Proboscis Erweiterung Response (PER) Assay in Drosophila

Hunger

1. Zunächst verhungern the fly.
2. Ein kleines Stück von Kim-wischen mit Wasser in ein leeres Fläschchen getränkt.
3. Transfer 20-30 wohlgenährt fliegt in die leere Flasche.
4. Prüfen Sie alle 12 -24 Stunden, um sicherzustellen, dass die Papier ist feucht.
5. Hungern the fly für 36-72 Stunden.

Fix the fly

1. Nehmen Sie eine in einem Aspirator fliegen.
2. Legen Sie eine 200 ul gelber Spitze über die Öffnung. Gleichzeitig spiegeln und bläst, können Sie Squeeze-the-fly in die gelbe Spitze.
3. Sanft gelten etwas Luft, die Fliege Push-up bis zu einem Punkt, wo sie sich nicht bewegen kann.
4. Durch die Verwendung einer Rasierklinge, setzen Sie ein Zeichen in etwa auf die Fliege ins Auge, dann saugen die fliegen zurück und schneiden Sie die Spitze.
5. Pusten Sie leicht die Fliege wieder in Position, aber kurz vor Erreichen der ganz am Ende, eine Schräge an der Stelle, wo der Rüssel werde lokalisiert werden geschnitten wird. Sie können ohne diese schräg geschnitten, aber es würde auf jeden Fall die folgenden Prozess zu vereinfachen.

Bereiten Saccharose Dochte

1. Twist einem 6 mm breiten Streifen Kimwipes ®-Papier in ein Gewinde und auseinander ziehen in kleine Stücke von Kegel-geformten Docht (<1 cm).
2. Diese kleinen Dochte wurden in Saccharose-Lösungen oder Wasser getaucht und präsentiert dem Rüssel durch die Kontaktaufnahme.

Bereiten Kontrollen und Versuchstieren

1. Vor der Prüfung keine Geschmacksstoffe, geben 4% Saccharose-Lösung, die Fliege. Dies wirkt wie eine positive Kontrolle. Entsorgen Sie alle fliegen, die nicht geantwortet haben.
2. Als nächstes testen dH ₂ 0 on the fly. Diese wirken als negative Kontrolle. Entsorgen Sie die fliegen, wenn sie zu reagieren haben.
3. Testen Sie diese Kontrollen nach dem Testen Sie Ihre Geschmacksstoffe.

In dieser Präsentation haben wir alle Schritte für Proboscis Extension Response Test gegangen. Die Methode klingt ziemlich einfach, aber wie in vielen anderen Verhalten Assays, viele kleine Dinge können den Test von der Arbeit abzuhalten. Wir haben durch viele solche Schritte, die Aufmerksamkeit brauchen gegangen. Hier noch einmal hervorzuheben, habe ich einige der wichtigsten Faktoren.

Ein solcher Faktor ist die Form der Docht. Ich habe einige der sehr guten Beispielen gezeigt wird, aber natürlich in Wirklichkeit alles wäre ein kontinuierliches Spektrum zwischen sehr gut und sehr schlecht sein. Am Anfang, verwenden Sie möglicherweise die Dinge in der Nähe der sehr gute Mannschaft, aber von Tag zu Tag Ihr Standard beginnen könnte, um Stück für Stück verschieben, um die nicht-so-guten Bereich. Die menschliche Wahrnehmung von so genannten "guten" kann sehr einfach unbewusst zu verlagern. Eine Möglichkeit, dies zu verhindern, ist ein Bild von der Docht Sie in Ihren Experimenten verwendet zu nehmen, und vergleichen Sie alle Bilder nebeneinander. Oder zumindest zu einem Bild der Dochte, die sehr gut gearbeitet, und starren auf eine Weile vor dem Test PERS.

Ein weiterer wichtiger Punkt ist die Auswirkung auf die Berührung. Dies ist einfacher zu handhaben, denn das Ziel ist es, den Kontakt so sanft wie möglich zu machen. Wenn Sie nicht sehen, die Fliege den Kopf zu bewegen überhaupt, ist, dass die besten.

Der Hunger Bedingung ist die härteste Faktor zu kontrollieren. In vielen Geschmacks-oder Geruchssinn Verhaltens-Assays ist ein Hunger von 24 Stunden verwendet sehr oft. 24 Stunden kann sehr praktisch für Leute das Experiment zu tun, aber wenn Sie Ihre fliegt hinten in einem sehr guten Zustand, ist dies ein eher kurzer Zeitraum. Aber auch wenn Sie ein reichhaltiges fliegen Lebensmittel verwendet, und die Kontrolle der Dichte genau, kann das Fenster für die Prüfung PER von 36 Stunden auf 72 Stunden variieren. So, wie ein Experiment, ich muss sagen, es ist sehr unbequem für die Menschen. Es ist ein weiterer Faktor, dass es schwieriger für Experimentatoren machen. In der Tat würde es viele Partien, wo das Fenster für das Experiment könnte sehr kurz sein, oder vielleicht sogar überhaupt nicht existieren.

So gibt es einige große Hürden, die Sie haben, um durch zu gehen, aber das Wichtigste ist die positive und negative Kontrolle I erwähnt. Indem auf diese Norm sehr streng, werden Sie in der Lage sein, zuverlässige Daten-Sets zu sammeln.