Submit
Browse  

The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Arabic was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE Neuroscience

تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية

, ,

Laboratory of Neurogenetics and Behavior, Rockefeller University

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of   JoVE Neuroscience. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Recommend JoVE to Your Librarian

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 54.224.79.93, User IP: 54.224.79.93, User IP Hex: 920670045

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please or create an account with your institutional email address to access this content.

 

Video Article Chapters

Cite this Article: تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية

Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae. J. Vis. Exp. (36), e1725, doi:10.3791/1725 (2010).

Abstract: تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية

حاسة الشم أمر أساسي للحشرات للعثور على الأطعمة ، والاصحاب ، الحيوانات المفترسة ، ومواقع oviposition 3. يتم تضمين الخلايا العصبية الحسية الشمية الحشرات (OSNs) في الشعر الحسية ودعا sensilla ، التي تغطي سطح أجهزة الشمية. وتغطي سطح كل sensillum مع مسام صغيرة ، يمكن من خلالها تمرير odorants وتذوب في السائل دعا الليمفاوية sensillum الذي يغمر التشعبات الحسية من OSNs يضم في sensillum معين. وأعرب عن التشعبات OSN مستقبلات الرائحة (OR) والبروتينات ، والتي تؤدي وظيفة والحشرات في قنوات ايون رائحة بوابات 4 و 5. تفاعل مع نسب الأرجحية odorants إما زيادة أو نقصان معدل اطلاق القاعدية من OSN. هذا نشاط الخلايا العصبية في شكل امكانات العمل يجسد التمثيل الأولى من الجودة ، والكثافة ، والخصائص الزمنية للالرائحة 6 ، 7.

نظرا لسهولة الوصول إلى هذه الشعرات الحسية ، فمن الممكن أن تؤدي التسجيلات من خارج الخلية OSNs واحد عن طريق إدخال القطب تسجيل في sensillum الليمفاوية ، في حين يوضع القطب المرجع في الليمفاوية من العين أو جسم الحشرة. في ذبابة الفاكهة ، sensilla منزل ما بين واحد وأربعة OSNs ، ولكن كل OSN يعرض عادة على ارتفاع السعة مميزة. تقنيات الفرز ارتفاع تجعل من الممكن لتعيين الاستجابات التشويك لOSNs الفردية. هذا التسجيل sensillum واحد (SSR) تقنية مراقبة الفرق في محتملة بين الليمفاوية sensillum والمرجعية باعتبارها القطب التموج الكهربائية التي تتولد عن هذا النشاط على مستقبلات OSNs 1 ، 2 ، 8. تغييرات في عدد من المسامير ردا على الرائحة تمثل الأساس الخلوي للرائحة الترميز في الحشرات. هنا ، نحن تصف طريقة إعداد المستخدمة حاليا في المختبر لإجراء إصلاح قطاع الأمن في melanogaster ذبابة الفاكهة والأنوفيلة الغامبية ، وتظهر آثار الناجمة عن ممثل odorants بطريقة sensillum محددة.

Protocol: تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية

1. رائحة التخفيفات

  1. معظم odorants القابلة للذوبان في زيت البارافين. ومع ذلك ، يمكن أيضا DMSO الإيثانول أو أن تستخدم المذيبات البديلة لروائح معينة. تحضير التخفيفات المناسبة (على سبيل المثال حجم 1:10 : حجم ؛ ت : ت) من odorants النقي في قوارير زجاجية. التخفيفات معظم الروائح هي مستقرة في درجة حرارة الغرفة ، ولكن بالنسبة لمركبات شديدة التقلب فمن الأفضل لجعل التخفيفات تعمل على أساس أسبوعي. كل sensillum يستجيب للروائح مختلفة داخل نطاق تركيز مختلفة. ويمكن لذبابة الفاكهة ، وهي تبدو مفيدة لمتابعة الجدول يمكن العثور على تركيزات مناسبة للاستخدام مع sensillum الواردة في 6 و 7.

