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फेफड़े के लिए स्टेम सेल के प्रत्यारोपण के लिए एक विधि: ट्रेकिआटमी

Dept. of Cell Biology, Harvard Medical School

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सड़न रोकनेवाला तकनीक इस प्रक्रिया के दौरान किया जाता है.

Cite this Article: फेफड़े के लिए स्टेम सेल के प्रत्यारोपण के लिए एक विधि: ट्रेकिआटमी

Peter, Y. Tracheotomy: A Method for Transplantation of Stem Cells to the Lung. J. Vis. Exp. (2), e163, doi:10.3791/163 (2007).

Abstract: फेफड़े के लिए स्टेम सेल के प्रत्यारोपण के लिए एक विधि: ट्रेकिआटमी

फेफड़ों के रोग मौत का प्रमुख कारण है और एक महामारी दिया प्रदूषण और धूम्रपान दुनिया भर में बढ़ जाती है बनने की संभावना है. स्टेम सेल थेरेपी में अग्रिम फेफड़ों के रोग के साथ जुड़े लक्षण के कई को कम और वयस्कों में वायुकोशीय मरम्मत प्रेरित हो सकता है. मानव उपचार के लिए लागू स्टेम कोशिकाओं के लिए चल रही खोज के साथ समवर्ती, सटीक वितरण और घर वापस आना रोग की साइट के लिए () के सफल उपचार के लिए आश्वस्त किया जाना चाहिए. यहाँ, मैं रिपोर्ट है कि स्टेम कोशिकाओं को सुरक्षित रूप से फेफड़ों के लिए एक गैर रोक मार्ग खोलने ट्रेकिआ के माध्यम से डाले जा सकता है. यह विधि एक त्वचा चीरा, tracheal लुमेन में और साथ एक cannula की दुम का सम्मिलन, और फेफड़ों के वायुमार्ग में एक स्टेम सेल वाहन मिश्रण के इंजेक्शन शामिल है. मीडिया समाधान और स्टेबलाइजर्स के एक व्यापक रेंज ट्रेकिआटमी के माध्यम से डाले जा सकता है, सेल प्रकार की एक व्यापक रेंज देने की क्षमता में जिसके परिणामस्वरूप. वायुकोशीय लुमेन करने के लिए इन कोशिकाओं की सीमित उपकला के साथ, फेफड़ों और साँस लेना के दौरान नकारात्मक दबाव विस्तार भी स्टेम सेल के एकीकरण में सहायता कर सकते हैं. स्टेम सेल के Tracheal वितरण, एक त्वरित तेज और उपचार की एक बड़ी रेंज को संभालने की क्षमता के साथ, सेल आधारित चिकित्सा के विकास में तेजी लाने, फेफड़ों के रोग के उपचार के लिए नए रास्ते खोलने सकता है.

Protocol: फेफड़े के लिए स्टेम सेल के प्रत्यारोपण के लिए एक विधि: ट्रेकिआटमी

प्री - ऑपरेटिव

  1. प्राप्तकर्ता माउस और दाता कोशिकाओं
  2. टेप और सिवनी धागे के साथ मंच संचालन
  3. 1cc सिरिंज
  4. 23g सुई
  5. संवेदनाहारी AVERTIN: 25 मिलीग्राम / एमएल (वैकल्पिक ketamine 9 मिलीग्राम / एमएल और xylazin 1 मिलीग्राम / एमएल)
  6. # 40 ब्लेड के साथ बाल क्लिपर
  7. बाँझ दस्ताने
  8. शराब swabs
  9. आयोडीन
  10. निष्फल शल्य चिकित्सा उपकरण
  11. सिवनी धागा
  12. 22G कैथेटर
  13. 200 उल विंदुक (बाँझ)
  14. निष्फल विंदुक युक्तियाँ
  15. एंटीबायोटिक गोंद मरहम
  16. Sharpie कंटेनर

ऑपरेशन

सड़न रोकनेवाला तकनीक इस प्रक्रिया के दौरान किया जाता है.

