patients generally claim for cupping or Gua Sha.

Kenneth Kwong

2.1

Reply

Posted by: Kenneth K.March 2, 2010, 12:28 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter