Трансплантация почки Всего мозга у взрослых данио рерио

Облучение

1. Радиация WT рыбу 25Gy за 2 дня до пересадки

Почки рассечение

1. Жертва соответствующего количества флуоресцентного доноров в tricaine (~ 100 мл 4mg/ml Tricaine / литр рыба) (в среднем 500 000 клеток на донора рыба)
2. Изолировать почек в 0,9 x PBS + 5% FCS + 1% Пенн стрептококк ("PBS +") в трубку
3. Перерыв с 1 мл пипетки, затем с 10 мл шприц с 18 1 / 2 иглы G
4. Перевод на 50 мл конические и пополнить с PBS +
5. Спином вниз @ 1500rpm 8 минут
6. Вылейте, ресуспендируют гранулы в большом объеме и фильтруют через фильтр 40micron
7. Спином вниз @ 1500rpm 8 минут
8. Вылейте, ресуспендируют в 1 мл PBS +, трансфер в Эппендорф трубки
9. Для фото: 10ul клетка соль + 90ul трипанового синего (теперь его разбавляют в 10 раз)
10. 10ul клетка соль + 90ul PBS + (теперь его разбавляют в 10 раз)
11. Дайте постоять 5 минут, добавить соль 10ul как по обе стороны от hemacytometer
12. Граф клеток в большую коробку (5x5), счета за смерть процент, если значительная
13. Клеток / мл = (клеток) (10 ⁴⁾ (x10 дил. Фактор)
    
    Пример - 60 клеток рассчитывали на hemacytometer является 6000000 клетки общего
    
    
14. Спином вниз образца @ 1500rpm 8 минут
15. Рассчитать объем для ресуспендирования гранул, чтобы получить соответствующие концентрации клеток
16. 5ul общем объеме внедрить - 3ul время ВКМ и 2UL будучи периферической крови
17. Пример - есть 6000000 клетки общего
    
    хотите, чтобы пересадить 200000 клеток на получателя
    
    есть 20 получателям
    
    хотят 66667 клеток / UL (200000 клеток / 3ul)
    
    ресуспендируют осадок в 90ul (6000000 кл / 66667 клеток / мкл)
    
    нужно всего лишь о 60ul этого (20recip х 3ul)

Периферийные добычи крови

1. Жертва соответствующее количество WT рыбы в tricaine (~ 100 мл 4mg/ml Tricaine / литр рыба) для носителя крови (в среднем 2 миллиона клеток на донора)
2. Антикоагулянтная: разбавьте 1UL (3unit/ul) в 1 мл PBS +
3. Пальто пипетки наконечник с гепарином, удар через жаберные с пипетки отзыв, добавить крови PBS +
4. Спиновые 1500rpm 5мин, ресуспендируют в 1,5 мл
5. Спиновые 1500rpm 5мин, ресуспендируют в 1 мл
6. Фильтра через фильтр 40micron
7. Граф клетки, что и выше
8. Клеток / мл = (клеток) (10 ⁴⁾ (x10 дил. Фактор)
9. Счет за смерть
10. Рассчитать ресуспендирования объем, что и выше

Инъекция

1. Inject 5ul в сердце каждого получателя помощи шприца Гамильтона
2. Обезболить рыбы в tricaine (4.2ml (4mg/ml) Tricaine / 100 мл воды рыба) и положите на влажную губку
3. Вставьте кончик немного позади сердца
4. Пока вокруг области сердца, пока не увидите небольшой взрыв крови (то есть вы попали в сердце) -> не могли бы видеть это, но вводить в любом случае

Рыба ICU - после инъекции

1. Хранить рыбу с потоком в течение 1 недели, чтобы избежать инфекции
2. Положите 5-10 рыбы в клетке
3. Удалить мертвых и вести учет
4. Вручную менять воду каждый день