The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Swedish was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE General

Dissekering av 6,5 DPC musembryon

,

Massachusetts General Hospital, Harvard Stem Cell Institute, Harvard Medical School

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of   JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Recommend JoVE to Your Librarian

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 184.72.91.94, User IP: 184.72.91.94, User IP Hex: 3091749726

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please or create an account with your institutional email address to access this content.

 

Video Article Chapters

Cite this Article: Dissekering av 6,5 DPC musembryon

Shea, K., Geijsen, N. Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos. J. Vis. Exp. (2), e160, doi:10.3791/160 (2007).

Abstract: Dissekering av 6,5 DPC musembryon

Analys av mönster genuttryck under tidiga stadier av däggdjurs embryonala utveckling kan ge viktiga ledtrådar om geners funktion, cell-cell interaktion och signalering mekanismer som styr embryonala mönster. Däremot kan dissekering av musen embryot från decidua kort efter implantation vara en utmanande förfarande och detaljerade steg-för-steg dokumentation av denna process saknas.

Här kan vi visa hur post-implantation (6,5 DPC) embryon som är isolerade genom att först dissekera livmodern av en gravid mus (detektion av vaginala kontakten utsågs dag 0,5 poist coitum) och därefter dissekera ett embryo från moderns decidua. Dissektion av Reichert membran beskrivs samt borttagning av ectoplacental konen.

Protocol: Dissekering av 6,5 DPC musembryon

Dissekering av reproduktiva organ från en kvinnlig mus

  1. Gravida djur avlivas av CO 2 kvävning med komprimerad gas.
  2. Lägg djuret liggande på absorptionsdyna och dränk den i 70% etanol för att minska risken för kontaminering av dissektion med musen hår.
  3. Nyp ihop huden och gör en liten laterala snitt vid mittlinjen med vanlig kirurgisk sax. Håll huden ordentligt över och under snittet och dra i huden isär mot huvud och svans för att avslöja buken.
  4. Ta tag i bukhinnan med pincett och skär avslöja bukhålan.
  5. Leta reda på fortplantningsorganen i dorsala region av kroppen hålrum: två livmoder horn eller äggledare och äggstockar.

Primitivstrimman steg (6,5 DPC) Dissection

  1. Ta bort livmodern horn genom att ta tag i livmodern under äggledare och skär den fria längs mesometrium. Placera dissekerade livmodern i iskallt PBS.

    Figur 1

    Figur 1

  2. Separera varje embryo genom att klippa mellan implantationsställen längs uterin horn.

    Figur 2

    Figur 2


  3. Ta tag i muskulösa livmoderslemhinnan genom att skjuta urmakare pincetten mellan den omgivande muskler lagret och insvept decidua vävnad. Dra av muskel lagret, exponera decidua.

    Figur 3

    Figur 3

  4. Klipp bort en del av den exponerade decidua i toppen (ca 1 / 5 av de decidua vävnad) som kommer att utsätta den midventral eller distala toppen av den medföljande embryot.

    Figur 4

    Figur 4

  5. Embryot kan skalade ut med hjälp av tips av peang. Stick hål på decidua med pincetten kring embryot och öppna pincett att riva decidua isär.

    Figur 5

    Figur 5

  6. När embryot är borttagen, kan Reichart membran fortfarande bifogas liksom ectoplacental konen (trofoblaster). Embryot kan dissekeras ytterligare genom noggrann dissektion.

    Figur 6
    Figur 6

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion: Dissekering av 6,5 DPC musembryon

Postimplantation hos mus sker mellan 4,5 DPC och födelse. Denna dissektion metod kan tillämpas i huvudsak enligt beskrivningen, att isolera tidigare eller senare skede embryon på 5,5-8,5 DPC.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures: Dissekering av 6,5 DPC musembryon

Materials: Dissekering av 6,5 DPC musembryon

Name Type Company Catalog Number Comments
Micro Dissecting Forceps serrated, straight Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5130 2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5010 2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X) Reagent Invitrogen 14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors Tool Fisher Scientific 08-940
Pregnant female mice Animal
Dissecting Microscope Microscope

References: Dissekering av 6,5 DPC musembryon

1. Nagy, A. et. al. 2003. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York.

Ask the Author: Dissekering av 6,5 DPC musembryon

5 Comments

How you set the exactly time of embryos stage?


thanks.

1

Reply

Posted by: RodrigoMay 6, 2008, 12:47 PM

One option for obtaining pre-implantation embryos is to set up natural matings.  To set up matings, females (6 weeks to 4 months of age) are placed with males (one or two females in each cage with one male) overnight.  The morning after mating, the females can be checked for the presence of a copulation plug in the vagina.  The presence of the vaginal plug indicates that the mating occured, but it does not always mean that a pregnancy will result.  The convention for timed pregnancy assumes that fertilization takes place around midnight during a 7pm to 5am dark cycle, then at noon on the following day (i.e., the day on which the vaginal plug is found), the embryos are aged "0.5 dpc (days post coitum)".  At noon on the next day, the embryos are 1.5 dpc, and so on. It is important to check for plugs early in the morning because they fall out or are no longer detectable ~12 hours after mating, or sometimes earlier.  It is important to note that embryos within a litter can vary with regard to stage of development.  Therefore, morphological criteria are used when more precise embryo staging is required such as the "Theiler Staging Criteria for Mouse Embryonic Development". 

1.1

Reply

Posted by: KellyMay 19, 2008, 7:59 PM

I just want to thank you for posting this video, it was extremely useful.  I am a high school student in Wisconsin and I am doing research in stem cells and I'm trying to perfect my dissection method.  I love learning new methods and new information on this subject.  Thank you again. Sara

2

Reply

Posted by: SaraMay 6, 2008, 6:35 PM

HI! How do you dissect the embryo out of Reichardt's membrane and ectoplacental cone (passage Fig 6A to B)? Thanks - Delphine

4

Reply

Posted by: DelphineJune 19, 2009, 11:36 AM

Do you know if there are any workshops for isolating e5-e9 mouse embryos? You're video was very helpful.

6

Reply

Posted by: Monika L.January 14, 2010, 6:12 PM

I have the same question. How do you dissect the embryo out of Reichardt's membrane and ectoplacental cone (passage Fig 6A to B)? Are their any tricks? Thanks

8

Reply

Posted by: Zhuoqing F.December 27, 2012, 5:34 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter