The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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1Pharmacology and Chemical Biology, University of Pittsburgh Drug Discovery Institute, 2Department of Microbiology and Molecular Genetics, University of Pittsburgh, 3Department of Pharmaceutical Sciences, University of Pittsburgh, 4Department of Chemistry, University of Pittsburgh
Vogt, A., Codore, H., Day, B. W., Hukriede, N. A., Tsang, M. Development of automated imaging and analysis for zebrafish chemical screens. . J. Vis. Exp. (40), e1900, doi:10.3791/1900 (2010).
1）设置斑马鱼交配和BCI治疗。
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| 一 | 2μL 二甲基亚砜 | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL 二甲基亚砜 |
| 乙 | 2μL 二甲基亚砜 | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL 二甲基亚砜 |
| 彗星 | 2μL 二甲基亚砜 | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL 二甲基亚砜 |
| ð | 2μL 二甲基亚砜 | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL 二甲基亚砜 |
| Ë | 2μL 二甲基亚砜 | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL 二甲基亚砜 |
| F | 2μL 二甲基亚砜 | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL 二甲基亚砜 |
| 摹 | 2μL 二甲基亚砜 | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5米M） | 2μL 二甲基亚砜 |
| H | 2μL 二甲基亚砜 | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL BCL （0.1MM） | 2μL BCL （0.5MM） | 2μL BCL （1MM） | 2μL BCL （2MM） | 2μL BCL （2.5） | 2μL 二甲基亚砜 |
2）自动成像96孔板和分析。
代表性的成果：
所有的图像进行分析后，数据可以被可视化内Cellenger或出口到第三方软件（EXCEL，GraphPad棱镜）作进一步的分析和图形表示。图2显示从处理过的车辆存档的扫描图像和一个BCI的无CNT的分析应用，良好的待遇。图1文件GFP报告基因的表达在TG（dusp6：d2EGFP）的BCI的剂量依赖效应PT6胚胎。引出一个半最大反应（EC50）所需的浓度约为12微米。 
图2
自动图像采集和分析，转基因斑马鱼的胚胎。 （一）二甲基亚砜车辆处理TG（dusp6：d2eGFP）30hpf PT6胚胎。 （二）与20μMBCI显示处理过的转基因胚胎中GFP的表达增加。 （三）从胚胎图像（a）在运行规则集Definiens的头部找到GFP表达。橙色点表示该软件的措施GFP的强度。 （四）从胚胎图像（b）在运行规则集Definiens公司在头部发现GFP的表达。橙色点表示该软件的措施GFP的强度。请注意，规则集能够找到处理后的胚胎中GFP表达的扩大面积。
限制的斑马鱼化工屏幕的吞吐量的一个主要因素是缺乏系统的成像和分析过程的96孔板的方法。由于是复杂的多细胞生物体的图像，低对比度和性质异构，现有的图像分析算法故障检测和量化机体内部的具体结构。因此，大多数公布的斑马鱼化工屏幕涉及视觉由专门人员检查整个过程中个别井。这通常可以防止的数值读数生成和屏幕图像和数据的完整归档。此外，评价手册消除图像为基础的筛查，即能力，画面表现进行回顾性分析，研究表型的变化，没有甄别运动（如毒性或发育缺陷）的主要重点和跨的几个关键优势参考过去或将来的屏幕上使用相同的化合物库的筛选数据。
在这份报告中，我们强调和斑马鱼的胚胎在多孔板自动成像分析的方法，无需用户干预。 PT6胚胎在96孔板，并开发了一种图像分析算法基于Definiens公司的认知网络技术，量化的GFP：我们ImageXpress超激光扫描共聚焦阅读器（分子器件，位于美国加州Sunnyvale）的形象TG（d2EGFP dusp6）自动图像捕捉表达的转基因胚胎的头。该方法提供了分级响应和FGF信号的一种小分子活化剂在体内的活动量化。与epifluorescence基于ArrayScan II（Cellomics公司，匹兹堡PA）获得了类似的结果证明它是可以实现的各种市售板读者2斑马鱼胚胎的自动图像捕获。方法论的发展，自动分析多细胞生物体图像消除由人类观察者视觉得分的需要，并启用了回顾性分析，并与未来的屏幕比较的数值数据和图像的生成和归档。
这项工作是由Hukriede，NCI / NIH（P01 CA78039）沃格特，NHLBI /美国国立卫生研究院（1R01HL088016）曾NICHD的/美国国立卫生研究院（1R01HD053287）。
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tricaine (MS222) | Sigma-Aldrich | Cat.# A-5040 |