    للتجربة الفيديو ، ونحن نستخدم زيت البرافين كعنصر تحكم المذيبات وأسيتات الميثيل (10 -6 الخامس : الخامس في زيت البرافين) و 1 - octen - 3 - OL (10 -7 ت : V في زيت البرافين) لذبابة الفاكهة والأنوفيلة والتسجيلات ، على التوالي.
  2. باستخدام مقص ، قص ورقة اللوني الى 3 ملم x 5 سم شرائط بحيث تناسب داخل ماصات باستور.
  3. ماصة 30 ميكرولتر من رائحة المطلوب على شريط ورق الترشيح وأدخله في ماصة الزجاج. خفض ~ 3 سم من خط أنابيب الهواء وأدخله في النهاية المفتوحة للماصة ، إغلاقه مع موصل. يتم استخدام موصل لختم ماصة التي سيتم تثبيتها بعد ذلك في أنابيب الهواء خط مضخة الهواء عندما حان الوقت لتسليم رائحة أثناء التجربة.

2. رائحة تسليم النظام

  1. باستخدام الحفر الصغيرة ، وقطع من البلاستيك 10 مل المصلية ماصة (على سبيل المثال عند علامة مل 4) وإنشاء اثنين من الثقوب (على سبيل المثال في مل -1،5 -0،5 وعلامات مل) التي سيتم استخدامها لعقد ماصات تحتوي على الروائح. اضافة الى وجود 200 غيض ميكرولتر ماصة في مقرنة الشائكة وتقديم وصلة الربط في نهاية حادة لماصة 10 مل. سيتم استخدام ماصة كجزء من نظام تسليم odorants.
  2. إرفاق ماصة على الوقوف مع المشبك المغناطيسي ماصة ووضعه قرب المجهر.

3. شحذ الأقطاب

  1. لشحذ الأقطاب ، وإعداد حل M 0.5 من هيدروكسيد البوتاسيوم (KOH) وفلتر لإزالة الجسيمات الدقيقة (مثل استخدام فلتر ميكرون 45). أخذ حقنة مل 20 و جعل ثقب صغير (~ مم 2) باستخدام إبرة على الجدار بالقرب من الحافة (~ 1 سم من الحافة) ، حيث يتم إدخال سلك كهربائي (الشكل 1A).
  2. ملء الحقنة مع KOH M 0.5 ، والمشبك على الوقوف تحت المجهر بحيث يتم وضع الطرف في ميدان العرض (الشكل 1B ، C). إدراج سلك كهربائي في حفرة صغيرة على الحائط حقنة (1B الشكل) ، والتأكد من أن السلك غير مباشرة امام مدخل الحقنة. ربط هذا السلك إلى القطب السالب من العاصمة امدادات الطاقة (على سبيل المثال Heerbrugg البرية MTR32 ، انظر طرق) أو قطبا من تزويد طاقة التيار المتناوب (مثل وايلد Heerbrugg LEP - 990018). نعلق على رمح حامل الكهربائي في micromanipulator دليل على الجانب الأيمن من المجهر ، ونعلق كابل كهربائي في قاعدة القطب حامل رمح مع مقطع تمساح. توصيل الكابل إلى القطب الموجب من إمدادات الطاقة العاصمة أو القطب الآخر من تزويد طاقة التيار المتناوب (الشكل 1A).
  3. ادخال سلك التنغستن (~ طول 5 سم) إلى صاحب القطب ، وإرفاقه القطب حامل رمح على مناور. تعيين امدادات الطاقة الى 6 الخامس ، وإدراج غيض من الأسلاك في حقنة مرارا وتكرارا لشحذ ، إذ أنها تحرص على رصد غيض تحت المجهر خلال العملية (الشكل 1C). للحصول على القطب مثالية للتسجيل ، ومكان من 90 ٪ من طوله في حل لمدة تصل إلى 1 دقيقة ، وتخلعها ببطء. ثم إدراج إلا إلى مزيد من رقيقة من 50 ٪ من القطب ~ لمدة 30 ثانية ، وكرر ذلك للحصول على معلومات سرية من السلك شحذ (~ 10 مرات).

    ينبغي للطرف القطب يكون على ما يرام بما يكفي للدخول في sensillum ، ولكن ليس غرامة وذلك لثني عندما يلمس ذلك خلال تسجيلات (الخطوات 6 و 7). على الرغم من أن يراقب طرف القطب تحت المجهر تشريح بينما يتم شحذ وهو مؤشر جيد للسمك ، وتبحث فقط في أنه تحت المجهر في تسجيل التكبير العالية سوف تعطي فكرة واضحة عما إذا كان قطب معين هو مناسبة للتسجيل.

