The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Russian was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
1Stemgent, 2Whitehead Institute for Biomedical Research, MIT - Massachusetts Institute of Technology
Hamilton, B., Feng, Q., Ye, M., Welstead, G. G. Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Mouse Embryonic Fibroblasts with a Four Transcription Factor, Doxycycline Inducible Lentiviral Transduction System. J. Vis. Exp. (33), e1447, doi:10.3791/1447 (2009).
Использование определенного набора транскрипционных факторов и условий, культуры клеток, Яманака и его коллеги показали, что ретровирус-опосредованного доставки и экспрессии Oct4, Sox2, с-Myc, и Klf4 способен вызывать плюрипотентности в мышиных фибробластов. 1 В последующих докладах показал полезность от доксициклина (DOX) индуцибельной лентивирусов системы доставки для генерации первичных и вторичных плюрипотентных клеток из множества других взрослых мышей типов соматических клеток. 2,3
Индуцированных плюрипотентных стволовых (IPS) клетки похожи на эмбриональные стволовые (ЭС) клеток в морфологии, распространения и способность вызывать образование тератомы. Оба типа ячейки может быть использован в качестве плюрипотентных исходным материалом для поколения дифференцированных клеток или тканей, в регенеративной медицине. 4-6 плюрипотентных клеток, также имеют явное преимущество перед ЭС клетки, как они проявляют основные свойства ЭС клеток без этической дилеммой зародыш разрушения.
Здесь показано, протокол для перепрограммирования мышиных эмбриональных фибробластов (MEF) клетки с индуцибельной Stemgent DOX мыши Установить TF лентивирусов. Мы также показали, что Stemgent индуцибельной DOX Мышь TF лентивирус Установить способен выразить каждому из четырех факторов транскрипции на трансдукции в MEFs тем самым вызывая состояние плюрипотентных стволовых клеток, который отображает характерные маркеры плюрипотентности ЭС клеток.
Эти результаты показывают, что Stemgent DOX индуцибельной Мышь TF лентивирус Установить может использоваться для эффективной генерации плюрипотентных колонии, вызывая внематочной выражение трансдуцированных факторов транскрипции в мышиных эмбриональных фибробластов. При проектировании перепрограммирования экспериментов, несколько переменных следует рассматривать оптимизировать эффективность перепрограммирования. Во-первых, можно изменить активный вирус к клетке-мишени отношение (т.е. МВД) во время первичной инфекции шаг для увеличения или уменьшения эффективности трансдукции, влияя тем самым ряд комплексных вирусов в популяции клеток-мишеней. Во-вторых, регулируя длину времени клетки подвергаются воздействию DOX может повлиять на эффективность работы ОЭС поколения колонии клеток. В-третьих, способность к пролиферации клеток-мишеней может повлиять перепрограммирования, так как клетки, которые активно растут и деления более поддаются перепрограммированию. И наконец, при изменении протокола для разных номеров клетки или различные блюда ткани размером культуры, рекомендуется, что числа клеток-мишеней быть скорректирована пропорционально площади поверхности культуры блюдо.
Автор, Брэд Гамильтон, работает на Stemgent, который производит реактивы и инструменты, используемые в этой статье.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DOX Inducible Mouse TF Concentrated Lentifirus Set | Stemgent | 00-0003 |
1
ReplyPosted by: Angelo PorciunculaMarch 21, 2010, 6:29 AM