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 JoVE Immunology and Infection

Obtenção altamente purificada Toxoplasma gondii Oocistos por um gradiente de cloreto de césio descontínuos

1, 2, 3, 2,4

1Dynamac, Inc., 2Department of Biological Sciences, University of Cincinnati, McMicken College of Arts and Science, 3Animal Parasitic Disease Laboratory, Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, 4National Exposure Research Laboratory, US Environmental Protection Agency

 

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Cite this Article: Obtenção altamente purificada Toxoplasma gondii Oocistos por um gradiente de cloreto de césio descontínuos

Staggs, S. E., See, M. J., Dubey, J. P., Villegas, E. N. Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient. J. Vis. Exp. (33), e1420, doi:10.3791/1420 (2009).

Abstract: Obtenção altamente purificada Toxoplasma gondii Oocistos por um gradiente de cloreto de césio descontínuos

Toxoplasma gondii é um protozoário patógeno intracelular obrigatório que normalmente infecta seres humanos. É um apicomplexan bem caracterizado associados a causar surtos de doenças alimentares e transmitidas pela água. O hospedeiro definitivo é a espécie de felino, onde ocorre a replicação sexual resultando no desenvolvimento do oocisto altamente infecciosa e ambientalmente resistente. A infecção ocorre através da ingestão de cistos de tecido de carne contaminada ou oocistos do solo ou água. Infecção é geralmente assintomática em indivíduos saudáveis, mas resulta em uma infecção latente ao longo da vida que pode reativar causando encefalite toxoplásmica e morte se o indivíduo torna-se imunocomprometidos. Carne contaminada com T. cistos gondii têm sido a principal fonte de infecção na Europa e nos Estados Unidos, mas as recentes mudanças na gestão animal e práticas de criação e manipulação de alimentos melhorados e procedimentos de processamento reduziram significativamente a prevalência de T. cistos gondii em carne 1, 2. No entanto, a seroprevalência em humanos permanece relativamente elevada, sugerindo que a exposição a partir de solo contaminado de oocistos ou água é provável. De fato, os surtos pela água da toxoplasmose foram relatados em todo o mundo apoiando a exposição teoria para a forma de oocistos ambiental representa um risco significativo de saúde 3-5. A pesquisa data, no entendimento da prevalência de T. gondii oocistos na água e meio ambiente são limitados devido à falta de ferramentas para detecção de oocistos no ambiente 5, 6. Isto é principalmente devido à falta de protocolos de purificação eficientes para a obtenção de um grande número de oocistos altamente purificada T gondii de gatos infectados para fins de pesquisa. Este estudo descreve o desenvolvimento de um método modificado CsCl que facilmente purifica T. gondii oocistos de fezes de gatos infectados que são adequados para biológica molecular e manipulação de cultura de tecidos 7.

Protocol: Obtenção altamente purificada Toxoplasma gondii Oocistos por um gradiente de cloreto de césio descontínuos

Disclosures: Obtenção altamente purificada Toxoplasma gondii Oocistos por um gradiente de cloreto de césio descontínuos

Acknowledgements: Obtenção altamente purificada Toxoplasma gondii Oocistos por um gradiente de cloreto de césio descontínuos

Gostaríamos de agradecer a Nichole Brinkman e Michael Ware para revisão técnica do manuscrito e Abu Sayed e Dr. Linda Ransick para apoio técnico e administrativo. Os Estados Unidos Agência de Proteção Ambiental através do seu Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento parcialmente financiado e colaborou na pesquisa aqui descrita com o número do contrato EP-D-06-096 para Dynamac, Inc. e um número de convênio interinstitucional DW-12-92289801-0 para USDA. Ele foi submetido a revisão Agência e aprovado para publicação. Menção de nomes comerciais ou produtos comerciais não constitui endosso ou recomendação para o uso. MJS endereço atual: Dynamac, Inc. Cincinnati, OH.

References: Obtenção altamente purificada Toxoplasma gondii Oocistos por um gradiente de cloreto de césio descontínuos

  1. Dubey, J.P. et al. Prevalence of viable Toxoplasma gondii in beef, chicken, and pork from retail meat stores in the United States: risk assessment to consumers. J. Parasitol. 91, 1082-93 (2005).
  2. Tenter, A.M., Heckeroth, A.R. & Weiss, L.M. Toxoplasma gondii: from animals to humans. Int. J. Parasitol. 30, 1217-58 (2000).
  3. Bowie, W.R. et al. Outbreak of toxoplasmosis associated with municipal drinking water. Lancet 350, 173-7 (1997).
  4. de Moura, L. et al. Waterborne toxoplasmosis, Brazil, from field to gene. Emerg. Infect. Dis. 12, 326-9 (2006).
  5. Jones, J.L. & Dubey, J.P. Waterborne toxoplasmosis - Recent developments. Exp. Parasitol. doi: 10.1016/j.exppara.2009.03.013 (2009).
  6. Dumetre, A. & Darde, M.L. How to detect Toxoplasma gondii oocysts in environmental samples? FEMS Microbiol. Rev. 27, 651-61 (2003).
  7. Dumetre, A. & Darde, M.L. Purification of Toxoplasma gondii oocysts by cesium chloride gradient. J. Microbiol. Methods 56, 427-30 (2004).
  8. Dubey, J.P. Toxoplasmosis of Animals and Man. 2nd ed. CRC Press, Inc., Boca Raton, FL. In press (2009).

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1 Comment

Good protocol for study of Toxoplasma gondii!

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Posted by: Wenchao YanApril 17, 2011, 10:07 AM

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