4. الحشرات الإعدادية : ذبابة الفاكهة الهوائي

  1. بناء الشافطة الطيران. قطع قطعة من أنبوب خط جوي طويلة بما يكفي لشنق حول العنق بشكل مريح (حوالي 90 -- 120 سم). قطع غيض من غيض 200 ميكرولتر ماصة وأدخله في واحدة من نهاية الأنبوب. في موقف آخر ، انهاء ~ 1.5 سم × 1.5 سم قطعة من شبكة بحيث يخلق حاجزا المادية ولكن لا يمنع الهواء من المتدفقة من الأنبوب. قطع غيض من طرف 1 مل ماصة وموقف أوسع الغاية على رأس افتتاح أنبوب ، وعرقلة شبكة بينهما. وسيتم استخدام هذا الجزء لالتقاط والتلاعب ذبابة الخل الكبار (الشكل 2).
  2. تأخذ شريحة المجهر ووضع قطعة من الشمع الأسنان تقريبا في منتصف الجانب الطويل. على أعلى من ذلك positioغ الغطاء الزجاجي مائلا قليلا نحو الأعلى (~ 30) ، والتأكد من أن الشمع غير مباشرة أسفل الجزء العلوي ، والذي من شأنه أن يمنع التصور على ذبابة الخل تحت المجهر. سحب الزجاج الكهربائي مع مجتذب العمودي. وينبغي أن يكون طرفها رقيقة ومرنة بما فيه الكفاية لاحتواء في قطعة antennal بين الثانية والثالثة ، والحفاظ على استقرار الهوائي للتسجيلات. موقف القطب الزجاج على آخر قطعة من الشمع ووضعه على الجانب من الزجاج غطاء ، بعيدا بما فيه الكفاية أنه عندما يتم تخفيض رأس أن يصل إلى زاوية من الزجاج تغطي (الشكل 3A).
  3. العمل من زجاجة أو قارورة من الذباب البالغين من النمط الجيني المطلوب ، والتقاط ذبابة الخل الكبار باستخدام الشافطة الطيران. على الرغم من أن تستخدم عادة الإناث بسبب حجمها أكبر من ذلك ، يمكن أيضا أن تستخدم الذكور. مكان غيض 200 ميكرولتر ماصة على قمة الطرف مل 1 إلى تجنب السفر من الهرب. النفخ في الأنبوب ، بحيث يتم دفع يطير نحو نهاية غيض 200 ميكرولتر ماصة. تقليم نهاية واسعة من طرف ماصة مع شفرة حلاقة مليمترات قليلة من الذبابة نفسها ، ثم إدراج بعض الشمع لمنع الطيران من دعم للخروج. تحت المجهر ، وخفض مرة أخرى بالقرب من رأس ذبابة الخل ، مع إيلاء اهتمام لا يلحق الضرر للحيوان. مع طرف ماصة صغيرة ، دفع الشمع لاجبار رئيس تطير بحيث حوالي نصف أعين قذف من طرف (الشكل 3B). تأكد من أن ساقيه لا يخرج كذلك ، أو أنها يمكن أن تتحرك وتتداخل مع التسجيلات.
  4. جبل الذبابة على قطعة من الشمع ، ورئيسها يواجه صعودا ، ووضعه على الشريحة أمام زجاج الغطاء. دفع رئيس قليلا أمام ركن من الزجاج ، بحيث تمتد هوائيات والباقي على الزجاج. انخفاض غيض من الزجاج الشعرية في قطعة antennal بين الثاني والثالث (الشكل 3B).
  5. وأجزاء مختلفة من الهوائي منح حق الوصول إلى أنواع مختلفة sensilla. اعتمادا على احتياجات التجريبية وجه الخصوص ، فإن الحاجة إلى هوائي تكون موجهة بشكل مختلف للسماح بالوصول إلى أنواع مختلفة sensilla. لتسجيل من sensilla basiconic كبيرة كما هو الحال في مثالنا ، هو دفع أريستا أسفل على زجاج (الشكل 3B).

