The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Hebrew was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
Department of Molecular, Cellular, and Developmental Biology, Yale University
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
Current Access Through Your Registered Email Address
Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).
בתגובה חוטם הארכה (PER) היא התנהגות טעם assay כי נעשה שימוש זבובים וכן דבורי דבש.
על פני השטח של הפה של זבוב (labellum), ישנם מבנים דמויי שיער הנקרא sensilla אשר בתים נוירונים טעם. כאשר חומר אטרקטיבי יוצר קשר עם labellum, לטוס מרחיב חוטם שלה לצרוך את החומר. תגובת חוטם הרחבה (PER) assay מודד את התגובה התנהגות הטעם, היא שיטה יעילה כדי ללמוד על העדפות מזון זבוב אחד. פתרונות של סוכרים שונים, כגון גלוקוז סוכרוז, פרוקטוז ו, הם אטרקטיביים מאוד לטוס. ההשפעה של חומרים מרתיעה גם יכול להיבדק כמו הפחתה של PER כאשר מעורבים פתרון מתוק.
למרות הפשטות של התהליך הבסיסי, יש הרבה דברים שיכולים למנוע ממנו לעבוד. אחד הגורמים הדורש תשומת לב הוא מצב תגובה של הזבוב. בפעם רעב הנדרש כדי להביא את המדינה לטוס מענה הולם משתנה באופן דרסטי 36-72 שעות. הקמנו סדרה של בקרות כדי להעריך מצב של זבוב המאפשר סינון החוצה של בעלי חיים יחידים שאינם מגיבים או Hyper-תגובה. גורם חשוב נוסף הוא רמת ההשפעה ואת המיקום של איש הקשר של labellum, אשר יהיה קשה לתאר במילים. מצגת וידאו זה מדגים את כל אלה, יחד עם שיפורים נוספים אשר יגדילו את שחזור של שיטה זו.
רעב
תקן את הזבוב
הכינו פתילות סוכרוז
הכן שולטת בחיות מעבדה
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
במצגת זו, שעברנו את כל השלבים עבור assay בתגובה חוטם הארכה. השיטה נשמעת די פשוטה אבל כמו רבים מבחני התנהגות אחרים, דברים קטנים רבים יכולים למנוע את assay מעבודה. עברנו שלבים רבים כאלה שצריכים תשומת לב. הנה, אני reemphasize כמה מן הגורמים החשובים ביותר.
גורם אחד כזה הוא צורה של הפתיל. הראיתי כמה דוגמאות טובות מאוד, אבל כמובן, במציאות הכל יהיה ספקטרום רציף בין טוב מאוד רע מאוד. בהתחלה, ייתכן שאתה משתמש בדברים קרוב לצד טובים מאוד, אבל יום אחר יום רגיל שלך עלול להתחיל להעביר לאט לאט לתחום לא כל כך טוב. תפיסת האדם של כך נקרא "טוב" יכול בקלות משמרת במודע. אחת הדרכים למנוע זאת היא לקחת תמונה של הפתיל השתמשת בניסויים שלך, ולהשוות את כל התמונות על ידי צד בצד. או, לפחות לקחת תמונה אחת של פתילות זה עבד טוב מאוד, ובוהה בו זמן מה לפני הבדיקה Pers.
דבר נוסף חשוב הוא רמת ההשפעה של הקשר. זה יותר קל להתמודד עם כי המטרה היא להפוך את מגע עדין ככל האפשר. אם אינך רואה להזיז את ראשו של לטוס בכלל, כי הוא הטוב ביותר.
התנאי רעב הוא הגורם הכי קשה לשלוט. טעם רבים או מבחני התנהגות חוש הריח, בזמן רעב של 24 שעות משמש לעתים קרובות מאוד. 24 שעות עשוי להיות נוח מאוד לאנשים לעשות את הניסוי, אבל אם אתה טס האחורי שלך במצב טוב מאוד, זו תקופה קצרה למדי. אבל גם אם השתמשת מזון לטוס עשיר, ושליטה צפיפות בדיוק, חלון לבדיקות PER יכול לנוע בין 36 שעות ל 72 שעות. לכן, כניסוי, אני חייב להגיד שזה מאוד לא נוח לאנשים. ישנו גורם נוסף להקשות על נסיינים. כעניין של עובדה, יהיו קבוצות רבות, שבו חלון לצורך הניסוי עשוי להיות קצר מאוד, או אולי אפילו לא קיים כלל.
אז יש כמה המכשולים העיקריים שאתה צריך לעבור, אבל הדבר החשוב ביותר הוא שליטה חיוביות ושליליות שהזכרתי. על ידי שמירה על תקן אותם מאוד חמור, תוכל לאסוף אמין ערכות נתונים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
אנו מודים פול גרהם עבור משרת כאיש מצלמה במצגת וידאו.
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| HDR-HC1 | Camera | Sony Corporation | ||
| SMZ800 | Microscope | Nikon Instruments | ||
| P-IBSS | Camera Adapter | Nikon Instruments | ||
| 1x DC10LN | Camera Adapter | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| 257010 | Camera Adapter | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| TREKKER Mk2 | Tripod | BENBO | ||
| Gorillapod SLR | Tripod | Joby | ||
| iMac G5 | Computer | Apple | ||
| Power Mac G5 | Computer | Apple | ||
| iMovie | Software | Apple | ||
| MPEG Streamclip | Software | SQUARED 5 |
1. Dethier, V. G. The Hungry Fly (Harvard University Press, Cambridge, 1976).
Comments about the starvation protocol.
I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. 2007 Jul 18;27(29):7640-7.) In my experiments flies are starved for 21h before conditioning at 25°C.
In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at 25° and 24h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed.
The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from 20 to 30 flies in the vials might have big influence.
1
ReplyPosted by: AnonymousNovember 10, 2008, 8:05 AM