The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Children's Hospital, Harvard Stem Cell Institute, Harvard Medical School
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LeBlanc, J., Venezia Bowman, T., Zon, L. Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (2), e159, doi:10.3791/159 (2007).
Les cellules souches hématopoïétiques (CSH) sont une population rare de cellules pluripotentes qui maintiennent toutes les lignées sanguines différenciées à travers la vie d'un organisme. La définition fonctionnelle d'un HSC est une cellule transplantée qui a la capacité de reconstituer toutes les lignées de sang d'un terme bénéficiaires irradiés longtemps. Cette désignation a été créé par des décennies de travail séminal dans les systèmes mammifères. En utilisant la transplantation de cellules hématopoïétiques (HCT) et inverser les manipulations génétiques chez la souris, les facteurs qui sous-tendent la réglementation de la biologie HSC commencent à être dévoilés, mais sont encore largement sous-exploré. Récemment, le poisson zèbre est apparu comme un puissant modèle génétique pour l'étude des vertébrés hématopoïèse. Établir HCT chez le poisson zèbre permettra aux scientifiques d'utiliser les méthodologies à grande échelle de dépistage génétique et chimique disponible dans le poisson-zèbre pour révéler de nouveaux mécanismes qui sous-tendent la réglementation HSC. Dans cet article, nous démontrons une méthode pour effectuer HCT chez le poisson zèbre adulte. Nous montrons la dissection et la préparation de la moelle des reins zebrafish ensemble, le site de l'hématopoïèse adulte dans le poisson zèbre, et l'introduction de ces cellules du donneur dans la circulation des poissons bénéficiaires irradié par injection intracardiaque. De plus, nous décrivons les soins post-transplantation de poissons dans une "unité de soins intensifs" pour augmenter leur santé à long terme. En général, les soins douceur du poisson avant, pendant et après la greffe est essentiel d'augmenter le nombre de poissons qui survivent plus d'un mois suivant la procédure, ce qui est essentiel pour l'évaluation de long terme (<3 mois) la prise de greffe. Les données expérimentales utilisées pour établir ce protocole seront publiés ailleurs. La création de ce protocole permettra à la fusion de la génétique de poisson zèbre à grande échelle et la biologie de greffe.
L'irradiation
La dissection du rein
L'extraction du sang périphérique
Injection
Soins intensifs de poissons - post-injection
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