The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Children's Hospital, Harvard Stem Cell Institute, Harvard Medical School
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LeBlanc, J., Venezia Bowman, T., Zon, L. Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (2), e159, doi:10.3791/159 (2007).
Le cellule staminali ematopoietiche (HSC) sono una rara popolazione di cellule pluripotenti che mantengono tutti i lignaggi di sangue differenziato per tutta la vita di un organismo. La definizione funzionale di un HSC è una cellula trapiantato che ha la capacità di ricostituire tutte le linee di sangue di un destinatario irradiato lungo termine. Questa designazione è stato istituito con decenni di lavoro seminale nei sistemi mammiferi. Utilizzando il trapianto di cellule ematopoietiche (HCT) e invertire manipolazioni genetiche nei topi, i fattori alla base della biologia regolamentazione HSC cominciano a essere svelata, ma sono ancora in gran parte sotto-esplorato. Recentemente, il pesce zebra è emersa come un potente modello genetico per lo studio ematopoiesi vertebrati. Stabilire HCT in zebrafish permetterà agli scienziati di utilizzare su larga scala metodologie di screening genetici e chimici disponibili in zebrafish per rivelare nuovi meccanismi alla base regolamentazione HSC. In questo articolo, si dimostra un metodo per eseguire HCT in zebrafish adulti. Mostriamo la dissezione e la preparazione del pesce zebra midollo renali tutto, il sito di emopoiesi adulti nel pesce zebra, e l'introduzione di queste cellule del donatore nella circolazione dei pesci destinatario irradiati tramite iniezione intracardiaca. Inoltre, si descrive la post-trapianto cura dei pesci in una "terapia intensiva" per aumentare la loro salute a lungo termine. In generale, cura delicata del pesce prima, durante e dopo il trapianto è fondamentale per aumentare il numero di pesci che sopravviverà più di un mese successivo alla procedura, che è essenziale per la valutazione di lungo termine (<3 mesi) l'attecchimento. I dati sperimentali utilizzati per stabilire questo protocollo verrà pubblicato altrove. L'istituzione di questo protocollo permetterà la fusione di grandi dimensioni genetica zebrafish e biologia dei trapianti.
Irradiazione
Dissezione del rene
L'estrazione del sangue periferico
Iniezione
Pesce ICU - post-iniezione
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