Submit
Browse  

The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Swedish was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE General

Tunna Sektionering av Slice Förberedelser för Immunohistokemi

1,2, 2

1Department of Medicine, Yonsei University College of Medicine, Severance Hospital, 2Department of Psychiatry, Harvard Medical School

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of   JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Recommend JoVE to Your Librarian

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 54.224.79.93, User IP: 54.224.79.93, User IP Hex: 920670045

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please or create an account with your institutional email address to access this content.

 

Video Article Chapters

Cite this Article: Tunna Sektionering av Slice Förberedelser för Immunohistokemi

Park, J., Cunningham, M. G. Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry. J. Vis. Exp. (3), e194, doi:10.3791/194 (2007).

Abstract: Tunna Sektionering av Slice Förberedelser för Immunohistokemi

Många undersökningar inom neurovetenskap, liksom andra discipliner, involvera studera små, men ändå makroskopiska bitar eller delar av vävnad som har bevarats, nyligen bort, eller exciderad men höll livskraftiga som i bit beredningar av hjärnvävnad. Efterföljande mikroskopiska studier av detta material kan vara en utmaning, eftersom vävnadsprover kan vara svårt att hantera. Visade här är en metod för att få tunna kryostatsnitt av vävnad med en tjocklek som kan variera från 0,2 till 5,0 mm. Vi skär rutinmässigt 400 mikron tjocka skivor Vibratome hjärnan seriellt till 5-10 mikron coronal kryostatsnitt. De skivor som vanligtvis först används för elektrofysiologi experiment och sedan kräver mikroskopisk analys av cytoarchitecture i regionen där inspelningarna observerades. Vi har konstruerat en enkel anordning som möjliggör kontrollerade och reproducerbara förberedelse och placering av vävnad skiva. Denna enhet består av en cylinder 5 cm i längd med en diameter på 1,2 cm, vilket fungerar som en frysning steg för segmentet. En ring glider tätt över cylindern ger väggarna runt segmentet gör att vävnaden att vara nedsänkt i frysning förening (t.ex. oktober). Detta är sedan snabbt fryses med krossad torris och den resulterande rån kan vara läge lätt för kryostat snittning. Tunna sektioner kan tina-monteras på bestruket diabilder att tillåta ytterligare studier som skall utföras, såsom olika färgning metoder, in situ hybridisering, eller immunohistokemi, vilket visas här.

Protocol: Tunna Sektionering av Slice Förberedelser för Immunohistokemi

  1. Förbered mögel från tejp för oktober plattform.
  2. Fyll formen med oktober Frysning inom kryostat eller genom att använda krossad torris.
  3. Ta bort tejpen runt frysta oktober plattform.
  4. Passa märken på frysning chuck och kryostat montering scen och lås i Chuck.
  5. Sektion genom oktober plattformen tills ytan är platt.
  6. Ta bort återuppstod oktober plattform och plats på kryostat frysning scenen.
  7. Placera vävnadsprov (tidigare frysförvarade med 30% glycerol eller sackaros i PBS) i oktober
  8. Förbered frysning kolumn med ytterring utskjutande ca 5 mm ovanför toppen av kolonnen bildar bra för oktober
  9. Sätt försiktigt vävnadsprov på mitten av frysning kolumn ytan och långsamt lägga oktober tills väl är fylld.
  10. Surround frysning kolumn med krossad torris. Vävnad och oktober bör helt frysning inom 20-60 sekunder.
  11. Som förberedelse ökar i temperatur kan den yttre ringen tas bort medan provet är fryst.
  12. Skjut urval av frysning kolumn åt sidan och placera i kryostat.
  13. Placera droppe oktober på ytan av oktober plattform och ställning prov (vävnad ned) tillämpar fast tryck. Exemplar kommer snabbt frysa på oktober plattform.
  14. Säkra chuck på kryostat montering scenen med justerade märken.
  15. Sektion genom oktober ytliga till vävnadsprov.
  16. Tina montera tunna sektioner på glasskivor och lagra frysta eller i rumstemperatur.
  17. Immunreaktioner kan utföras för vävnad monterad på glas diabilder.
  18. Reagens sammanställda på bild kan vara lätt upprörd, och kan omfattas om ljuskänsliga.
  19. Senare skeden av reaktionen är enkelt genom att vända glida in avfall kärl, fuktspridande bilden, och sedan tillämpa nästa reagens.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion: Tunna Sektionering av Slice Förberedelser för Immunohistokemi

Protokollet presenteras här ger forskare med en kortfattad och lätt att följa konturerna av hur man kan få tunna kryostatsnitt av små, svåra att hantera, vävnad bitar, t ex biopsier och skivor hjärnan för vidare studier som ska utföras, t.ex. olika färgning metoder, in situ hybridisering, eller immunohistokemi.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures: Tunna Sektionering av Slice Förberedelser för Immunohistokemi

Materials: Tunna Sektionering av Slice Förberedelser för Immunohistokemi

Name Company Catalog Number Comments
O. C. T. Ted Pella, Inc. 27050
Glycerol Solution 30% Glycerol Solution in PBS w/v
Sucrose Solution 30% Sucrose Solution in PBS w/v

References: Tunna Sektionering av Slice Förberedelser för Immunohistokemi

1. Scoutern, C.W., O' Connor, R., Cunningham, M. Perfusion fixation of research animals. Microsc. Today 14, 26-33 (2006)

2. Cunningham, M.G., Connor, C.M., Zhang, K., Benes, F.M. Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat. Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005)

Ask the Author: Tunna Sektionering av Slice Förberedelser för Immunohistokemi

2 Comments

Thank-you for posting this video. Your device seems to work well with small tissue, but what do you use for freezing whole adult rat brains? Is the powdered dry ice method sufficient alone to reduce freezing artifact if you are freezing a whole adult brain? Do you have an alternative procedure for these applications?

 

Much appreciated,


Neil

1

Reply

Posted by: AnonymousOctober 23, 2008, 4:04 AM

Hi Neil, you actually can get a pretty good freeze with finely powdered dry ice. Just cover and let freeze for 3-5 minutes.  I would recommend, however, immersing the whole brain in isopentane that has been chilled (~30 minutes) in dry ice.  Just leave the brain in isopentane for 30 seconds, otherwise it can distort and fracture.  You will then need to let the (very cold, -80 degrees) brain equilibrate (warm up) to your cryostat or microtome temperature in order for it to cut smoothly.
Good luck!
Miles

Miles G. Cunningham, MD PhD
Director, Laboratory for Neural Reconstruction
Administrative Director, McLean Fellowship in
Neuropsychiatry and Behavioral Neurology
Chair, ANPA Programs Committee
Executive Director, Asniya, Inc.
MRC 333, McLean Hospital
Harvard Medical School
115 Mill Street
Belmont, MA  02478
office:     617.855.2051
fax:         617.855.3199
page:      617.855.2000

1.1

Reply

Posted by: AnonymousOctober 24, 2008, 5:18 PM

Thanks for this very helpful video. I'm interested in knowing where you purchased the freezing rod and ring that is used to form the sample mold. Alternatively what metal is the rod made of and is there any significance to the length of the freezing rod used?

2

Reply

Posted by: Ellen Y.April 23, 2010, 3:57 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter