The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Hebrew was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
1Transplant and Stem Cell Immunobiology Lab (TSI), University Heart Center Hamburg, 2CVRC, University Hospital Hamburg, 3Department of CT Surgery, Stanford University School of Medicine
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
You do not have access to any JoVE content through your current IP address.
IP: 107.20.129.212, User IP: 107.20.129.212, User IP Hex: 1796506068
Current Access Through Your Registered Email Address
You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.
Kolk, M. V., Meyberg, D., Deuse, T., Tang-Quan, K. R., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., et al. LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction. J. Vis. Exp. (32), e1438, doi:10.3791/1438 (2009).
מודלים מחקר של אוטם שריר הלב ואת חיוניים כדי לחקור את התהליכים pathobiological ו pathophysiological אקוטי וכרוני איסכמיה של שריר הלב כדי לפתח לייעל את הטיפול בעתיד.
שתי שיטות שונות של יצירת איסכמיה בשריר הלב מבוצעות מכרסמים במעבדה. השיטה הראשונה היא ליצור cryo אוטם, טכניקה מהיר אבל לא מדויק, שם cryo-עט מוחל על פני השטח של הלב (1-3). באמצעות שיטה זו המדען אינו יכול להבטיח כי cryo-צלקת מוביל איסכמיה, גם פגיעה בשריר הלב העצום שנוצר המציג תופעות לוואי pathophysiological כי אינם קשורים לאוטם שריר הלב. השיטה השנייה היא קשירת קבועה של העורק השמאלי הקדמי היורד (LAD). כאן הנער הוא ligated עם תפר אחד, להרכיב איסכמיה כי ניתן לראות באופן כמעט מיידי. על ידי סגירת LAD, אין זרימת דם נוספת מותרת באזור זה, תוך רקמת שריר הלב שמסביב הוא כמעט לא השפיע. זה הליך כירורגי מחקה את ההיבטים pathobiological ו pathophysiological המתרחשים איסכמיה, אוטם שריר הלב קשור.
השיטה הציג סרטון זה מדגים את הליך כירורגי של מודל אוטם העכבר על ידי ligating LAD. דגם זה נוח ללימודי pathobiological ו pathophysiological וכן immunobiological על אוטם לבבי. הטכניקה המוצגת מספקת דיוק גבוהה וקושרת היטב עם סעיפים היסטולוגית.
Balb / C עכברים במשקל מינימום של 20 גרם בגיל של 8 עד 12 שבועות נרכשים מ צ'ארלס ריבר (Sandhofer מאייתים 7, D-97633 Sulzfeld).
עכברים הם שוכנו בתנאים רגילים, נמאס כדורי תקן העכבר כרצונך מים. הרדימי עכבר עם isoflurane (2%) באמצעות תא אינדוקציה.
תוקף
ישנן אפשרויות שונות כדי לאשר את ההצלחה של קשירת-LAD.
בדיקת טרופונין ניתן לבצע 6-18 שעות לאחר הניתוח, תוך שימוש רק 150 בדם אני ללא צורך להרדימו. הדם מוחל על ערכת בדיקה אישית טרופונין (TROP T רגיש, רוש, מנהיים) (איור 4). טרופונין הוא חלבון הוויסות של סיבי אקטין של תא השריר, יש isotypes שונות שלושה סוגים של שרירים. Isotypes cTnI ו cTnT נמצאים הלב משתחררים לפגיעה ברקמות. מבחן סטנדרטי עבור טרופונין T (cTnT) מבוססת על שני נוגדנים חד שבטיים לב ספציפית, אחת המלכודות טרופונין במדגם דם, והשני הוא סמן.
אזור infarcted ניתן לזהות macroscopically לאחר 3 ימים (איור 5).
TTC (2,3,5-Triphenyltetrazolium כלוריד) מודד מכתים הכדאיות רקמות השתמשו כדי להעריך גודל האוטם. אוונס צבע כחול (1.5%, 1.0mL) ב פוספט בופר סליין (PBS) מוזרק לתוך חלל החדר השמאלי כדי למדוד את שטח איסכמי לבבי. העכבר הוא מורדמים והלב הוא לקצור מחולק לפרוסות. פרוסות הרקמה מודגרת בתמיסה של 1% PBS TTC, pH 7.4 ב 37 מעלות 20min. רקמות שתוקנו ב 10% PBS שנאגרו פורמלין לילה בשעה 2-8 ° C. TTC מנוהל vivo לשעבר לצבוע אוונס כחול שלילי אזורים (איור 6).
עבור היסטולוגיה העכבר צריך להיות מורדמים והלב חייב להיות מוטבע לעיבוד נוסף. לאחר ביצוע סעיפים פרפין, מגלשות מגואלות H & E (hematoxylin ו eosin) או trichrome לדמיין רקמות fibrotic (איור 7).
איור 1: צינור לקנה הנשימה.
1A: חשופים קנה הנשימה, לאחר חתך צוואר הרחם הגחון.
1B: קנה הנשימה נפתח שתי טבעות סחוס הזנב אל הגרון.
1C: צינור לקנה הנשימה מוכנס לתוך קנה הנשימה.
איור 2: לב חשוף באמצעות פתיחת בית החזה השמאלי צדדית, הבחור הוא ligated.
איור 4: שני קווים להופיע אחרי כמה דקות כאשר הבדיקה טרופונין חיובית.
איור 5: מציג את הלב explanted.
5 א: לצפות מקרוסקופית של הלב עם אזור איסכמי עם צבע לבנבן דהוי.
5B: חתך של הלב infarcted, אזור איסכמי מראה בפינה הימנית העליונה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
לסיכום, וידאו זה visualizes המודל LAD-קשירת צעד אחר צעד ומזהה LAD-ligations בעכברים כמו ניתוחים אפשרי בקלות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
מימון
המחקר הנוכחי נתמך על ידי החולים האוניברסיטאי בהמבורג (ח"כ, אישה Habilitation גרנט), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, פרס המחקר 2009).
הצהרה
כל החיות קיבלו טיפול אנושי מתיישב עם עקרונות של טיפול בבעלי חיים מעבדה, ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי האגודה הלאומית למחקר רפואי המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שפורסם על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (National Institutes of Health פרסום 85-23, מתוקנת 1985).
כל החיות התקבלו צ'ארלס ריבר מעבדות (Sulzfeld, גרמניה) נשמרו על מרכזים בעלי חיים של החולים האוניברסיטאי בהמבורג Eppendorf. החיות קיבלו תקן ושולחת כרצונך מים המודעה.
המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann לקבלת סיוע טכני אותה היסטולוגיה ביצוע.
1
ReplyPosted by: AnonymousJune 18, 2010, 6:52 PM