5. الحشرات الإعدادية : الأنوفيلة palps الفك العلوي

  1. باستخدام الشافطة الكهربائية (الشكل 2E) ، وجمع 40-60 3-5 أيام البعوض القديم (المختلط ذكور واناث) في قفص صغير من البلاستيك (الشكل 2F). كان ينبغي أن يكون البعوض تربى في ظل الظروف العادية ، أي في حاضنة للحشرات أو insectary في 25-28 درجة مئوية مع رطوبة 70-80 ٪. ضع قفص صغير من البلاستيك مع الحيوانات على الجليد ل15 دقيقة ~ حتى أنهم تخدير بسبب البرد. بمجرد أن الحيوانات قد توقفت عن التحرك ، ونقل الحيوانات فقط 4-6 في المرحلة تحت المجهر في وقت واحد ، وحفظ ما تبقى من هذه الحيوانات على الجليد خلال الإجراءات. على الرغم من أن تستخدم عادة الإناث بسبب حساسيتها للCO 2 ، ويمكن أيضا أن يكون من الذكور العاملين. حدد البعوض ذكرا أو أنثى ، استنادا الى بنية الهوائي الخاصة بهم (مثل ريشة في الإناث ، خيوط تشبه في الذكور) ، وإزالة أجنحتها والساقين مع غرامة ملقط لشل حركة لهم. ابقائهم في كوب صغير من البلاستيك مع ورقة مبللة في القاع ، لمنعهم من تجفيف.
  2. وضع قطعتين من الشريط على الوجهين (~ 1 سم في الطول) موازية لبعضها البعض (باستثناء ~ 1 سم) ، في المركز وعلى جانب من الشريحة الزجاجية الشكل (3C). باستخدام الملقط غرامة ، ومكان واحد البعوض على الشريط وسط تشريح تحت المجهر ، وتحويله جانبية والعصا هيئته وعين واحدة على الشريط. ضبط موقف palps الفك العلوي بحيث تمتد موازية palps كلا على الشريط (الشكل 3D). إصلاح palps الفك العلوي عن طريق وضع سلاسل رقيقة (شعرة الإنسان مثلا) في كل من القاعدة وعلى طرف palps (الشكل 3D). يستخدم الشريط الجانب كمستودع للسلاسل رقيقة ، في حين أن الشريط المركزي يحتاج إلى استبداله بعد كل تسجيل (الشكل 3C).

6. تسجيل ذبابة الفاكهة السوداء البطن

  1. ضع الشريحة تحت المجهر (الشكل 4A) في التكبير المنخفض وموقف الهوائي تقريبا في منتصف مجال الرؤية (FOV) (الشكل 4B). انخفاض بلطف الأقطاب بحيث يقع بالقرب من القطب مرجع عين الذبابة والقطب تسجيل بالقرب من هوائي (الشكل 4C). زيادة التكبير وإعادة الموقف الهوائي في منتصف FOV (الشكل 4D).
  2. وضع الجهاز تسليم وثيقة رائحة لرئيس الطيران ، مشيرا في الهوائي.
  3. في التكبير المنخفض (الشكل 4C) ، تضاف إشارة إلى القطب عين الذبابة. انخفاض القطب تسجيل على رأس الهوائي دون لمس سطحها.
  4. التحول الى تضخم عالية ، والتحكم الكهربائي مع تسجيل micromanipulator وأدخلها في sensillum مختارة (الشكل 4D). أي نقطة على طول sensillum جيدة للتسجيل. مرة واحدة داخل sensillum ، يمكن دفع الكهربائي أبعد في (وأحيانا على طول الطريق من خلال)للحصول على أفضل إشارة إلى نسبة الضوضاء. مرة واحدة في القطب هو في sensillum ، يمكن الكشف عن النشاط العفوي للخلايا.

7. تسجيل الأنوفيلة الغامبية

  1. وضع شريحة زجاجية تحت المجهر في التكبير المنخفض (10X) ، وموقف palps الفك العلوي تقريبا في منتصف FOV وعلى رأسه من أعلى (4E الشكل). تدوير حتى مرحلة واحدة من palps هو في الزاوية اليمنى مع القطب التسجيل.
  2. ضبط ارتفاع الأقطاب الكهربائية بحيث يتم وضع قطب كهربائي مرجعية فقط فوق العين من البعوض والقطب تسجيل بالقرب من palps الفك العلوي.
  3. وضع الجهاز التسليم الرائحة بحيث يكون أقرب ما يمكن إلى palps.
  4. إدراج الإشارة إلى القطب العين في أقل التكبير (10X) ، والتحول إلى أعلى التكبير (100X) ، تضاف إلى القطب تسجيل sensillum على شماعة لامسة (4F الشكل). مرة واحدة في القطب هو في sensillum ، يمكن الكشف عن النشاط العفوي للخلايا.

8. ممثل النتائج

اعتمادا على sensillum ونوعية التسجيل ، يمكن للمرء أن يميز أعداد مختلفة من الخلايا العصبية الشمية خلال التتبع واحد. في sensilla في basiconic كبير من melanogaster ذبابة الفاكهة ، على سبيل المثال ، ينبغي أن يتراوح بين 2 و 4 الخلايا التي تختلف في السعة تظهر ارتفاعا خلال تسجيل 9 و 10.

في تجربة لدينا شريط فيديو ، وذبابة الفاكهة AB2 sensillum يظهر خليتين ، و. خلية (الشكل رقم 5 ، وارتفاع الأزرق) وخلية B (الشكل رقم 5 ، وارتفاع الخضراء) لا يتم تنشيط الخلية خلال تطبيق زيت البرافين (الشكل 5A) ، في حين فقط الخلايا ويستجيب للتخفيف من 10 -6 أسيتات الميثيل (الشكل 5B).

في الفك العلوي لامسة من الأنوفيلة الغامبية ، وربط مخدد sensillum يحتوي على ثلاث خلايا ، ولكن يتم التمييز بسهولة اثنين فقط (الشكل 5C ، التموج الأزرق والأخضر ، على التوالي). في تجربة الفيديو نظهر كيف أن الخلية B يستجيب لتخفيف -7 10 - 1 - octen OL - 3 (الشكل 5D).

الشكل 1
الشكل 1. القطب مبراة
(أ) منظر عام للجهاز كهربائي مبراة (B) وحقنة تحتوي على 0.5 M KOH (يسار) يستخدم لشحذ القطب (يمين) (C) عن قرب من طرف القطب المقبل لافتتاح المحاقن.

الشكل 2
الشكل 2. كيفية إعداد والطيران والشافطة الشافطة البعوض
(أ) ابتداء من المواد :... خط أنابيب البلاستيك الهواء ، وهما خفض نصائح ماصة ، وشبكات (B) والشافطة يطير حالما يتم الانتهاء منه (C) تفاصيل نهاية يستخدم لاصطياد الذباب الخل (D) تفاصيل على الطرف الآخر من الشافطة ذبابة (E) والشافطة الكهربائية لجمع البعوض يتكون من الجسم الرئيسي وقفص من البلاستيك للانفصال (F) وقفص من البلاستيك للانفصال البعوض.

الشكل 3
الشكل 3. ذبابة الخل إعداد (ذبابة الفاكهة السوداء البطن) ، وبعوضة الملاريا (الأنوفيلة الغامبية) لتسجيل
(أ) صورة لذبابة الخل التي شنت على الشريحة قبل تحديد المواقع تحت المجهر. (B) عن قرب من الخل رأسه يطير مع هوائي يوضع في مكان من الزجاج الشعرية (C) منصة صورة بعوضة على الشريحة (D) عن قرب الرأس مع خرطوم البعوض وpalps الشائكة على الشريط.

الشكل 4
الشكل 4. التسجيل من ذبابة الخل (ذبابة الفاكهة السوداء البطن) ، وبعوضة الملاريا (الأنوفيلة الغامبية)
(أ) عرض من الإعداد الكهربية (B) عن قرب لإعداد الطيران التي شنت على المجهر. لاحظ موقف كل من القطب تسجيل (يسار) ، ونظام التسليم رائحة (وسط ماصة) ، والقطب التسجيل (الحق) (C) صورة الذبابة في إطار الهدف 10X (D) صورة للهوائي يطير تحت الهدف 100X ؛ sensilla basiconic كبيرة (الأسهم) ، ويتخلل بين المنظمات غير الحسية الشعر (السهام) (E) عرض 10X من البعوض التي شنت لتسجيل (F) عرض التكبير السامية لامسة من البعوض وsensillum شماعة (السهم). .

الشكل 5
الشكل 5. أمثلة من التسجيلات من melanogaster ذبابة الفاكهة والأنوفيلة الغامبية
(A) وsensillum AB2 melanogaster ذبابة الفاكهة من مجلسي الخلايا العصبية الحسية ؛. في خلية (طفرات اللون الأزرق) وباء الخلية (التموج الأخضر) (B) والخلايا A و B خلال تطبيق أسيتات الميثيل 10 -6 (C) و ربط sensillum الأنوفيلة الغامبية من مجلسي الخلايا العصبية الحسية ، وخلية (طفرات اللون الأزرق) وباء الخلية (التموج الأخضر) (D) تطبيق 10 -7 1 - 3 - octen رأ إلى sensillum شماعة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion: تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية

تستخدم إشارات شمية بواسطة الكائنات الحية لتحديد مصادر الغذاء والاصحاب المحتملة ، والحيوانات المفترسة. الخلايا العصبية الحسية الشمية (OSNs) هي المركز الأول بين التتابع مؤثرات الخارجية وأعلى المراكز في الدماغ حيث يتم معالجة المزيد من المعلومات. في melanogaster ذبابة الفاكهة والأنوفيلة الغامبية ، OSNs يمكن الحصول عليها بسهولة ، ويمكن رصد نشاطهم الكهربائية بينما يحفزه نفث رائحة.

أوضح تسجيل sensillum واحد (SSR) تقنية في هذا الفيديو قد استخدمت على نطاق واسع لتسجيل ودراسة من OSNs ردودهم الكهربائية لعدد كبير من odorants 6 ، 7. جعلت من المستقبلات الشمية deorphanization (ORS) 6 ، (11) ورسم خرائط لنسب الأرجحية في مواقع محددة على ذبابة الفاكهة هوائي 9 ، 12 ، 13 SSR التقنية أداة قوية لتحليل الخصائص الكهربية من نسب الأرجحية محددة في الجسم الحي ، وأول خطوة لفهم الكيفية التي ترجمت في العالم الخارجي الشمية إلى إشارات كهربائية من خلال OSNs وينظر إليها في نهاية المطاف من قبل الحيوانات.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures: تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية

Materials: تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية

Name Type Company Catalog Number Comments
Paraffin oil Odors Fluka 76235
High purity odors (>98%) Odors Sigma-Aldrich Methyl acetate
#296996
1-octen-3-ol
#74950
Filter paper strips Odors Fisher Scientific 05-714-1 Chromatography paper
Connectors Odors Cole-Parmer EW-06365-40 1/16x1/8"
Glass vials Odors Agilent Technologies 5182-0556
Air line plastic tubing Odor Delivery Python Products 500PAL
1 serological pipette Odor Delivery Corning 4101 10 mL
Plastic tubing Odor Delivery Cole-Parmer EW-06418-0 0.050"x0.090"OD
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes Odor Delivery Fisher Scientific 13-678-20A 5-3/4 inches
Programmable stimulus controller Odor Delivery Syntech CS-55
Anti-vibration table Electrophysiology Equipment TMC 63533 36Wx30Dx29H
Faraday cage Electrophysiology Equipment TMC MI8133303
Inverted microscope Electrophysiology Equipment Nikon Instruments E600FN ECLIPSE Recording microscope
10x and 100x objectives Electrophysiology Equipment Nikon Instruments 10x Plan Fluor 100x L Plan
Dissecting microscope Electrophysiology Equipment Nikon Instruments EZ645 electrode sharpening/insect prep microscope
Magnetic stands Electrophysiology Equipment Newport Corp. MODEL 150
IDAC Electrophysiology Equipment Syntech IDAC-4
Acquisition software Electrophysiology Equipment Syntech Autospike
1 macromanipulator Electrophysiology Equipment Narishige International MN-151 Joystick manipulator
Used for positioning reference electrode
1 micromanipulator Electrophysiology Equipment EXFO PCS-6000 Used for positioning recording electrode
Crocodile clip Electrophysiology Equipment Pomona AL-B-12-0
Electric cable Electrophysiology Equipment Pomona B-36-0 Test Cable Assembly
2 electrode holders Electrophysiology Equipment Syntech N/A Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode
AC probe Electrophysiology Equipment Syntech N/A Universal single ended probe (10xAC)
Tungsten electrodes Electrophysiology Equipment Microprobes M210 straight tungsten rods, 0.005x3
Potassium hydroxide Electrophysiology Equipment Sigma-Aldrich 221473
Syringe Electrophysiology Equipment BD Biosciences 301625 20 mL
Power supply Electrophysiology Equipment Wild Heerbrugg e.g MTR32
Vertical puller Insect prep Narishige International PB-7
Razor blade Insect prep VWR international 55411-050
Dental wax Insect prep Patterson 091-1503
Microscope slide Insect prep Fisher Scientific 12-550A
Cover glass Insect prep Fisher Scientific 12-541A 18X18 #1.5
Polypropylene mesh Insect prep Small Parts, Inc. CMP-0500-B
Glass electrode Insect prep Frederick Haer and Co. 27-32-0-075 Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm
Double-sided tape (3M) Insect prep 3M MMM6652P3436 Double-sided tape (3M)
Forceps Insect prep Fine Science Tools 021x0053 Dumont #5 Mirror Finish Forceps
Small plastic cup Insect prep VWR international 89009-662 7 x 5.7 (23/4 x 21/4)
Electric aspirator Insect prep Gempler’s RHM200

