The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Arabic was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
Department of Molecular Biology and Biochemistry, University of California, Irvine (UCI)
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
You do not have access to any JoVE content through your current IP address.
IP: 50.19.155.235, User IP: 50.19.155.235, User IP Hex: 840145899
Current Access Through Your Registered Email Address
You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.
Nakatsu, M. N., Davis, J., Hughes, C. C. Optimized Fibrin Gel Bead Assay for the Study of Angiogenesis. J. Vis. Exp. (3), e186, doi:10.3791/186 (2007).
تحضير الخلايا
طلاء مع الخرز HUVEC -- -1 اليوم
التضمين BEADS المغلفة في GEL الليفين -- يوم 0
ملاحظات :
عادة ، عندما يتم تشكيل هلام الليفين ، سوف ترى فقاعات صغيرة في هلام. لا تقلق ، سوف تختفي في أيام 3-4.
تغيير وسائل الإعلام كل يوم ، أي يوم 2 ، 4 ، 6 ، الخ...
بعد يوم 3 أو 4 يجب أن تبدأ لرؤية تبرعم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
هناك إجماع متنام بأن ثلاثية الأبعاد (3D) في الأوعية الدموية فحوصات المختبر تقديم نموذج الذي هو أقرب إلى البيئة الفعلية في الجسم الحي مما يمكن تحقيقه باستخدام 2D الثقافات. فمن الواضح أن نظم 3D متفوقة ينبغي استنساخه ، وتكون قادرة على محاكاة العديد من الخطوات الرئيسية في الأوعية الدموية. في حين وضعت عدة فحوصات 3D السابقة ، الكثير من هؤلاء إما استخدام يصعب الحصول على خلايا الاوعية الدموية الدقيقة ، أو فقط ألخص بعض المراحل. في هذا الفيديو ، وصفنا ، وإجراء الفحص الأمثل في الأوعية الدموية التي تستخدم المختبر السري الإنسان الأوروبية الوريد ، والتي يمكن الحصول عليها بسهولة والمفوضية الأوروبية الأكثر استخداما في البحث في الأوعية الدموية. والفحص ، على مدى عدة أيام ، وتستنسخ باستمرار السفن شمعة طويلة مع البراءة واضحة ، بين الخلايا محاطة EC الاستقطاب. ويلاحظ أيضا مراحل لاحقة من المفوضية الأوروبية والانصهار المتفرعة من السفن (مفاغرة). الأهم من ذلك ، في هذه الثقافات HUVEC تخضع كافة التغييرات الشكلية التي تعتبر المفوضية الأوروبية مع الاوعية الدموية الدقيقة ، سواء في الجسم الحي أو في المختبر ، بما في ذلك تنتشر ، والهجرة ، وتشكيل محاذاة الانتشار ، أنبوب ، والمتفرعة مفاغرة. ملف التعبير الجيني للتغيرات HUVEC ، بالتوازي ، على نحو أوثق من المباراة التي EC الاوعية الدموية الدقيقة. في الختام ، نتقدم بروتوكول الأمثل لنموذج الأوعية الدموية في المختبر الذي يلخص مراحل هامة عدة من هذه العملية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Cytodex-3 Beads | Reagent | Amersham | 17-0485-01 | 10 g/bottle. 1.0.5 g of dry beads are hydrated and swollen in 50 mL PBS (pH=7.4) for at least 3 hours at RT.Use a 50 mL tube and place it on the rocker.2.Let the beads settle down (~ 15 min). Discard the supernatant and wash the beads for a few minutes in fresh PBS (50 mL).3.Discard the PBS and replace with fresh PBS:25 mL -> 20 mg/mL => 60000 beads/mL or50 mL -> 10 mg/mL => 30000 beads/ mL4.Place the bead suspension in a siliconized glass bottle (Windshield Wiper or Sigmacote).5.Sterilize the beads by autoclaving for 15 min at 115°C.6.Store it at 4°C. |
| Aprotinin | Reagent | Sigma-Aldrich | A-1153 | 10mg/bottle. Reconstitute lyophilized aprotinin at 4 U/mL in DI water. Sterile filter. Make aliquots of 1 mL each. Store at -20C. |
| Fibrinogen Type I | Reagent | Sigma-Aldrich | F-8630 | 1g. Dissolve 2 mg/mL fibrinogen in DPBSNote clottable protein % and adjust accordingly Heat in a 37°C-water bath to dissolve the fibrinogen. Mix by inverting the tube. Do not vortex.Sterile filter through 0.22 um |
| Thrombin | Reagent | Sigma-Aldrich | T-3399 | 22 mg=1000 units. Reconstitute in sterile water at 50 U/mL. Make aliquots of 0.5 mL each. Store at -20C. |
1. Nehls, V. and Drenckhahn, D. A microcarrier-based cocultivation system for the investigation of factors and cells involved in angiogenesis in three-dimensional fibrin matrices in vitro. Histochem Cell Biol 104:459-66. (1995)
2. Nehls, V. and Drenckhahn, D. A novel, microcarrier-based in vitro assay for rapid and reliable quantification of three-dimensional cell migration and angiogenesis. Microvasc Res 50:311-22. (1995)
1
ReplyPosted by: AnonymousMay 3, 2007, 1:00 PM