The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Turkish was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
1Transplant and Stem Cell Immunobiology Lab (TSI), University Heart Center Hamburg, 2CVRC, University Hospital Hamburg, 3Department of CT Surgery, Stanford University School of Medicine
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
You do not have access to any JoVE content through your current IP address.
IP: 23.20.196.179, User IP: 23.20.196.179, User IP Hex: 387237043
Current Access Through Your Registered Email Address
You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.
Kolk, M. V., Meyberg, D., Deuse, T., Tang-Quan, K. R., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., et al. LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction. J. Vis. Exp. (32), e1438, doi:10.3791/1438 (2009).
Enfarktüsü ve miyokardiyal iskemi Araştırma modelleri, miyokard iskemisi, akut ve kronik pathobiological ve patofizyolojik süreçleri incelemek ve gelecekteki tedavi geliştirmek ve optimize etmek için gerekli.
Miyokard iskemisi oluşturma İki farklı yöntemler laboratuar kemirgenler gerçekleştirilir. İlk yöntem oluşturmak için cryo enfarktüsü, hızlı ama yanlış bir tekniği, bir cryo-kalem (1-3) kalp yüzeyine uygulanır. Bu yöntemi kullanarak, bilim adamı cryo yara izi de geniş bir miyokard hasarı, miyokard enfarktüsü ile ilgili patofizyolojik yan etkileri gösterir oluşturulur, iskemi yol açar garanti edemeyiz. İkinci yöntem, sol ön inen arter (LAD) daimi ligasyonu. İşte LAD hemen görülebildiği bir iskemi oluşturan tek bir dikiş ile bağlandı. LAD kapatarak, daha fazla kan akımı, miyokard doku çevresindeki neredeyse etkilenmez iken bu alanda izin verilir. Bu cerrahi işlem, enfarktüs ilgili miyokard iskemisi meydana pathobiological ve patofizyolojik yönlerini taklit eder.
Bu video tanıtılan yöntem LAD ligating bir fare enfarktüsü modeli cerrahi işlem göstermektedir. Bu model, kalp enfarktüsü pathobiological ve patofizyolojik yanı sıra Bağışıklık çalışmaları için uygundur. Gösterilen teknik, yüksek doğruluk sağlar ve histolojik bölümleri ile de ilişkilidir.
20g en az 8 ila 12 hafta arasında bir yaş ağırlığında Balb / C fareler Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97.633 Sulzfeld) satın alınır.
Fare, geleneksel koşulları, beslenen standart fare pelet ve su ad libitum altında muhafaza edilir . Indüksiyon odasına kullanarak (% 2) izofluran anestezisi fare ile.
Onaylama
LAD-ligasyonu başarısını teyit etmek için farklı olasılıklar vardır.
Hayvan euthanize gerek kalmadan sadece 150 lt kan troponin testi, cerrahi sonrası 6 ila 18 saat olabilir. Kan özelleştirilmiş bir troponin test kiti (TROP T Hassas, Roche, Mannheim) (Şekil 4) uygulanır. Troponin kas hücre aktin filamentler bir düzenleyici protein, kas üç tip farklı isotypes vardır. CTnI ve cTnT isotypes kalp bulunur ve doku hasarı olarak yayımlanır. Troponin T (cTnT) için standart bir test iki kalp spesifik monoklonal antikorlar, bir tuzakları kan örneği troponin dayalı, ikinci bir belirteçtir.
Enfarkte alanda, 3 gün sonra (Şekil 5) makroskopik tespit edilebilir.
Infarkt TTC (2,3,5-triphenyltetrazolium chloride) ile boyanarak önlemler dokusunun canlılığını değerlendirmek için kullanılır. Evans mavi boya (% 1,5, 1.0mL) fosfat tamponlu salin (PBS), iskemik miyokard alanını ölçmek için sol ventrikül boşluğuna enjekte edilir. Fare ötenazi ve kalp dilimler halinde hasat ve kesitli. Doku dilimleri 20dk, 37 ° C'de% 1 TTC PBS solüsyonu, pH 7.4 inkübe edilir. Dokular 2-8 gecede PBS-tamponlu formalin% 10 sabit ° C TTC boya Evans mavi-negatif alanlarda (Şekil 6) ex vivo yönetilmektedir.
Histoloji için fare ötenazi olmalı ve kalbin daha fazla işlem için gömülü olması gerekir. Kesitler yaptıktan sonra, slaytlar, H & E (hematoksilen ve eozin) ile boyanmış veya fibrotik doku (Şekil 7) görselleştirmek için trikrom.
Şekil 1: Trakeal tüp.
1A: Açık trakea, ventral servikal insizyon sonrası.
1B: Trakea gırtlak kaudal iki kıkırdak halkaları açıldı.
1C: Trakeal tüp trakea içine sokulur.
Şekil 2: kalp sol taraflı torakotomi yoluyla maruz LAD bağlandı.
Şekil 4: troponin testi pozitif olduğu zaman iki satır bir kaç dakika sonra ortaya çıkar.
Şekil 5: eksplante kalp gösterir.
5A: iskemik alana sahip bir soluk beyaz renk ile kalbin makroskopik görünümü.
5B: enfarkte kalp Kesit, iskemik alanı sağ üst köşesinde gösterir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Özetle, bu video LAD-ligasyonu modeli, adım-adım görselleştirir ve kolay uygulanabilir cerrahi işlemler olarak farelerde LAD-ligasyonu tanımlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Harçlar
Bu çalışmada Üniversitesi Hastanesi Hamburg (MK, Kadın Habilitasyon Hibe), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, Araştırma Ödülü 2009) tarafından desteklenmiştir.
Açıklama
Bütün hayvanlar Laboratuar Hayvan Bakımı İlkeleri ile uyumlu insan bakım, hayvanlar üzerinde yapılan deneyler tarafından yayınlanan Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım için Tıbbi araştırma ve Kılavuzu Ulusal Derneği tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı Ulusal Sağlık Enstitüleri (Ulusal Sağlık yayın 85-23 Enstitüleri, 1985 revize).
Bütün hayvanlar, Charles River Laboratuvarları (Sulzfeld Almanya) elde edilen ve hayvan bakım tesisleri Üniversitesi Hastanesi Hamburg Eppendorf tutuldu. Hayvanlar standart yem ve su ad libitum aldı.
Yazarlar, teknik yardım ve sahne histoloji Christiane Pahrmann teşekkür ederim.
1
ReplyPosted by: AnonymousJune 18, 2010, 6:52 PM