Submit
Browse  

The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Arabic was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE General

عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

, , ,

Centro de Investigação em Ciências da Saúde, Faculdade de Ciências da Saúde, Universidade da Beira Interior

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of   JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Recommend JoVE to Your Librarian

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 54.242.188.217, User IP: 54.242.188.217, User IP Hex: 921877721

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please or create an account with your institutional email address to access this content.

 

Video Article Chapters

Cite this Article: عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

Ribeiro, M. P., Relvas, R., Chiquita, S., Correia, I. J. Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC). J. Vis. Exp. (41), e1940, doi:10.3791/1940 (2010).

Abstract: عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

الحبل السري البشري (جامعة كاليفورنيا) هو عينة البيولوجية التي يمكن الحصول عليها بسهولة بعد الولادة. هذه العينة البيولوجية ، معظم الوقت ، وتجاهل جمعها لا ينطوي على أي خطر إضافة إلى صحة الأطفال حديثي الولادة أو والدة. وعلاوة على ذلك لا تثار مخاوف أخلاقية. وتتألف لجامعة كاليفورنيا واحد واثنين من الشرايين الوريد من الخلايا البطانية التي على حد سواء (ECS)

Protocol: عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

  1. ويتم الحصول على قطع الشرايين من جامعة كاليفورنيا من 3-7 سم.
  2. تمت إزالة بعناية هلام وارتون الذي يحيط بقطع الشرايين مع المقص.
  3. تم إدخال إبرة حادة في نهاية وجود القطر الخارجي لل1MM 0.6 - 7mm حول واحدة من نهاية تشريح الشرايين.
  4. لإزالة ما تبقى في الدم داخل الأوعية ، وتعقد عموديا الشرايين وperfused مع حوالي 20 إلى 40 مل ، المحلول الملحي الفيزيولوجي (PSS) ، وذلك باستخدام الحقنة 20 مل متصلة إبرة. إذا لزم الأمر ، وتكرر هذه الخطوة الغسيل لعدة مرات.
  5. وتكرر نفس الإجراء باستخدام RPMI 1640 تستكمل مع 10 ٪ من مصل بقري جنيني (FBS).
  6. وأغلقت واحدة من أقصى الأوعية الدموية. تم توصيل حقنة 10 مل إلى الإبرة وperfused مع 3 مل من كولاجيناز النوع الأول (800 وحدة / مل في محلول ملح التخزين المؤقت للهانك (HBSS)). ثم extremityof الأخرى كما أغلقت السفينة.
  7. وقد حضنت السفينة مع الفوسفات مخزنة المحلول الملحي (PBS) ، لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع الانفعالات.
  8. بعد أن ينتهي من قطع السفينة إلى جمع SMCs الحرة. ويروي شرايين مع ما يقرب من 20 حتي 40 مل من DMEM - F12 تستكمل مع 5 ٪ من FBS والمضادات الحيوية لأنبوب 50 مل.
  9. وكان طرد الأنبوب في درجة حرارة الغرفة (250 غرام ، 8 دقائق) ، وكان بيليه معلق الخلية في 5 مل من DMEM - F12 تستكمل مع 5 ٪ من FBS.
  10. تم نقل تعليق خلية إلى المغلفة الكولاجين T - القارورة والمحتضنة في 37 درجة مئوية ، في ظل مناخ 5 ٪ CO 2 مرطب.
  11. بعد إزالة 5 16 ساعة ، والخلايا غير ملتصقة وdrebis الخلوية ، واضافة 5 مل من المتوسط ​​الثقافة وحضنت الخلايا عند 37 درجة مئوية ، في ظل مناخ 5 ٪ CO 2 مرطب.
  12. تم تغيير ثقافة وسائل الإعلام كل خلية 2 3 أيام ، حتى وصلت SMCs التقاء.
  13. بعد تحقيق التقاء الخلايا أنها كانت المصنفة 25 سم الى اثنين أو ثلاثة من 2 T - القوارير.

تنظيف

  1. تخلص من الإبر الحادة في حاويات.
  2. تخلص من المحاقن في حاوية بيولوجية كبيرة.
  3. تطرح جميع الأنسجة داخل حقيبة صغيرة بيولوجية. إغلاق الكيس والتجميد في -20 درجة مئوية حتى الحرق.
  4. نقع في جميع الصكوك مبيد للفيروس على الأقل 10 دقيقة.
  5. عودة إلى البراد وسائط غير مستخدمة.
  6. التخلص من النفايات في قفازات واقية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion: عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

يمكن استخدام SMC كنماذج لفحوصات المخدرات في المستقبل مع المضيقة ، لعزل وتوصيف هيكليا قنوات الكالسيوم من نوع L ، لدراسة الجوانب الخلوية والجزيئية وظيفة الأوعية الدموية واستخدامها في هندسة الأنسجة. ECS SMCs وأساسية لتطوير المواد الحيوية الجديدة التي يمكن استخدامها في إنتاج شبه الأوعية الدموية الاصطناعية لاستخدامها في البشر.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures: عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

Acknowledgements: عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

مستشفى Lusitano أماتو ، كاستيلو برانكو البرتغال.
مستشفى سوزا مارتينز ، جواردا البرتغال.

Materials: عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

Name Company Catalog Number Comments
DMEM-F12 Sigma-Aldrich 095K8311
Fetal bovine serum (FBS) Biochrom AG 0117T
RPMI 1640 GIBCO, by Life Technologies 3103806
Collagen Sigma-Aldrich 067K2302
Antibiotic 10 μL/ 1 mL of medium
Scissors Sterilized
Needle Diameter of 0.6-1mm
Syringe 10 - 20 mL
Physiological Saline Solution (PSS) 20-40 mL per artery
Collagenase type I Sigma-Aldrich 047K1052 3 mL per artery
Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) Diluted collagenase
Phosphate buffered saline solution (PBS) Warmed to 37°C

References: عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

  1. Van Rijen, H. et al., Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology 272 (1 Pt 1), C117 (1997).
  2. Martín de Llano, J. et al., Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research 149 (1), 1-9 (2007).
  3. Jaffe, E.A., Nachman, R.L., Becker, C.G., & Minick, C.R., Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest 52 (11), 2745-2756 (1973).
  4. Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., & Verde, I., Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal 45 (3), 175-184 (2009).

Ask the Author: عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

0 Comments

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter