ヒト臍帯静脈内皮細胞の単離（HUVEC）

手順

1. 過剰な血液オフクリーンパッドとDABにコードを置く。コー​​ドの両端で新鮮なカットを行います。
2. 静脈に、ONプラスチック針のシースで21 1 / 2 Gの針を挿入します 。 （静脈の最大の開口部である、2小さいものが動脈です。）
3. 止血剤で固定針をクランプし、針にハンクスの20ccシリンジを取り付けます。
4. 適度な圧力で静脈を通してハンクスを押してください 。漂白剤とビーカー内で廃棄物を収集する。 （押しながら片手で針とコードを保持する静脈から飛び出る針を妨げる。）静脈内の血液の多くがある場合は、もう一度洗う。
5. パッドの上にコードを置くと静脈のもう一方の端をクランプ。脊髄に沿ってリークをチェックするハンクスの数mLで埋める。 5 mLを撤回し、底部のクランプを外してください。
6. 20ccシリンジを外します。 10ccのシリンジからプランジャーを外します。 10mlのコラゲナーゼを投入し、プランジャーを交換、針に10ccの注射器を取り付けます。あなたが開放端を終了する最初の量が表示されるまで、静脈内にコラゲナーゼを押し込みます。開放端を再度クランプし、 静脈の中程度の膨満があるまでコラゲナーゼを詰めます。平滑筋の汚染でも多くの膨満結果。
7. 軽くコードをマッサージ 。
8. 37 DPBSでインキュベートするコード（接続されている止血、注射針や注射器付き）℃で15分間。
9. インキュベートしながら、第^2のコードと手順1-8を続ける。
10. インキュベーション後、50mLのチューブを介して電源コードを保持しながらビーカーからコードを取り出しては、ボトムクランプ上記の端をカット。 チューブ内のすべてのものを収集してください 。コー​​ドを通して、残りのコラゲナーゼを押し、その後20ccシリンジを接続し、適度な圧力で通過ハンクスを押してください。
11. は平滑筋細胞が必要とされていない場合、この時点でコードを破棄。それ以外の場合、37℃〜5ミリリットルコラゲナーゼとインキュベートで2 50mLのチューブに同じコードを配置° Cを30〜60分間。
12. すべてのコードが終了するまでチューブを保管してください。
13. 5分間〜1200 rpmでチューブを回転させる 。
14. 上清を吸引しますが（1〜2 mLを除く）。T25で5mls PHECの+とプレートでペレットを再懸濁します 。
15. ° Cで5％CO ₂で一晩37℃でインキュベートする 。
16. 翌日上清を除去し、新鮮な培地と交換してください。多くの赤血球がある場合は、M199で一度洗い、その後PHEC +を追加。プレートはコンフルエントになるまで（1-4日）いつものようにインキュベートし続ける。糊化T75に分割。
17. 一度T75は3つのT75sに分割、合流です。フラスコごとに2つのバイアルを凍結する。

注：内皮細胞（不活性）石畳の外観を持っている。のカップルは、彼らが通常unactive状態に戻す通過した後に内皮細胞は時々 、右の分離後（長くて先のとがった）活性化される。

クリーン

1. 非常に慎重に、鋭利物容器の中に針を処分する。
2. ビッグバイオハザード容器に注射器を廃棄してください。
3. 小さなバイオハザードバッグにすべての組織を置く。 -20閉じる袋と凍結°焼却時まで。
4. 少なくとも10分間ヴァイラサイドゥですべての楽器を浸す。
5. 廃棄物/漂白剤をビーカーにインキュベーションのメディアを追加します。少なくとも10分間放置します。
6. バイオハザード廃棄物にベンチパッドを捨てる。
7. ビーカー、ベンチトップとvircideで水浴の蓋の内側と外側を下にスプレーしてください。 10分を座らせて、その後拭いてください。
8. 暖かい水でビーカーや楽器をすすぎ、（彼らが錆びていないので、楽器をオフブロット）乾燥してラックにハングアップする。
9. シンク下除染廃棄物を処分。
10. 冷蔵庫に未使用のメディアを返します。
11. バイオハザード廃棄物の手袋を廃棄してください。