Snuit Extension Response (PER) assay in Drosophila

Uithongering

1. De eerste, verhongeren de vlieg.
2. Leg een klein stukje van Kim-wipe doorweekt met water in een lege flacon.
3. Transfer 20-30 weldoorvoede vliegt naar de lege flacon.
4. Controleer om de 12 -24 uur om er zeker van het papier vochtig is.
5. Verhongeren het vliegen voor 36 tot 72 uur.

Bevestig de fly

1. Neem een ​​vlieg in een afzuiger.
2. Plaats een 200 ul geel tip over de opening. Tegelijkertijd flippen en blazen, kunt u knijp de vliegen in de gele tip.
3. Voorzichtig toe te passen wat lucht op de vlieg duwen tot een punt waar het niet kan bewegen.
4. Door het gebruik van een scheermes, een merkteken ongeveer ter oog van de vlieg, dan zuigen de vlieg terug en sneed de tip.
5. Voorzichtig terug blazen vliegen naar positie, maar vlak voor het bereiken van het einde, maak een schuin afsnijden op de plaats waar de proboscis zal worden gevestigd. U kunt dit doen zonder deze schuin afsnijden, maar het zou zeker de volgende proces gemakkelijker te maken.

Bereid sucrose wieken

1. Twist een 6 mm brede strook Kimwipes ® papier in een draad, en trek uit elkaar in kleine stukjes van de kegel-achtige vorm van Wick (<1 cm).
2. Deze kleine wieken werden ondergedompeld in sucrose oplossingen of water en aan de proboscis door het maken van contact.

Bereid controles en proefdieren

1. Voor het testen een tastants, geven een 4% sucrose oplossing voor het vliegen. Dit werkt als een positieve controle. Gooi alle vliegen die niet reageren.
2. Vervolgens testen dH ₂ 0 on the fly. Deze fungeren als een negatieve controle. Gooi het vliegen als het deed reageren.
3. Test deze controles na het testen van uw tastants.

In deze presentatie hebben we doorlopen alle stappen voor de Proboscis extensie respons test. De methode klinkt vrij eenvoudig, maar net als in veel ander gedrag testen, veel kleine dingen kunnen de test te voorkomen werken. We hebben meegemaakt veel van dergelijke stappen die zorgvuldige aandacht nodig hebben. Hier, ik reemphasize een aantal van de belangrijkste factoren.

Een zo'n factor is de vorm van de lont. Ik heb laten zien een paar van de goede voorbeelden, maar natuurlijk in werkelijkheid alles zou een continu spectrum tussen zeer goed en zeer slecht zijn. In het begin, gebruikt u mogelijk dingen dicht bij de zeer goede kant, maar dag na dag uw standaard kan gaan beetje bij beetje verschuiven naar de niet-zo-goed bereik. Menselijke waarneming van de zogenaamde "goed" kan zeer gemakkelijk onbewust verschuiven. Een manier om dit te voorkomen is om een ​​beeld te krijgen van de lont die u gebruikt in uw experimenten te nemen, en alle foto's naast elkaar vergelijken door. Of, in ieder geval neem een ​​foto van de lonten die werkte heel goed, en staar naar het voor een tijdje voordat het testen PERS.

Een ander belangrijk ding is de impact niveau van het contact. Dit is gemakkelijker om te gaan met omdat het doel is om het contact zo zacht mogelijk te maken. Als je de vlieg hoofd bewegen niet zien helemaal niet, dat is het beste.

De honger voorwaarde is de moeilijkste factor om te controleren. In veel smaak of geur gedrag testen, is een hongersnood van 24 uur zeer vaak gebruikt. 24 uur zou erg handig zijn voor mensen om het experiment te doen, maar als je je vliegt achter in een zeer goede staat, is dit een vrij korte periode. Maar zelfs als je een rijke vlieg voedsel gebruikt, en precies de controle van de dichtheid, kan het venster voor het testen van PER variëren van 36 uur tot 72 uur. Dus, als een experiment, ik moet zeggen dat het erg lastig voor mensen. Er is nog een factor die het moeilijker maken voor onderzoekers. Als een zaak van de feiten, zou er een groot aantal partijen, waarbij het venster voor het experiment zou kunnen worden zeer kort zijn, of misschien niet eens bestaan.

Dus er zijn een aantal belangrijke hindernissen je moet doorlopen, maar het belangrijkste is de positieve en negatieve controle die ik noemde. Door aan die standaard zeer strikt, zult u in staat om betrouwbare gegevens te verzamelen.