  1. माउस वजन.
  2. चतनाशून्य करनेवाली औषधि (250 मिलीग्राम / किलो AVERTIN या वैकल्पिक रूप से ketamine 90 मिलीग्राम / किग्रा और xylazine 10 मिलीग्राम / किग्रा) सहज साँस लेने की अनुमति है, लेकिन शल्य - एकाग्रता संज्ञाहरण प्रदान करने के लिए पर्याप्त खुराक पर. Intraperitoneal इंजेक्शन सर्जरी के लिए शुरू करने के लिए पैर के अंगूठे चुटकी anesthetized जानवर से कोई प्रतिक्रिया के साथ गहरे दर्द का एक संकेतक के रूप में इस्तेमाल किया गया था.
  3. सिवनी धागा और टेप करने के लिए स्थिर पूंछ में tucked incisors के साथ माउस लेटाओ.
  4. क्लिप बाल एक # 40 क्लिपर ब्लेड का उपयोग.
  5. बदलें दस्ताने (बाँझ दस्ताने के साथ जारी रखने के).
  6. त्वचा चीरा से पहले शराब के साथ दो बार कीटाणुरहित.
  7. एक iodophore के साथ क्षेत्र जीवाणुरहित.
  8. बाँझ उपकरणों का उपयोग एक छोटा सा चीरा (<1 सेमी) ट्रेकिआ के लिए समानांतर बनाते हैं.
  9. ध्यान उपास्थि से अलग ऊतक है.
  10. एक टाई ट्रेकिआ नीचे डाला जाता है.
  11. धीरे टाई ऊपर की ओर बढ़ाने के लिए और उजागर ट्रेकिआ में सुई सम्मिलित.
  12. सुई निकालें और ट्यूब सुचारू सम्मिलित करते हैं, अभी तक तेजी से मामूली प्रतिरोध महसूस जब तक.
  13. कैथेटर में सीधे पिपेट कोशिकाओं (ऊपर से 50 microliters मात्रा).
  14. तुरंत ट्यूब को हटाने और टाई जबकि ऑपरेटिंग तंत्र से मुक्ति माउस.
  15. यदि आवश्यक हो धीरे माउस ईमानदार पकड़ (अनुलंब) अपने पूर्वकाल पंजे पकड़ और धीरे बढ़ने.
  16. एक सिवनी या एंटीबायोटिक गोंद के साथ घाव बंद करें.

पोस्ट ऑपरेटिव

  1. माउस गर्म रखें.
  2. Buprenorphine (0.05 मिलीग्राम / किग्रा) पोस्ट ऑपरेटिव analgesia के रूप में दिया जाना चाहिए इस प्रक्रिया के बाद पहले 24 घंटे के लिए हर 12 घंटे.

चित्रा 1

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Disclosures: फेफड़े के लिए स्टेम सेल के प्रत्यारोपण के लिए एक विधि: ट्रेकिआटमी

Materials: फेफड़े के लिए स्टेम सेल के प्रत्यारोपण के लिए एक विधि: ट्रेकिआटमी

Name Company Catalog Number Comments
23G needle
1cc syringe
22G catheter
suture thread
antibiotic glue ointment
Anesthetic Avertin 25 mg/ml. Alternatively ketamine 9 mg/ml and xylazin 1 mg/ml.

Ask the Author: फेफड़े के लिए स्टेम सेल के प्रत्यारोपण के लिए एक विधि: ट्रेकिआटमी

4 Comments

I appreciate the elegant work, the suture idea of stabilizing the head of the animal and post-incision glue are fantastic ideas.
Murat Kaynar, MD
University of Pittsburgh, School of Medicine

1

Reply

Posted by: AnonymousMarch 7, 2007, 9:43 AM

I am concerned that the anaesthesia was not done properly. Some anaesthetics do cause sporadic twitching, but in this case the mouse reacted immediately to the incision and the blunt dissection under the trachea. I suggest that any live animal experiments published as model procedures be reviewed by an experienced laboratory animal veterinarian before posting.
Susan Schwab, PhD
University of California, San Francisco

2

Reply

Posted by: AnonymousMarch 16, 2007, 2:16 PM

I do, however, very much appreciate the effort to share this valuable technique.
Susan Schwab, PhD
University of California, San Francisco

3

Reply

Posted by: AnonymousMarch 16, 2007, 2:18 PM

I agree with the previous comments about the anesthesia. This is one of the first videos I have watched on JOVE and I think the idea of video journalling is great, but there seems to be potentially dangerous animal care issues for the journal and authors since the use of animals is plainly visible as opposed to written descriptions...
Also this technique should really be performed through intubation with no surgery.

4

Reply

Posted by: AnonymousJanuary 22, 2008, 1:50 PM

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