References: تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية

  1. Boeckh, J. Elektrophysiologische Untersuchungen an einzelnen Geruchsrezeptoren auf der Antenne des TotengrAbers (Necrophorus, Coleoptera). Z. Vergl. Physiol. 46, 212-248 (1962).
  2. Schneider, D. & Hecker, E. Zur Elektrophysiologic der Antenne des Seidenspinners Bombyx mori bei Reizung mit angereicherten Extrakten des Sexuallockstoffes. Z. Naturforschg. 11b, 121-124 (1956).
  3. Touhara, K. & Vosshall, L. B. Sensing odorants and pheromones with chemosensory receptors. Annu Rev Physiol 71, 307-32 (2009).
  4. Sato, K. et al. Insect olfactory receptors are heteromeric ligand-gated ion channels. Nature 452, 1002-6 (2008).
  5. Wicher, D. et al. Drosophila odorant receptors are both ligand-gated and cyclic-nucleotide-activated cation channels. Nature 452, 1007-11 (2008).
  6. Hallem, E. A., Ho, M. G. & Carlson, J. R. The molecular basis of odor coding in the Drosophila antenna. Cell 117, 965-979 (2004).
  7. Hallem, E. A. & Carlson, J. R. Coding of odors by a receptor repertoire. Cell 125, 143-60 (2006).
  8. Boeckh, J., Kaissling, K. E. & Schneider, D. Insect olfactory receptors. Cold Spring Harb Symp Quant Biol 30, 263-80 (1965).
  9. de Bruyne, M., Foster, K. & Carlson, J. R. Odor coding in the Drosophila antenna. Neuron 30, 537-52 (2001).
  10. Lu, T. et al. Odor coding in the maxillary palp of the malaria vector mosquito Anopheles gambiae. Curr Biol 17, 1533-44 (2007).
  11. Hallem, E. A., Fox, A. N., Zwiebel, L. J. & Carlson, J. R. Olfaction: mosquito receptor for human-sweat odorant. Nature 427, 212-213 (2004).
  12. Couto, A., Alenius, M. & Dickson, B. J. Molecular, anatomical, and functional organization of the Drosophila olfactory system. Curr. Biol. 15, 1535-1547 (2005).
  13. Fishilevich, E. & Vosshall, L. B. Genetic and functional subdivision of the Drosophila antennal lobe. Curr Biol 15, 1548-53 (2005).

Ask the Author: تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية

3 Comments

i'm wondering if there is a mistake in the Sharpening electrodes part. the tungsten electrode should be connected to the anode of the power supply, while the electric wire contacting the KOH solution should be connected to the cathode?

1

Reply

Posted by: AnonymousSeptember 12, 2010, 11:12 AM

Yes, we apologize for the editing error in our video article. We are working with JoVE to issue a formal corrigendum but until that time, you are absolutely correct that we reversed anode and cathode in our text above. Please accept our apology for any confusion that this error may have cause you or others.

1.1

Reply

Posted by: Leslie VosshallSeptember 17, 2010, 11:00 AM

Is this article locked for correcting mistakes?
I can't read it now.

2

Reply

Posted by: AnonymousNovember 3, 2010, 5:29 AM

Sorry, what do you mean? Could you email us at support@jove.com please? You must have a subscription to view this article.

2.1

Reply

Posted by: AnonymousNovember 3, 2010, 10:55 AM

What is the purpose of filtering the KOH with a 45 micron filter? Thank you for your time.

3

Reply

Posted by: David K.January 29, 2013, 12:10 PM

Thank you for this excellent question. We filtered the KOH simply to remove possible particles in the solution and to have a clean solution to work with. Standard disposable laboratory filter units similar to those used for tissue culture will work just fine.

3.1

Reply

Posted by: Leslie V.January 30, 2013, 11:00 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter